Методы открытия и определения микроколичеств гистидина представляют большой интерес для врачеГг, биохимиков и физиологов, изучающих обменные процессы растительных и животных организмов, з которых участвует данная аминокислота. Важность более полного изучения ее функций видна хотя бы из того, что она генетически близка к биогенному аминогистамину. Последний, ио-видимому, играет весьма существенную роль в развитии ряда тяжелых заболеваний человека и животных и, в частности, болезни, вызванной действием ионизирующей радиации.
Предлагаемый способ определения гистидина бромированиел и конденсацией его, заключается в том, что для повышения чувствительности и избирательности способа, продукт бромирования конденсируют с циклическими соединениями, содержащими группы СПз-СО, например, с димедоном или фенилметилпиразоло«ом. Образовавшийся нерастворимый в воде на холоду краситель экстрагируют органическим расворителем, например смесью этил- и изоамилацетатов и определяют оптическую плотность раствора красителя, пропорциональную содержанию гистидина в исходном образце.
Наиболее существенными критериями аналитического метода являются предел его чувствительности и степень избирательности. Опыты позволяют утверждать, что предложенная реакция более чувствительна, чем все известные до сих пор цветные тесты на гистидин. Так, при анализе чистых водных растворов аминокислоты окраска в органическом растворителе появлялась при 2-3 микрограммах кислоты в 5,3 мл водной фазы, т. е. при разведении около 1 : 2.500.000.
Избирательность реакции проверена отдельными опытами с биогенными или близкими к ним органическими соединениями. Ни одно из 100 проверенных веществ не показывало идентичной цветной реакции.
Димедоновая реакция была использована для определения гистидина в сложных для анализа объектах, как, например, в моче. Предлагаемый способ ускоряет проведение анализа данной аминокислоты и улучшает при этом избирательность и чувствительность реакций. Он
