Способ определения невынашивания беременности Советский патент 1987 года по МПК G01N33/98 

Изобретение относится к медицине, а именно к акущерству, и может быть использовано для определения невынашивания беременности.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет определения активности щелочной фосфа- тазы в лимфацитах крови больного.

Способ осуществляют следующим об- разом.

Лимфоциты выделяют из 3-5 мл ге- паринизированной крови путем центрифугирования в градиенте плотности фиколла. Кровь или лейкоцитарную взвесь в количестве 2-3 мл наносят на предварительно подготовленный раствор фиколла (8 объемов 9%-ного водного раствора фиколла и 2 объема 76%-ного верографина), доведенного дистиллированной водой до плотности 1,077 г/мл. Пробирки с образцами цен трифугируют в течение 40 мин при 20 и 600°С. После центрифугирования отбирают из пробирок беловатый слой лимфоцитов и трижды отмывают физиологическим раствором, рН 7,1-7,2, при 4-8 С по 10 мин при 200 С. В суспензии выделенных лимфоцитов подсчитывают количество клеток в 1 мл. Лимфоциты гомогенизируют и гомогенат центрифугируют при 600 С в течение 10-15 мин при 4-8 С. В супернатанте определяют активность щелочной фос- фатазы.

Определение щелочной фосфатазы осуществляют по изменению оптической плотности субстрата при 405 нм в течение 1 мин при 25 С в кювете толщиной 1 см (2) .

Для определения активности щелочной фосфатазы реакционная смесь содержит 0,02 мл исследуемого образца супернатанта гомогената лимфоцитов и 2,0 мл субстрата, содержащего, ммоль/л: паранитрофенилфосфата 10, хлористого магния 0,5, диэтанрлами- нового буфера 1, рН 9,8. Полученную смесь тщательно перемешивают и инкубируют при в течение 1 мин, а затем при 405 нм измеряют оптическую плотность. Активность фермента расчитывают по формуле Л А/мин-5460 и выражают в мкмоль/мин мл. Активность щелочной фосфатазы в лимфоцитах вы- ражают в мкг#оль/2,5 10 лимфоцитов, где А/мин - изменение оптической плотности раствора в минуту; А - оптическая плотность раствора.

5 (j

0

5 0 g

0

5

При значении этого показателя более 1,3 мкмоль/2510 лимфоцитов определяют невынашивание беременности.

Пример 1. Беременная И-ва, 27 лет, беременность 2. Комплексное клинико-лабораторное обследование в 7-8 недель беременности показало отсутствие соматических заболеваний и акушерской патологии. Уровень хори- онического гонадотропина в моче соответствовал нормативньт значениям для данного гестационного срока. Применение предлагаемого способа позволило установить, что активность щелочной фосфатазы в лимфоцитах составляет 0,51 мкмоль/2,510 лимфоцитов, что свидетельствовало об отсутствии невынашивания. Последующее наблюдение не выявило акушерской патологии в течение беременности, которая за- . кончилась срочными родами живым доношенным ребенком.

Пример 2. Больная К-ва 33 лет, беременность 4. В анамнезе 3 самопроизвольных выкидьш)а в сроки от 8 до 21 недели беременности.Несовместимости по резус-фактору и системе АВО не выявлено. При гинекологическом обследовании на 7-8 недель беременности клинических признаков невынашивания беременности не выявлено. Уровень хорионического гонадотропина в моче соответствовал нормальному содержанию. Применение заявляемого способа показало, что активность щелочной фосфатазы в лимфоцитах составляет 1,32 мкмоль/2,510 лимфоцитов, что позволило определить невынашивание беременности. Несмотря на проведение комплексной терапии, направленной на сохранение беременности, беременность прервалась в течение 8-9 недель.

Пример 3. Больная ti-ffa 25 лет, страдает привычным невынашиванием, в анамиозе 2 самопроизвольных выкидьш1а в сроках 13-23 недели беременности. Групповых и резус-антител не выявлено. Больная предъявляла жалобы на боли внизу живота схваткообразного характера и кровянистые вьще- ления из половых путей. По данным ультразвукового исследования отмечена повьш1енная возбудимость миометрия. Уровень хорионического гонадотропина в моче соответствовал гестационно- му сроку. Применение предлагаемого способа показало, что активность щелочной фосфатазы в лимфоцитах составляет 8,6 мкмоль/2,510 клеток.

Эти данные подтвердили невынашивание беременности. Проведенная комплексная терапия, направленная на сохранение беременности, позволила пролонгировать беременность, которая закончилась срочными родами живым доношенным ребенком.

Использование предлагаемого способа в медицинской практике позволяет повысить точность определения невынашивания беременности на 77,3%, а также позволит определять невынашивание беременности в течение всего гестационного периода, в том числе и

в триместре беременности, что позволяет своевременно проводить комплексную терапию, направленную на сохранение беременности.

Формула

зобретения

Способ определения невынашивания беременности путем исследования биологической жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в лимфоцитах определяют активность щелочной фосфатазы и при увеличении этого по- казат,еля более 1,3 мкмоль на 2,5-10 лимфоцитов определяют невынашивание беременности.

Изобретение относится к акушерству. Для повышения точности способа в лимфоцитах определяют активность щелочной фосфатазы и при увеличении этого показателя более 1,3 ммоль на 2,5 -10 лимфоцитов определяют невынашивание беременности. Активность фермента определяют по формуле dА/мини5460, где А - оптическая плотность раствора. 00 4 00 | со ГС