Способ пересадки ранних эмбрионов птиц Советский патент 1987 года по МПК A01K67/00 C12N5/00 

Изобретение относится к экспериментальной эмбриологии, криобиологии и предназначено для приживления ранних эмбрионов (бластодисков, бластодермы) птиц к чужеродной желточной оболочке.

Целью изобретения является повышение жизнеспособности эмбриона и упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Вскрывают предварительно проинкубированное в течение 12-42 ч яйцо, освобождают желток от белка. Желток помещают в чашку Петри или часовое стекло бласто- диском вверх. Вокруг бластодиска накладывают кольцо из фильтровальной бумаги, затем в желток под бластодиск инъецируют физраствор в количестве до 5 мл. Это обеспечивает отмывку бластодиска с прилегающей желточной оболочкой от желточной массы. Затем обрезают желточную оболочку по наружному краю кольца из фильтровальной бумаги и, взяв пинцетом за край кольца, переносят препарат в чашку Петри с солевым раствором. В качестве солевого раствора используют известные смеси, например раствор Рингера. При выдержке препарата в солевом растворе достигается отделение бластодиска от собственной желточной оболочки. Как правило, 30-60 минутной выдержки в солевом растворе достаточно для отслоения бластодиска, однако значительная часть эмбрионов отслаивается раньше указанного времени. В процессе выдержки споласкивают кольцо из фильтровальной бумаги в солевом растворе, приподымают и контролируют отслоение эмбриона визуально. Если бластодиск отслоился, добиваются его полного сползания с желточной оболочки в данный раствор, а желточную оболочку, оставшуюся на кольце из фильтровальной бумаги, удаляют. После этого бластодиск из солевого раствора штапелем переносят в другую чашку Петри с декальциниро- ванным раствором, в качестве которого используют раствор Версена. В растворе Бер- сена эмбрион инкубируют в течение 10- 20 мин при комнатной температуре, что обеспечивает его прикрепление и приживление к чужеродной желточной оболочке.

В течение времени, необходимого для инкубации эмбриона в растворе Версена, проводят подготовку чужеродной желточной оболочки к приему трансплантата. Для этого вскрывают яйцо, отделяют желток от белка, помещают желток бластодиском вниз в чашку Петри или другую чистую посуду. Затем накладывают на желток кольцо из фильтровальной бумаги и инъецируют в желток под желточную оболочку внутри кольца физраствор. После этого обрезают желточную оболочку по наружному краю кольца и за край кольца переносят и укладывают внутренней стороной вверх на сухую

ровную поверхность, например на предметное стекло или на дно чашки Петри.

После этого проинкубированный в течение 10-20 мин в растворе Версена эмбрион шпателем переносят на край подготвлен- ной желточной оболочки эктодермой вниз. Затем осторожно наклоняют предметно стекло, эмбрион сползает к центру желточной оболочки и одновременно удаляется

раствор Версена, занесенный шпателем вместе с эмбрионом на край желточной оболочки. После этого препарат выдерживают еше несколько секунд для частичного испарения остатков влаги на препарате, а затем за край кольца из фильтровальной бумаги

5 переносят на питательную среду камеры для культивирования.

Граничные пределы инкубации в растворе Версена определены в результате опытов на ранних куриных эмбрионах, для чего использовали предварительно проинку0 бированные в течение 20-24 ч яйца итальянских куропатчатых кур.

Экспериментальные данные представлены в табл. 1.

5 Как видно из данных табл. 1,10-25-минутная инкубация эмбрионов в растворе Версена обеспечивает полное (по всей окружности) или частичное прикрепление их к чужеродной желточной оболочке и способствует началу развития 60-80% эмбрио0 нов от числа проинкубированных. Однако, если судить по основному показателю - числу эмбрионов, достигших 12-13-й стадии развития, когда отчетливо видны ритмические сокращения сердца, то видно, что эмбрионы перед посадкой на чужеродную желточ5 ную оболочку следует инкубировать в растворе Версена в течение 10-20 мин. Причем 20-минутная инкубация эмбриона в растворе Версена является оптимальной.

В таб)1. 2 представлены данные сравнительного испытания эффективности извест ного и предлагаемого способов пересадки ранних эмбрионов птиц.

Так, при использовании предлагаемого способа 69,7% пересаженных на чужеродную желточную оболочку эмбрионов начи5 нают развитие, в том числе 60,6% от числа пересаженных нормально развиваются и достигают 12-13-й стадии развития, когда отчетливо видны у каждого эмбриона ритмические сокращения сердца. При использовании известного способа, включающего

0 механическое отделение эмбриона от собственной желточной оболочки и посадку без инкубации в растворе Версена на ангар или чужеродную желточную оболочку, только 30,4% эмбрионов имеют признаки начала развития, причем развитие идет с

5 существенным замедлением темпов роста и с неправильной дифференцировкой сомитов. При этом эмбрионы погибают на 5-7-й стадиях развития.

Формула изобретения Способ пересадки ранних эмбрионов птиц, включающий отделение эмбриона от собственной желточной оболочки и трансплантацию его на подложку с последующей инкубацией, отличающийся тем, что, с целью повыщения жизнеспособности эмбриона и упрощения способа, отделение эмбриона осу

13 U 10 23 19

О О 3 10

6 о о

о о

50,0 43,5 31,6

О

О

,

57,1 30,0 21,7 36,8 20,0 О

ществляют перед трансплантацией путем выдерживания его в солевом растворе Ринге- ра, после чего эмбрион инкубируют в течение 10-20 мин в растворе Версена, трансплантацию эмбриона осуществляют эктодермой вниз, а в качестве подложки используют чужеродную желточную оболочку, уложенную внутренней стороной вверх.

Таблица 1

12 95 О 1 2 О 2

92,3 35,7

О

4,3 10,3

О 33,3

1

9 8 16 13 3 4

Т ,

64,3 80,0 69,6 68,4 60,0 66,6

6

13

13

1

о

7,7 57,1 60,0 56,3 68,4 20,0

О

Таблица 2

Изобретение относится к области экспериментальной эмбриологии, криобиологии и предназначено для приживления ранних эмбрионов (бластодисков, бластодермы) птиц к чужеродной желточной оболочке. Целью изобретения является повышение жизнеспособности эмбриона и упрощение способа. Для этого эмбрион отделяют от собственной желточной оболочки, выдерживая в солевом растворе, инкубируют в течение 10-20 мин в декальцинированном растворе, после чего пересаживают эмбрион эктодермой вниз на чужеродную желточную оболочку, уложенную на сухую ровную поверхность внутренней стороной вверх. 2 табл. со ел 00 СХЗ ГчЭ