Способ определения повреждения паренхимы печени Советский патент 1987 года по МПК G01N33/50 

1 , 1

Изобретение относится к медици- не, а именно к способам диагностики тяжести гепатоцеллюлярных повреждений при острых и хронических заболеваниях печени, и может найти применение в клинической и экспериментальной гепатологии.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет количественной оценки повреждения ткани на основе определения скорости потребления ею кислорода в присутствии тетраметилпарафенилендиамина (ТМФД) в пробах с добавлением цито- хрома-с и без него, с дальнейшим вычислением отношения первого показателя к второму, по величине которого определяют повреждение органа.

Способ осуществляют следующим образом.

Для измерения ТМФД- и цитохром- -с-оксидазной активности гомогена- та печени забирают кусочек органа и в гомогенизаторе Даунса приготовляют гомогенат в среде, состоящей из 0,25 М сахарозы, ЭДТА, 0,01 М трис-НС -буфера (рН 7,6-7,8) Отношение ткани печени и среды составляло 1:2 масса/объем. Полярографический анализ проводят со стандартным платиновым электродом. Кларка закрытого типа. В полярографическую кювету объемом 1,1 мл с трис- -НС1-буфером () вносят полученный гомогенат в расчете 1-2 мг белка на данный объем кюветы. После чего записывают скорость потребления кислорода, Аналогичные записи проводят при последовательном добавлении в полярографическую кювету раствора аскорбата натрия - конеч- ная концентрация 2 мМ, ТМФД и ци- тохрома-с (конечная концентрация 1 мкМ и 5 мкМ соответственно). В полярографической кювете рассчитывали цирохром-с- и ТМ Д-оксидазную активности на 1 мг белка за вычетом аскорбат-зависимого потребления кислорода. В результате анализа вычисляют скорость потребления тканью печени кислорода в прису гствии ТМФД и цитохрома-с и в присутствии только одного ТМФД. Далее рассчитьшают отношение этих двух показателей, которое в норме равно 1,9 ед., что соответствует 1,910 жизнеспо об- ных гепатоцитов, выделенных на 1 г ткани (практически 100% жизнеспособ ных клеток). Если отношение превы870072

гаает значение 1,9 ед., то это свидетельствует о той или иной степени повреждения печени.

Примеры осуществления способа. с Прим,ер. В гомогенате печени крыс, затравленных гепатоторопным ядом СС14 в дозе 0,25 мл/100 г веса тела, измеряли ТМФД- и цитохром-с- оксидазные активности и их отношение

10 (коэффициент),как это описано выше. При исследовании через 12 ч после затравки ядом коэффициент составляет 7,2+0,05 ед., а количество жизнеспособных клеток печени в 1 г J5 печени - 0,69-10, т.е. 36%. К 24 ч коэффициент достигает 10,9 1:0,4 ед. Соответственно этому сни- жается процент жизнеспособных гепатоцитов до 25% (.0,47 -1 О Сжизнеспо20 собньк клеток в 1 г печени).

Пример 2. С целью создания модели механической желтухи у крыс перевязывали общий желчный проток. Печень подвергали исследованию через

7 дней после операции, как это описано в примере № 1. У этих животных коэффициент составлял 9,82±0,03 ед. при этом жизнеспособные гепатоциты составляли 24% (0,46-10).

30 ПримерЗ. Больная Велихано- ва Р.К., 41 г., диагноз: желчно-каменная болезнь. Течение заболевания неосложненное, жалоб в анамнезе не отмечалось, функциональные печеноч35 ные пробы без отклонений от нормы, диагноз установлен на основании рентгенологического обследования, больная оперирована в плановом порядке. Это дало основание принять коэффици40 ент цитохром-с- и ТМФД-оксидазной активности у данной больной за относительную норму. Кусочек ткани печени весом до 1,5-2 г забирали путем краевой клиновидной резекции печени

45 во время оперативного вмешательства. Коэффициент определяли, как это описано в примере 1. Величина коэффициента сост авляла 2,5 ед., что соответствовало 95% жизнеспособных кле50

Предлагаемый способ является высокочувствительном методом количественной оценки степени гепатоцеллюлярных повреждений, его использование е позволяет ускорить получение информации о степени вовлечения органа (печени) в патологический процесс: дает возможность с объективных позиций решать вопрос о выборе методов консервативной терапии и хирургического лечения заболеваний печени и желчных путей, острой печеночной недостаточности, оценить эффективность проводимого лечения, прогнозировать дальнейшее течение заболевания. Данный способ технически легко и быстро (в течение 20 мин) выполним, не требуется использования дорогостоящей аппаратуры, благодаря чему его целесообразно пшроко использовать в условиях клиники и эксперимента. Ф о р м у л а из обр е т е н и я

Способ определения повреждения паренхимы печени путем биохимического исследования гомогената ткани органа, отличающийся теМ, что, с целью повышения точности способа за счет количественной оценки

повреждения ткани, определяют скорость потребления ею кислорода в присутствии тетраметилпарафенилен- диамина в пробах с добавлением цито- хрома-с и без него, далее рассчитывают величину отношения пер - вого показателя к второму и при увеличении этого зна - чения относительно нормы оп - ределяют поврезвдение паренхи мы печени.

Изобретение относится к меди- . дине, а именно к способам диагности- ки тяжести гепатоделлюлярных повреждений при острых и хронических заболеваниях печени, и может применяться в клинической и экспериментальной гепатологии. Целью изобретения является повьшение точности способа. Для измерения ТМФД- и цитохром-с-ок- сидазной активности забирают кусочек печени и в гомогенизаторе Даунса по- лучают гомогенат в среде сахарозы. ЭДТА и трисбуфера (рН 7,6-7,8). Отношение ткани печени и среды составляет 1:2 масса/объем. Полярографический анализ проводят со стандартным платиновым электродом Кларка закрытого типа. В полярографическую кювету объемом 1,1 мл с трис-НС1-буфером ( с) вносят полученный гомогенат в расчете 1-2 мг белка на данный объем кюветы, записывают скорость потребления кислорода. Аналогичные записи проводят при последовательном добавлении в кювету раствора аскор- бата натрия - конечная концентрация 2 мМ, ТМФД и цитохрома-с (конечная концентрация 1 мкМ и 5 мкМ, соответственно). В полярографической кювете рассчитывают цитохром-с и ТМФД- оксидадную активности на 1 мг белка за вычетом аскорбат - зависимого потребления кислорода. Вычисляют скорость потребления тканью печени кислорода в присутствии ТМФД и цитохрома-с и в присутствии только ТМФД. Рассчитывают отношение этих двух показателей, которое в норме равно 1,9 ед. Если отношение превыгтает значение 1,9 ед., то это свидетельст- / вует о той или иной степени повреждения печени. (ТМФД-тетраметилпара- фенилендиамин). о. (Л