Способ выделения профаг-излеченных клонов из культур лизогенных штаммов молочнокислых бактерий Советский патент 1989 года по МПК C12N7/00 

1

Изобретение относится к биологии молочнокислых бактерий и может найти применение в исследованиях, связанных с защитой производства ферментируемых молочных продуктов от действия бактериофагов, а также с конструированием новых заквасочных штаммов.

Целью изобретения является повышение выхода профаг-излеченных клонов из культур лизогенных штаммов Молочнокислых бактерий.

Пример. Лизогенный штамм Streptococcus lactis 140-IOa вырастили 18 ч при с 10 смЗ бульона из обезжиренного молока, гидролизо- ванного панкреатином и разбавленного водой 1:2 (БГМ), переводят (1% инокулюма) в 10 см БГМ, инкубируют 4 ч при 30°С, выросшие клетки собирают центрифугированием (10 мин при 5000 об/мин) в асептических условиях, ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 5 -Ю КОЕ/см я 10 см5 суспензии экспонируют в открытой стерильной чашке Петри под УФ-лампой (БУВ-15, энергетическая экспозиция 10,8 Дж/м) при постоянном перемешивании на магнитной ме- шапке. Облученную суспензию смеши- . вают с равньм объемом фагозащитного бульона ФЗБ; БГМ, обогащенный 1% (,HjO-,-5,5 , 0,25% и 0,25% KrjHFO, рН 7,0) удвоенной кон-, центрации и инкубируют 18 ч при 30°С, переводят (1% инокулюма) в 10 см

4 ел

00 ОО 00

31458387

4зБ (нормальной концентрации), инку-Способ применим к лизогеиньм куль турам, содержащим значительно меньшую пропорцию профаг-излеченных кло нов (до 1:5000000).

Применение предлагаемого способа позволило вьщелить профаг-излеченныё

()ируют 4 ч при и из полученной культуры готовят суспензию клеток в физио- J|IOгичecк6м растворе, как указано выше, /jtnn УФ-облучения. Цикл УФ- обработкй IJI последующей инкубации в ФЗБ повторяют 4 раза, после чего 10-кратные йазведения культуры рассеивают на йоверхностЬ фагозащитного агара (ФЗА; ФЗБ +1,5% агара) и чашки инкубируют 48 ч при 30°С; Ма- Vepuaoi из 100 индивидуальных колоний фтвивают в пробирки, содержащие по

клоны у 3 из I2 исследованных лизо- генных штаммов, тогда как при исполь10

зовании способа, принятого за прототип, такие клоны не были -выделены. Эффективность предлагаемого способа проверена на примере лизогенного

(ртвивают в приоирки, ащ штамма S. lactis 1744 и его профагj,5 см ФЗБ (нормальной концентрации) ig излеченного клона Сд (получен поелпосле 4 ч инкубации при 30°С клоны лагаемым способом). Смесь штаммов Проверяют на чувствительность к фаго- 1744 и С в соотношении I подверга- Аизату, полученному УФ индукцией ис- ли 3 циклам УФ-индукции и инкубации годного штамма. Пробу на фагочувст-в ФЗБ, как описано в примере, в реиительность проводят двуслойным мето-20 зультате чего доляпрофаг-излеченных дом. Газоны клонов с нанесенными кап- клеток в.культуре возросла до 70%. лями фаголизата инкубируют 18 ч при . У клона 82 обнаружена лити-..Формула и з о б р е. т е н и. Ч

4еская реакция в месте нанесения фа- грлизата. При анализе клона установлено, что он чувствителен к литичес- кому действию умеренного фага, лизо- Генизирующего исходный штамм; в от- ет на действие-индуцирующих агентов

25 Способ выделения профаг излеченнь1х клонов из культур лизогенных- штаммов молочнокислых бактерий.путем обработки культур лизогенных штаммов аген „ „ч-..л....„,..,-- том, индуцирующим профаги с последуюне дает ростовой реакции, характерной ЗО Щим отбором клонов и их проверкой |1Ц1Я исходного Штамма и других лизо-на-отсутствие профагов, о т л и I eHHbix штаммов стрептококков, и нечающийся тем, что, с целью

продуцирует частиц умеренного бакте-повьшения выхода профаг-излеченных

риофага; при обработке фаголизатом,клонов, экспоненциальную культуру

полученным из исходного штамма, обра- бактерий .помещают в питательньй фа- зует вторичные фагоустойчивые (рели-гозащитньй бульон, индуцируют про|зогенизированные) клоНы. Полученныйфаг УФ-излучением, инкубируют при

клОн использован в исследованиях в оптимальной температуре роста, перека ества индикаторного штамма для-вивают в свежую порцию фагозащитного

ум-еренкого бактериофага, лизогенизи- до бульона с последующим 3-4-кратным рующего штамм S. lactis 40-10а. Егоповторением цикла, а отбор индивидуиспользование позволяет, в частности, альных колоний ведут на фагозащитном Iоптимизировать методику приготовления агаре по их чувствите-Л ьности к лизату фа-.- олизата с высоким титром. исходного штамма.

клоны у 3 из I2 исследованных лизо- генных штаммов, тогда как при исполь

Изобретение относится к биологии молочнокислых бактерий и может найти применение в исследованиях, связанных с защитой производства ферментируемых молочных продуктов от действия бактериофага. Цель изоб- ретения - повышение выхода профаг- излеченных клонов. Индукцию бактериофага проводят повторяющимися циклами с инкубацией обработанных клеток в условиях, исключающих адсорбцию высвобождающихся частиц умеренных бактериофагов на поверхности клеток профаг-излеченных клонов. сл

Составитель Н. Кузенкова Редактор А. Лежнина Техред М.ДидыкКорректор М, Демчик

Заказ 326/29

Тираж 500

ВНИНТШ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное