Способ идентификации бактерий рода @ Советский патент 1987 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/04 C12R1/22 

«13

Изобретение относится к медицине, в частности, к медицинской микробиологии.

Цель изобретения - ускорение и упрощение способа идентификации бактерий рода Klebsiella путем создания среды, обеспечивающей одноэтапное определение.

Дифференциальную среду готовят следующим образом.

В 1 л воды вносят 35 г сухого питательного агара на любом гидролиза- те, кипятят до полного растворения, (или автоклавируют). Добавляют 5 г 5-аминосалициловой кислоты. 10 г L-арабинозы, 4 мл 1,6%-нсго спиртового раствора бромтимолового синего, растворяют при перемешивании. Добавляют при перемешивании 1 н, раствор NaOH до появления зеленой окраски среды, соответствующей рН 6,8-7,2 (на каждые 100 мл среды требуется около 2,5-3 мл 1 н, раствора NaOH). Разливают среду в стерильные чашки Петри, Среда в чашках Петри имеет зеленую окраску, пригодна к использованию в течение 5 суток при хранении от 4 до 8°С,

Пример 1, Исследуемый материал - чистую агаровую культуру идентифицируемых бактерий - засевают петлей в виде бляшки диаметром 5 мм на поверхность сектора питательной среды в чашке Петри (.среда содержит на 1 л дистиллированной воды, г: сухой питательный агар из рыбного гидролизата 32; 5-амино- салициловая кислота 4,5; L-арабино- за 8; бромтимоловый синий 0,06; рН 7,0, установлен добавлением 30 мл 1 н, раствора NaOH), Инкубируют при 37°С в течение 18 ч, после чего учи- тьшают результат: на поверхности питательной среды светло-зеленого цвета вырастает в виде бляшки макроколония бактерий, окруженная зоной питательной среды диаметром 25 мм интенсивной черно-коричневой окраски. Наличие этой зоны указывает на принадлежность исследуемых бактерий к роду Klebsiella.

П р и м е р 2. Исследуемый мате- риал - мокроту больного (0,1-0,2 мл) засевают шпателем на поверхность питательной среды в чашке Петри среда содержит, г: сухой питательный агар 33,5, 5-аминосалициловая кислота 5,0; L-арабиноза 10; бромтимоло5

874 . 2

вый синий 0,07 г;, рН 6,8, Инкубиру- клг при в течение 24 ч, после чего учитыВ(Зют результат; на поверхности питательной среды светло-зеле- ного цвета вырастают колонии различных бактерий, среди которьк имеются окруженные четкой зоной черно-коричневой окраски среды, что указывает на принадлежность бактерий из этих колоний к роду Klebsiella.

П р и м е р 3, Исследуемый материал, содерхтащий идентифицируемые бактерии, засевают на поверхность питательной среды в чашке Петри сре- 5 да содержит, г: сухой питательный агар 35; 5-аминосалициловая кислота 5,5; L-арабиноза 12; бромтимоловый синий 0,08; дистиллированная вода 1 л; рН 7,2„ Посев инкубируют при 0 35 С в течение 18ч, после чего учитывают результат: на поверхности питательной среды светло-зеленого цвета вырастают колонии бактерий, окруженные зоной питательной среды интенсивной черно-коричневой окраски. Наличие этой зоны указывает на принадлежность исследуемых бактерий к роду Klebsiella.

В таблице представлены примеры использования способа с вариантами питательной среды, приготовленной на основе Эритроит агар сухой.

Способ обладает высокой чувствительностью, позволяет обнаружить и 5 идентифицировать Klebsiell при наличии их в ис{ ледуемом материале менее 1 00 кл,/мл,

Дифференциальные признаки Klebsiell (зона черно-коричневой окрас- ки среды вокруг колоний) четко проявляются при ассоциациях с любыми бактерия ми, способными расти на данной среде.

Предлагаемый способ позволяет идентифицировать 91,7t2,0% штаммов Klebsiell.

Способ ускоряет идентификацию (через 18-24 ч вместо 48-72 ч по известному способу), которую проводят 50 непосредственно при посев исследуемого материала на питательную среду, без дополнительных пересевов на дифференциальные среды,

5 Формула изобретения

Способ идентификации бактерий рода Klebsiella путем посева исследуе0

313

мого материала на питательную среду, содержащую сухой питательный агар, бромтимоловый синий и дистиллированную воду, при рН 6,8-7,2 с последующим инкубированием посевов при 35 - ЗУ.С и идентификацией искомых бактерий по характеру окрашивания, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, в качестве источника углеводов используют L-арабинозу, при этом в питательную среду дополнительно вводят 5-аминосалицш1овую кислоту при следующем соотношении входящих в нее ингредиентов, г/л:

8

10 12

25-30 25-30 25-30

10 12

30-35

30-35 30-35

3874

Сухой питательныйагар

L-Арабиноэа Бромтимоловый синий

5-Аминосалициловаякислота Дистиллированная вода

32,0-35,0 8,0-12,0

0,06-0,08

4,5-5,5

До 1 л,

посев инкубируют в течение 18-24 ч до образования темно-коричневой зоны вокруг колонии, по которой иден- 15 тифиц йруют бактерии рода Klebsiella,

-+++

.+++

+++2-4

2-4

2-4

Светло- зеленая

Примечание, Учет результатов посевов через 24 ч инкубации при

37°С.

Чувствительность среды 60-100% по отношению к числу колоний Klebsiell, выросших на питательном агаре без предложенных добавок.

Редактор А.Маковская

Составитель А.Завадская Техред А. Кравчук .

Заказ 2181/26Тираж 500Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений н открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

Продолжение таблицы

Корректор С.Шекмар

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается способа идентификации бактерий рода Klebsiell. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Способ осуществляют следующим образом. Исследуемый материал высевают на плотную питательную среду, содержащую, г/л дистиллированной воды: сухой питательный агар 32,0 - 35,0; L-араби- ноза 8,0 - 12,0; бромтимоловый синий 0,06 - 0,08; 5-аминосалициловая кислота; 4,5 - 5,5. Среда светло- зеленого цвета, рН 6,8 - 7,2. Посев инкуЙ1руют при 35 - 37 С. Вокруг колоний бактерий рода Klebsiell образуется зона интенсивного черно- коричневого цвета диаметром 25 35 мм, Идентификацию проводят в один этап без дальнейших пересевов на специфические питательные среды, Способ высоко чувствителен и позволяет определять наличие колебания в концентрации менее 100 кл/мл в ассоциации микроорганизмов, Точность 91,7 t2 %. Время идентификации без предварительного вьщеления чистой культуры 18 - 24 ч. 1 табл. (Л