Способ диагностики инфаркта миокарда Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использовано для диагностики инфаркта миокарда (ИМ).

Цель изобретения - ранняя диагностика заболевания

На -чертеже показано графически изменение активности СОД (1) и ГП (2) в эритроцитах больных инфарктом миокарда.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь для определения активности ферментов берут в количестве 0,2 г-ш и помещают в 0,8 мл изотонического (0,154 М NaCl) K,Na-фocфaтнoгo. буфера 0,005 М, рН 7,4, содержащего ИГ М ЭДТА. Кровь центрифугируют в рефрижераторной центрифуге- при 850 g 10 мин Эритроциты дващ.цы отмывают 0,154 М NaCl и лизируют 20 объемами 0,005 М К,Ка-фосфатного буфера рН 7,4, содержащего ЭДТА. Эритроциты цельной крови, взятой из пальца, лизируют тем же буфером в соотношении 1:9 (объем/объем). Все операции проводят при О-(+4) с. При определении активности супероксиддисмутазы (СОД)

центрадия)

0,12-10 М 0,85-10 М 0,5ед/нл

Навеска (1 мг, на 25 мл буфера)9,8 мг 2,9 мг 7,6 мг

Реактив 1. Растворить в 20 мл фосфатного буфера 0,05 М рН 7,4(в мерной колбе на 23 мл) 9,8 мг ЭДТА, затем НАДФ И,, 7,6 ,мг GSH. Влить П/ц,1 GSSG-reductase и довести буфером до 23 мл. Брать для заполнения кювет по 650 |Ul.

Реактив 2. ROOHt-бутила (М,в. 116,246; 1,3761) 13 |Ul исходно

гемоглобин охлаждают при -10 С смесью хлороформ - метанол (3:5).

Активность (сод) определяют при 25 С на спектро фотометре Hitachi-220 (Япония) по ингибированию восстановления синего нитротетраэолия О, генерируемого при окислении ксантина ксантин-оксидазой. За единицу активности СОД принимают количество фермента, необходимое для 50% ингибиро- вания реакции. Активность глутатион- пероксидазы (ГП) определяют при на аналитической установке FP-900 (Финляндия) по окислению N АДРН в сопряженной с глутатион-редуктазой системе при использовании гидроперекиси трет-бутила и GSH в качестве субстратов. За единицу активности ГП принимают количество фермента, необ- -ходимого для окисления 1 моль N АДРН в условиях определения. Содержание гемоглобина (в ед на 1 г гемоглобина) определяют при помощи стандарт- ных тест-наборов фирмы Medix (Финляндия) цианогемоглобиновым методом на анализаторе FP-900. Смесь (V 0,65 мм) для определения GSH-перок- сидазы на FP-900 - 340 нм (см. табл. 1).

Т а б л и ц а 1

14,6 1 /0.1

го раствора растворить в Ш мл буфера, полученный раствор развести еще в 10 раз. Брать для запуска реакции 100 jul (см. табл. 2).

Образец для анализа вносить в 10 (ul.

Смесь для определения СОД на спектрофотометре Hitachi-220.

Смесь 1: V 1950 м1, А- 560 нм.

М.в.

105,99

С (конечная концентрация) 0,05 М

Навеска (1 мг, на

25 мл буфера) 154,9 мг

11,1 мг раствора ксантина (исходный) растворить . в 0,5 мл 0,5 н. NaOH в мерной колбе на 25 мл. Дов ес- ти до метки дистиллированной водой (HjO). HjO хранится в холодильнике в течение месяца,

Ксантин-оксидаза. Развести исход- ный фермент таким образом, чтобы добавление 300 fil к 1950 в кювете давало скорость 0,016-0,020 ед.опт/мин Для приготовления смеси и разведения ксантин-оксидазы используется 0,05 М фосфатного буфера рН 7,8. Образец вносить в 10-20 1.

Определив активность СОД и ГП в динамике, строят кинетические кривые отражающие изменения активности (см, чертеж),

Активность супероксиддисмутазы (кривая 1) резко возрастала уже через 2 ч в эритроцитах больных ИМ, достигала максимальных значений приблизительно через 10 ч и оставалась на повышенном уровне до 2-х сут после болевого приступа, тогда как активность глутатионпероксидазы у этих же больных, напротив, резко уменьшалась, достигала минимальных значений в те же сроки и оставалась на пониженном уровне до 2-х сут. Начиная с 3-х сут после начала заболевания, выявлялась отчетливая тенденция к нормализации уровня активности СОД и ГП в эритроцитах больных ИМ, причем к 14-21 сут активность обоих исследованных ферментов достигала контрольных значений. Достоверное увелИ чение активности СОД и достоверное уменьшение активности ГП в эритроцитах больных ИМ выявляется весьма рано - уже через 1-2 ч после болевого приступа.

Таблица 2

336,2

817,7

152,1

2,5-10 М 10 М

1 мл ис0,597 мг ходного раствора

0

5

5

Пример 1. Больной С., 46 лет. При поступлении предъявлял жалобы на интенсивную давящую боль за грудиной с иррадиацией в левое плечо, резкую слабость, потливость. Объективно; состояние средней тяжести. Температура тела 37,2°. Правильного телосложения. Кожные покровы бледные. Область сердца визуально не изменена, верхушечный толчок определяется в 5 межреберье. Границы относительной сердечной тупости расширены на 1,5 см кнаружи от средне-ключичной 0 линии. Тоны сердца приглушены, пра- вильньш ритм прерывается единичными экстрасистолами частотой 4-6 в мин. Пульс 75 уд/мин, АД 130/90 мм рт,ст, В легких везикулярное дыхание, хрипов нет, Со стороны органов: пищеварения и мочевыделительной системы патологии не выявлено. Предположительный диагноз: острый инфаркт миокарда. Больному сделали анализ крови 0 (через 1 ч после болевого приступа),

сод (ед/г Нв) 9806; ГП (ед/г Нв) 15,19; КФК (ммоль/ч л) 4,01; МВ-КФК (ммоль/ч л) 0,49.

Как видно, активность СОД повыси- 5 лась, а активность ГП снизилась через 1 ч после возникновения болевого приступа. Активность же основных ферментов, тестирующих инфаркт миокарда (КФК, МВ-КФК), через 1 ч поо еле возникновения болевого приступа не меняется. На основании данных по изменению активности ферментов СОД и ГП можно предположить диагноз инфаркта миокарда. Больному сделана gg ЭКГ, Ритм синусовый, прерывается

единичными желудочковыми экстрасистолами. Электрическая ось отклонена влево. Горизонтальная позиция сердца. Отмечается смещение амплитуды зубца

Ry.y , элевация сегмента S-Ту . высокий (+), остроконечный Ту . Дл- агноз: ИБС, острый трансмуральный лередне-перегородочный инфаркт миокарда. Желудочковая экстрасистолия. Таким образом, диагноз инфаркта миокарда подтвержден с помощью ЭКГ.

Динамика активности ферментов: СОД ГП КФК МВ-КФК 3 ч. 9225 15,98 5,67 2,66 5 ч. 9355 15,24 8,09 3,47 7 ч. 11657 15,51 15,58 10,53

Пример 1 наглядно демонстрирует, что изменения активности КФК и МВ- КФК произошли гораздо позже (активность КФК увеличилась лишь к 7-му, а.МВ-КФЕ - к 3-му ч от начала боле- вого приступа, в то время как изменения активности СОД и ГП произошли уже через 1 ч после начала заболевания.

Пример2. Больной В-н, 60 лет При поступлении предъявлял жалобы на давление и сжимающие боли за грудиной, возникающие при физической нагрузке и в покое, иррадиирующие в ле вое плечо. Объективно:.состояние удовлетворительное, правильного телосложения. Видимые слизистые цианотич ны. Б легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Область сердца визуально не изменена. Границы относительной сердечной тупости: левая - на 0,5 см кнаружи от средне-ключичной линии, верхняя и правая не изменены. Тоны сердца приглушены. На верхушке про- спушивается грубый систолический шум Акцент 11-го тона на аОрте. Пульс

t ,.

72 уд/мин, АД 140/80 мм рт.ст. положительный диагноз - инфаркт миокарда, нестабильная стенокардия.

0

5

0

5

0 5 0

5

Больному сделан анализ крови: СОД (ед/г НВ) 4331; ГП (ед/г НВ) 17,18; КФК (ммоль/ч л) 4,03.

На основании анализа крови (активность СОД и ГП не изменена) диагноз инфаркта миокарда отвергается. На ЭКГ - признаки Рубцовых изменений нижней локализации. В момент болевого приступа - групповая желудочковая экстрасистолия. Диагноз: ИБС, нестабильная стенокардия.

В стационаре у больного возник сильный приступ болей за грудиной, сопровождающийся пароксизмальной желудочковой техикардией. Через 1,5 ч после возникновения болей, анализ крови: СОД 8948; ГП 13,17; КФК 4,02. На основании данных изменения активности СОД и ГП у больного предпола- Гается диагноз инфаркта миокарда. ЭКГ: Подъем S - Т, 11, 111 AVF.. Диагноз : Инфаркт миокарда нижней локализации. Активность КФК: через 4ч- 6,02, через 8 ч - 20,17.

Таким образом, активность КФК изменилась только к 8-му ч от начала заболевания, тогда как активность СОД и ГП изменилась уже через 1,5 ч и на основании изменения активности СОД и ГП был правильно поставлен диагноз инфаркта миокарда.

Формула изобретения

Способ диагностики инфаркта миокарда путем исследования активности ферментов крови, отличающийся тем, что, с целью ранней диагностики, в эритроцитах крови определяют активность супероксидди- смутазы и глутатионпероксидазы и при увеличении активности первого и снижении активности второго относительно нормы диагностируют инфаркт миокарда.

-12

Л 4

gp

§

gp

L4

Составитель К.Валеева Редактор Е.Копча Техред М.Двдык

Заказ 4859 Тираж 775ПЬдписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

I

7

4

Корректор М.Шароши

Изобретение относится к медицине, точнее к кардиологии, предназначено для диагностики инфаркта миокарда (им). Цель изобретения - ранняя диагностика заболевания. Порцию крови для определения активности ферментов помещают в изотонический K,Na- фосфатный буфер 0,005 М, рН 7,4,