Способ получения сыворотки плодов животных Советский патент 1987 года по МПК C12N5/00 A61D1/00 C12N5/02 

113

Изобретение относится к животноводству, а точнее к использованию продуктов животноводства в биотехнологии.

Цель изобретения получение максимального количества сьшоротки, пригодной для культивирования клеток млекопитающих, при одновременном сохранении целостности шкурки плода.

П р и м е р 1. На конвейер МЯСО-У комбината подается группа (500-1000 голов) суягных овцематок со сроком беременности 130-135 дн. На конвейере при убое овщ; одновременно через разрез белой линии ее брюшины отделяют плод со всеми околоплодными оболочками и сразу перекладьгоают на специальный стол-конвейер, где без какой-либо задержки вскрывают около- плодньй пузырь, и синхронно сокращению стенок матки на стол вытягиваются через шейку матки плод и его пуповину без нарушения плацентарного кровообращения плода, В целях увеличения забора плодной крови искусственно включают у плода легочный круг кровообращения, путем пережатия на несколько секунд (10-15) всех сосудов пуповинь до появления у него самостоятельного дыхания. Забор крови делают при полном дыхании плода из правой пуповочной артерии, идущей от плода к плаценте, при этом левая вена и левая артерия пуповины плода зажимгзют- ся хирургическими зажимами. Забор .крови производят: иглой И-52 с дренажным устройством в стерильные сосуды, заполненные азотом.

В дальнейшем из собранной плодной крови выделяют и хранят фатальную сьшоротку по общепринятой технологии а обескровленный плод затем поступает в сырьевой цех для снятия с него каракульчовой шкурки.

П р и м е р 2. На конвейер комбината подают овцематку каракульской породы суягности 130-135 дней и после ее забоя помещают на операционньй стол. Оператор вскрывает овцематку, а затем околоплодный пузырь, не нарушая целостности пуповины. В такт сокращениям матки осторожно вытягивают голову плода из пузыря.Второй оператор освобождает наружные дыхательные пути от слизи и для включения дыхания и легочного кровообращения у пло- ,да зажимает рукой все сосуды пуповины примерн-о на 10-15 с, до появления

32

первого вздоха. Третий оператор зажимает на расстоянии 4-5 см от пупочного кольца левую вену, по которой кровь идет от плода к плаценте, чет- вертый обрабатывает правую пульсирующую артерию 5-10%-ньм раствором иода, пятый подставляет под правую артернао резиновый турникет и слегка натягивает сосуд, шестой вводит в артерию иглу и через дренаж осуществляет забор крови в стерильный стеклянный флакон, заполненный азотом. По окончании про- обескровливания плод поступает для снятия шкурки, а флаконы с кровью

после 2-3-часового выдерживания при комнатной температуре помещают в холодильник при на 12 ч, после чего сыворотку, отделившуюся от сгустка, отсасывают во флаконы в асептических условиях, замораживают и хранят при .- П р и м е р 3. Применение сьшоротки плодов овец 130-дневного возраста для культивирования клеток фиброблас- тов куриных эмбрионов.

Куриньй эмбрион 9-дневного возраста извлекают в стерильную чашку Петри, где удаляют глаза, клюв, лапы и крылья. Оставшуюся тушку промывают

в трех сменах раствора Хеш(са и из- м 1льчают на кусочки, равные примерно 3 мм в поперечнике. Измельченную ткань снова промьшают в трех сменах раствора Хенкса и переносят в коничес

кую колбу для трипсинизации. В колбу добавляют 0,25%-ный раствор трипсина в растворе Хенкса (200 мл на 5- 10 эмбрионов), а затем помещают в цилиндрический магнит и на магнитной

мешалке перемешивают суспензию в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем клетки осаждают центрифугированием (1 О мин при 600 об/мин), промывают в растворе Хенкса, .вторично центрифугируют и суспендируют в ростовой среде следующего состава: сьшо- ротка плодов овец 130-дневного срока беременности 10% и Оэ5%-ный гидроли- зат лактальбумина на растворе Хенкса 90%.

Посевная доза составляет 500000 клеток/мл на пробирку, куда разливат по 2,0 мл суспензии. При культиви- ровании клеток монослой сформируется на 2-е сутки.

Прим е р 4. Условия те же, что в примере 2, но используют только сыворотку плодов овец 135-дневной беременности.

П р и м е р 5. Применение сыворотки плодов овец 132-дневного возраста для культивирования клеток СГОВ (пе- ревиваемая культура почки эмбриона свиньи).

9 мл взвеси клеток СПЭВ при посевной дозе i00000 клеток/мл вносят во флакон с рабочей поверхностью 20 см . Питательной средой служит среда - 0,5%-ньй гидролизат лактальбумина в растворе Хенкса, рН 7,6. Клетки помещают в термостате при 37°С. Сыворотку плодов свец 132-дневного возраста 10%-ной концентрации в среде 199 добавляют во флакон с клетками на 3-4-е сутки. Контролируют рост клеток при световом микроскопировании, и по мере формирования сплсяпно- го монослоя используют для репродукции вирусов.

Испытание сыворотки крови плодов овец каракульской породы на ряде дру- 25 гих клеточных линий показывает, что

Редактор В.Петраш

Составитель А.Семионов

Техред М.Моргентал Корректор И.Муска

Заказ 2479/22 Тираж 499Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

она вполне может заменить дефицитную фетальную сыворотку крупного рогатого скота, помимо того, источник ее практически неисчерпаем, так как по- лучае ся она из отходов производства каракульчи.

I

Формула изобретения

Способ получения сыворотки плодов животных, включающий забой беременного животного, извлечение плода, его обработку, отбор крови и отделение сыворотки, о т лич ающий- с я тем, что, с целью получения сыворотки при сохранении целостности шкурки плода, из животных используют овец, плод извлекают из околоплодных оболочек через шейку матки, сохраняя плацентарное кровообращение, пережимают пуповину до появления самостоятельного дыхания и берут кровь путем пункции правой артерии пуповины при одновременном пережатии левой артерии с левой веной и непрямом массаже сердца.

Изобретение касается использования продуктов животноводства и направлено на более полное использование отходов производства каракульчи путем получения сьшоротки при сохранении целостности шкурки плода. Одновременно с убоем овцематок из околоплодных оболочек через шейку матки извлекают плод. Плацентарное кровообращение сохраняют. Переживают пуповину до появления самостоятельного дыхания. Кровь берут путем пункции правой артерии пуповины при одновременном пережатии левой артерии и непрямом массаже сердца. Отделенная сьюо- ротка пригодна для культивирования клеток млекопитающих. С обескровленного плода снимают каракульчовую шкурку. (Л эо 0д