Способ отбраковки легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных молочнокислых стрептококков Советский патент 1987 года по МПК C12N1/00 

Изобретение относится к сыроделию и может быть использовано в селекции мезофильных молочно-кислых стрептококков, включаемых в состав заквасок для сыров.

Целью изобретения является создание более простого способа легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Клетки исследуемой культуры мезофильных молочно-кислых стрептококков находящиеся в начале логарифмической фазы роста (3-4-часовая бульонная культура), отделяют от питательной среды, суспендируют в стерильном солевом растворе с рН 6,8-7,2, облучают УФ-излучением дозой 25 Дж-м , помещают в питательный бульон и инкубируют при температуре, оптимальной для роста культуры (25°С для штаммов вида С. creraoris и 30°С для штаммов вида S. lactis и S. lactis subsp. di acetylactis). В процессе инкубации регистрируют рост культуры по изменению величины оптической плотности контролируемой смеси (или интенсив- ности светорассеяния) во времени.

В период от 1,0 до 2,5 ч от начала инкубации облученных клеток (в зависимости от штаммовой специфичности) у легкоиндуцируемых лизогенных культур при указанной дозе УФ-облу- чения наблюдается временное уменьшение или торможение оптической плотности (или светорассеяния), связанное с лизисом определенной части клеточной популяции под действием индуцированного умеренного фага, ta- кие культуры не следует включать в состав заквасок для сыроделия как потенциально опасные с точки зрения продукции бактериофагов.

Пример. Выявление легкоиндуцируемых лизогенных культур тур- бидиметрическим методом с помощью фотоэлектрокалориметра. Пробирку со стерильным бульоном, приготовлен- ным из обезжиренного молока, гидро- лизованного панкреатином (среда БГМ) инокулируют 1 мл 18-часовой культуры производственного штамма S.lactis 94 и инкубируют 3 ч при . Клетки собирают центрифугированием (10 мин при 5000 об/мин ) и ресуспендируют в стерильном физиологическом растворе до плотности популяции около 5

0

15

0

5

5

п

, г

30

35

.мл . 9 мл полученной суспензии в стерильной чашке Петри (диаметр 93 мм) подвергают УФ-облучению дозой 25 постоянном перемешивании с помощью магнитной мешалки. Источником УФ-излучения служит бактерицидная лампа БУВ-15.

Аналогичным образом готовят и облучают клеточные суспензии производственных штаммов S.lactis 350, S.cre- moris 49 и S.lactis subsp. diacety- lactis 625 . Сразу после облучения 2 мл клеточной суспензии смешивают с 2 мл среды БГМ двойной концентрации в- стерильной оптической кювете (длина оптического пути 10 мм) с крьш1кой, инкубируют 3 ч при 25 С (S. crenoris) или при 30°С (остальные штаммы стрептококков). Через каждые 15 мин инкубации измеряют оптическую плотность полученной смеси с помощью электрофотоколори-- метра КФК КЛ 4,2 (перед каждым измерением смесь в кюветах перемешивают с помощью магнитной мешалки).

На фиг. 1- представлены полученные графики изменения оптической плотности облученных культур в зависимости от времени инкубации. Из представленных графиков видно, что штаммы S. lactis 94 и S.cremoris 49 легко индуцируются, а штаммы S.lactis 350 иS.lactis subsp. diacetylactis 625 не индуцируются при данной дозе УФ-излу- ченйя. Таким образом, штаммы S.lactis 94 и S.cremoris 49 не рекомендуется включать в состав заквасок для сыроделия.

П р и м е р 2. Выявление легкоин-т дуцируемых лизогенных культур с помощью автоматизированной оптической установки, разработанной в Алтайском филиале ВНИИМС. Суспензию клеток исследуемых молочно-кислых стрептококков S.lactis (индивидуальные штаммы 94 и 350), приготовленную и облученную УФ-излучением, как указано в примере 1, смешивают с равным объемом среды БГМ двойной концентрации,- помещают в стерильную оптическую кювету, расположенную в термостатиро-- ванном блоке и оснащенную устройством, обеспечивающим непрерывное перемешивание культуральной среды, и инкубируют 3 ч при . В процессе инкубации через каждые 3 мин проводят автоматическое измерение оптической плотности смеси с помощью

управляющей программы компьютера с одновременной выдачей данных на циф- ропечать. Полученные таким образом результаты измерений оптической плот- ности культур S.lactis 94 и 350 пред- 5 ставлены в виде графиков на фиг.2. Они не отличаются от результатов, полученных ручным способом для соответствующих штаммов мезофильных мо- лочно-кислых стрептококков (пример 1)ЛО

П р и м е р 3. Приготовление за- квасочной комбинации и сухого бактериального препарата. Производственные штаммы мезофильных молочнокислых стрептококков S.lactis 94, S.lactis 5 198, S.lactis 203, , S.cremoris 49 S.lactis subsp. diacetylactis 407, S.lactis subsp. diacetylactis 625, входящие в состав заквасочной комбинации, проверяют предлагаемым спосо бом на наличие легкоиндуцируемого лизогенного состояния. Штаммы S.lactis 94 и S.cremoris 49, оказавшиеся легкоиндуцируемыми лизогенными стрептококками (примеры 1 и 2), исключают из состава закваски для сыров как потенциально опасные в отношении продукции бактериофага на производстве. Взамен их в состав заквасочной комбинации вводят биологически совмес- тимые штаммы S.lactis 350 и S.cremoris ЗМ-5, аналогичные по производственно ценным свойствам исключенным штаммам, но не дающие реакции фаголицируемых лизогенных штаммов мезофи ных молочно-кислых стрептококков, представляющих потенциальную опасность для сыроделия, не требуется личия дорогостоящего электронного микроскопа и проведения сложных и трудоемких операций, связанных с злектронно-микроскопическим исслед ванием бактериальных клеток. Приме нение простого, широко используемо в микробиологической практике опти ческого метода контроля роста куль тур и простая дешевая аппаратура (ф тоэлектрокалориметр любой марки) по воляют упростить процесс отбраковки При этом появляется возможность ав матизации способа, что облегчает эк плуатацию соответствующей аппаратур

-20 Формула изобретени

1. Способ отбраковки легкоиндуци руемых лизо.генных штаммов мезофильн молочно-кислых стрептококков, заклю чающийся в культивировании бактерий до достижения ими логарифмической ф зы роста, отборе проб после культив рования и последующей оценке культу для выявления пригодных для дальней шего использования, отличающийся тем, что, с целью упроще ния оценки, культуру стрептококков после отбора помещают в солевой рас вор с рН 6,8-7,2 и облучают УФ-излу

зиса при УФ-облучении дозой 25 Дж-м 35 чением дозой 25 Дж-.м , после чего В производственной лаборатории -биопрепаратов Алтайского филиала ВНЙИМСа на основе указанной заквасочной комбинации выработали партию

помещают в питательный бульон и инк бируют при оптимальной температуре роста, оценивая ее развитие по изме нению оптической плотности полученн

сухого бактериального препарата № 3М.40 го раствора, а отбраковку осуществПрепарат разослан на сыродельные заводы Западной Сибири и Казахстана для использования при производстве твердых сычужных сыров с низкой температурой второго нагревания.

Преимущество способа заключается в том, что для выявления легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков, представляющих потенциальную опасность для сыроделия, не требуется наличия дорогостоящего электронного микроскопа и проведения сложных и трудоемких операций, связанных с злектронно-микроскопическим исследованием бактериальных клеток. Применение простого, широко используемого в микробиологической практике оптического метода контроля роста культур и простая дешевая аппаратура (фо- тоэлектрокалориметр любой марки) позволяют упростить процесс отбраковки. При этом появляется возможность автоматизации способа, что облегчает эксплуатацию соответствующей аппаратуры.

5 20 Формула изобретения

1. Способ отбраковки легкоиндуцируемых лизо.генных штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков, заключающийся в культивировании бактерий до достижения ими логарифмической фазы роста, отборе проб после культивирования и последующей оценке культур для выявления пригодных для дальнейшего использования, отличающийся тем, что, с целью упрощения оценки, культуру стрептококков после отбора помещают в солевой раствор с рН 6,8-7,2 и облучают УФ-излучением дозой 25 Дж-.м , после чего

помещают в питательный бульон и инкубируют при оптимальной температуре роста, оценивая ее развитие по изменению оптической плотности полученно

ляют по результату сравнения измеренного значения по отношению к заданному значению.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве параметра оценки используется светорассеяние полученного раствора.

hi ) )J id is ko i5 4t j Время, V Фие.)

Изобретение относится к сыроде- ланию, может быть использовано в селекции МОЛОЧНО-КИСЛЫХ бактерий, включаемых в состав заквайок для сыров, и позволяет упростить оценку легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезо- фильных МОЛОЧНО-КИСЛЫХ стрептококков. Исследуемые штаммы культивируют до логарифмической фазы роста, ресуспен- дируют в солевом раствореj облучают . УФ-излучением дозой 25 Дж-м и куль- тивируют в питательном бульоне при оптимальной температуре. О фаголизисе культур судят по их ростовой реакции в течение 2-3 ч после облучения, оцениваемой по временному иймененик (снижению) оптической плотности. 1 з.п.ф-лы, 2 ил. с (О (Л

fo Ж jfWWsrmr,. время, мин Фив. 2