ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА, БОТУЛИЗМА, ПСЕВДОМОНОЗА И ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ Российский патент 1997 года по МПК A61K39/295 A61K39/116 A61K39/08 A61K39/104 A61K39/295 A61K39/175 A61K39/23 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности касается ассоциированной вакцины, применяемой для специфической профилактики вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных.

Известны биопрепараты, используемые для профилактики каждого инфекционного заболевания плотоядных животных.

Так для профилактики вирусного энтерита норок применяют вакцинные препараты на основе вакцинного штамма virus enteritis lutreolarum "Родники-1631" (1).

Для профилактики ботулизма норок используют анатоксин-вакцину из штамма Cl. botulinum типа C (2).

Псевдомоноз пушных зверей профилактируют, используя вакцинные препараты на основе антигенов из штаммов Pseudomonas aeruginosa (3).

Для профилактики чумы плотоядных применяют вакцину, содержащую в основе суспензию аттенуированного штамма virus disfemper canine "ЭПМ" (4).

Однако биопрепараты против отдельных инфекционных болезней не обеспечивают максимального профилактического эффекта, так как все чаще встречается смешанное течение инфекционных заболеваний, при котором заболевание и гибель зверей резко возрастает и достигает 90%
Кроме того, необходимость проведения профилактических обработок против каждой инфекции в отдельности (против вирусного энтерита дважды) по крайней мере в 4 раза увеличивает затраты труда зооветеринарных специалистов и обслуживающего персонала зверохозяйств, растягивает сроки создания иммунитета, вызывает различные стрессовые состояния животных, что может привести к различным нежелательным результатам иммунологического процесса.

Для успешного решения задач по дальнейшему развитию клеточного звероводства, для снижения и ликвидации потерь от инфекционных болезней зверей очень важное значение имеет разработка и применение ассоциированных вакцин, позволяющих проводить профилактические мероприятия одновременно против основных инфекционных болезней пушных зверей.

Известна вакцина против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных, содержащая антигены энтерита, ботулизма, псевдомоноза, чумы и вспомогательные вещества (5).

Недостатком данной вакцины является невысокая ее иммуногенная активность.

Целью изобретения является повышение иммуногенной активности вакцины.

Указанная цель достигается тем, что из антигенов энтерита вакцина содержит суспензию инактивированной культуры штамма virus enteritis lutreo larum "Родники-1631" с биологической и гемагглютинирующей активностью и 1-128-512 в РГА, из ботулинического антигена ботулинический анатоксин Cl. botulinum N59 с активностью 5-10 ЕС/см³ осажденный на гидрате окиси алюминия, из антигена псевдомоноза смешанную суспензию инактивированных культур штаммов Ps. aerusinosa 381-П-06 N40, 1677-08 N 63, "Дн"-05 N 77 с концентрацией микробных клеток 9-11 млрд./см³ из антигена чумы лиофилизированную культуру штамма virus distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности 10^3,0-4,0 с сорбит-желатозным стабилизатором при следующем соотношении компонентов, мас.

Суспензия инактивированной культуры штамма virus enteritis lutreolarum "Родники-1631" с биологической и гемагглютинирующей активностью 10^4,5-5,5 и 1-128-512 21,43 22,22
Ботулинический анатоксин типа С Cl. botulinum N59 с активностью 5-10 ЕС/см³, осажденный на гидрате окиси алюминия 27,78 28,57
Смешанная суспензия инактивированных культур штаммов Ps. aerusinosa 381-П-06 N40, 1677-08 N63 и "Дн"-05 N77 с концентрацией микробных клеток 9-11 млрд./см³ 21,43 22,22
Лиофилизированная вирусная культуральная суспензия штамма virus distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активностью с сорбит-желатозным стабилизатором 27,78 28,57
Использованные для изготовления вакцины штаммы микроорганизмов и вирусов депонированы в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов.

Пример 1. Вакцину против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных получают из жидкого компонента, содержащего антигены вирусного энтерита, ботулизма и псевдомоноза норок и сухого компонента на основе антигена чумы плотоядных с последующим их смешиванием.

Вирус энтерита норок выращивают в первично-трипсинизированной культуре клеток почки котенка в питательной среде на основе гидролизата лактальбумина (ГЛА), среды 199, среды Игла и сыворотки крови крупного рогатого скота. Полученный вируссодержащий материал замораживают, а затем оставляют для размораживания при комнатной температуре. Полученный вирусный материал с биологической активностью (гемагглютинирующая активность в разведении 1-128 512) инактивируют добавлением формальдегида.

Для получения ботулинического анатоксина культуру Cl. botulinum типа С штамма N59 выращивают в ростовой среде Хоттингера с добавлением 0,5-0,6% глюкозы. На 5-8 сутки выращивания культуральную жидкость фильтруют, определяют биологическую активность, равную 5-10 ЕС/см³, вносят формалин и выдерживают в течение 30-35 дней. После проверки на стерильность и безвредность к формалинизированной культуре Cl. botulinum добавляют гель гидрата окиси алюминия для сорбции и концентрации анатоксина, затем удаляют надосадочную жидкость, а осажденный антиген промывают физиологическим раствором.

Бактериальные культуры штаммов Ps. aeruginosa 381-П-06 N40, 1677-08 N63 и "Дн"-05 N77 выращивают раздельно в мясо-пептонном бульоне или бульоне Хоттингера при температуре 37±0,5^oС до накопления в 1 см³ 20-25 млрд. микробных клеток. После выращивания культуры объединяют в эффективном соотношении и с помощью физиологического раствора снижают концентрацию смешанного антигена до 9-11 млрд. микробных клеток в 1 см³ и инактивируют добавлением формалина.

Аттенуированный штамм virus distemper canine "ЭПМ" выращивают в первично-трипсинизированной культуре клеток японских перепелов в питательной среде на основе гидролизата лактальбумина, среды 199 и сыворотки крови крупного рогатого скота с добавлением антибиотиков. После полного развития ЦПД вируссодержащую культуральную жидкость охлаждают и затем замораживают с последующим оттаиванием при комнатной температуре. Активность полученного вируса чумы плотоядных составляет . К культуральной суспензии вируса чумы плотоядных добавляют сорбит, желатозу и антибиотики в оптимальном количестве. Полученную смесь охлаждают, расфасовывают и лиофилизируют.

Готовят три серии вакцины против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных. Для этого лиофилизированную вирусную культуральную суспензию штамма virus distemper canine "ЭПМ" разводят жидким компонентом вакцины, содержащим суспензию инактивированной культуры штамма virus enteritis lutreolarum "Родники-1631", ботулинический анатоксин типа С Cl. botulinum N59 и смешанную суспензию инактивированных культур штаммов Ps. aeruginosa 381-П-06 N40, 1677-08 N63 и "Дн"-05 N77.

Входящие в жидкий компонент составляющие его предварительно объединяют в оптимальном соотношении, добавляют антибиотики и для нейтрализации остаточного формальдегида бисульфит натрия и все тщательно перемешивают.

Вакцина против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных серии 1 имеет следующий компонентный состав, мас.

Суспензия инактивированной культуры штамма virus enteritis lutreolarum "Родники-1631" с биологической и гемагглюнирующей активностью (1:512) 21,43
Биотулинический анатоксин типа С Cl. botulinum N59 с активностью 10 ЕС/см³, осажденный на гидрате окиси алюминия 28,57
Смешанная суспензия инактивированных культур штаммов Ps. aeruginosa 381-П-06 N40, 1677-08 N63 и "Дн"-05 N77 с концентрацией микробных клеток 11 млрд./см³ 21,43
Лиофилизированная вирусная культуральная суспензия штамма virus distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности сорбит-желатозным стабилизатором 28,57
Вакцина против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных серии 2 имеет следующий компонентный состав, мас.

Суспензия инактивированной культуры штамма virus enteritis lutreolarum "Родники-1631" с биологической и гемагглютинирующей активностью (1:256) 21,875
Ботулинический анатоксин типа С Cl. botulinum N59 с активностью 7,5 ЕС/см³, осажденный на гидрате окиси алюминия 28,125
Смешанная суспензия инактивированных культур штаммов Ps. aeruginosa 381-П-06 N40, 1677-08 N63 и "Дн"-05 N77 с концентрацией микробных клеток 10 млрд./см³ 21,875
Лиофилизированная вирусная культуральная суспензия штамма virus distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности с сорбит-желатозным стабилизатором 28,125
Вакцина против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных серии 3 имеет следующий компонентный состав, мас.

Суспензия инактивированной культуры штамма virus enteritis lutreolarum "Родники-1631" с биологической и гемагглютинирующей активностью (1:128) 22,22
Ботулинический анатоксин типа С Cl. botulinum N59 с активностью 5 ЕС/см³, осажденный на гидрате окиси алюминия 27,78
Смешанная суспензия инактивированных культур штаммов Ps. aeruginosa 381-П-06 N40, 1677-08 N63 и "Дн"-05 N77 с концентрацией микробных клеток 9 млрд./см³ 22,22
Лиофилизированная вирусная культуральная суспензия штамма virus distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности с сорбит-желатозным стабилизатором 27,78
Готовая вакцина представляет собой гомогенную суспензию от розового до серовато-малинового цвета. При отстаивании на дно флакона выпадает рыхлый осадок, легко разбивающийся при встряхивании. Вакцину хранят при температуре от 2 до 6^oC. Срок годности 12 месяцев.

Пример 2. Изучают безвредность вакцины серий 1-3 против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных на белых мышах массой 14-16 г, морских свинках массой 300-350 г, норках 4-месячного возраста, хорьках 6-месячного возраста при введении различных доз вакцины (см. табл. 1).

Из табл. 1 видно, что вакцина является безвредной для животных. В результате наблюдения в течение 21 дня после их вакцинации животные не проявили признаков угнетения и остались живыми.

Пример 3. Оценку иммуногенной активности вакцины против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных серии 1 и 3 проводят на норках, хорьках, морских свинках и белых мышах. Животных вакцинируют однократно в различных дозах, а в последующем, на 21 сутки, заражают соответствующими культурами вирулентных штаммов. Контрольных животных не иммунизируют (см. табл. 2).

Данные табл. 2 показывают, что вакцина против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных серии 1 и 3 способствуют созданию у животных надежного иммунитета к последующему заражению.

Пример 4. Профилактику вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных проводят путем подкожного или внутримышечного введения вакцины серии 2 клинически здоровым животным в объеме 0,9 3,2 см³, при этом мелким зверям (норки, хорьки) препарат вводят в объем 0,9 1,1 см³, крупным плотоядным (песцы и лисицы) 2,8 3,2 см³.

Вакцинируют норок и хорьков в возрасте 45-60 дней, песцов и лисиц за месяц до гона (декабрь, январь). Влияние возраста вакцинированных щенков норок и хорьков на их устойчивость к контрольному заражению изучают на животных разных возрастов, устойчивость песцов к контрольному заражению изучают в ноябре-декабре на щенках 6-7 месяцев. Параллельно испытывают соответствующие моновалентные препараты. Результаты контрольного заражения норок представлены в табл. 3, хорьков в табл. 4.

Использование: биотехнология, ассоциированная вакцина, специфическая профилактика вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных. Сущность изобретения: вакцина содержит в качестве антигена вирусного энтерита суспензию инактивированной культуры штамма "Родники-1631" с биологической активностью и гемагглютинирующей активностью 1-128 - 512 в РГА, из ботулинического антигена - ботулинический анатоксин типа С штамма ВГНКИ N 59 с активностью 5-10 ЕС в 1 см³, осажденный на гидрате окиси алюминия, из антигена псевдомоноза - смешанную суспензию инактивированных культур штаммов ВГНКИ 381-П-06 N 40, 1677-08 N 63 и "Дн" - 05 N 77 с концентрацией микробных клеток 9-11 млрд./см³, из антигена чумы - лиофилизированную культуру штамма "ЭПМ" с титром инфекционной активности 10^3,0-4,0 с сорбит-желатозным стабилизатором. Указанные компоненты, входящие в состав данной вакцины, подобраны в эффективных соотношениях. Вакцину применяют плотоядным животным в оптимальные сроки в эффективных дозах. Использование вакцины против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных позволит своевременно и в сжатые сроки проводить специфическую профилактику этих инфекционных болезней, повысить производительность труда зооветспециалистов и обслуживающего персонала, сократить трудовые и материальные затраты в 3-4 раза. 4 табл.

Вакцина против вирусного энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы плотоядных, содержащая антигены возбудителей энтерита, ботулизма, псевдомоноза и чумы, отличающаяся тем, что из антигенов возбудителя энтерита она содержит суспензию инактивированной культуры штамма Virus enteritis lutreo larum "Родники-1631" с биологической и гемаглютинирующей активностью 10^4,5-5,5ИД_50/см3 и 1 (128 512) в РГА, из антигенов возбудителя ботулизма ботулинический анатоксин типа С из штамма Clostridium botulinum N 59 с активностью 5 10 ЕС/см³, осажденный на гидрате окиси алюминия, из антигена возбудителя псевдомоноза смешанную суспензию инактивированных культур штаммов Pseudomonas aeruginosa 381-П-06 N 40, 1677-08 N 63 и "Дн"-05 N 77 с концентрацией микробных клеток 9 11 млрд/см³, из антигена возбудителя чумы лиофилизированную культуру штамма Virus distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности 10^3,0-4,0ТЦД_50/см3 с сорбит-желатозным стабилизатором при следующем соотношении компонентов, мас.

Суспензия инактивированной культуры штамма Virus enteritis lutreo larum "Родники-1631" с биологической и гемагглютинирующей активностью 10^4,5-5,5ИД_50/см3, 1 (128 512) в РГА 21,43 22,22
Ботулинический анатоксин типа С из штамма Clostridium botulinum N 59 с активностью 5 10 ЕС/см³, осажденный на гидрате алюминия 27,78 - 28,57
Смешанная суспензия инактивированных культур штаммов Pseudomonas aeruginosa 381-П-06 N 40, 1677-08 N 63 и "Дн"-05 N 77 с концентрацией микробных клеток 9 11 млрд/см³ 21,43 22,22
Лиофилизированная вирусная культура штамма Virus distemper canine "ЭПМ" с титром инфекционной активности 10^3,0-4,0ТЦД_50/см3 с сорбит-желатозным стабилизатором 27,78 28,57