СПОСОБ ОТБОРА КУРИНЫХ ЭМБРИОНОВ Российский патент 2012 года по МПК G01N33/08 

Изобретение относится к биологической промышленности, в частности к производству вакцин для сельскохозяйственных животных.

Куриные эмбрионы широко используются в биологической промышленности с конца 30-х годов XX века. Их использование позволило расширить спектр культивируемых в лабораторных условиях вирусов, так как они обладают рядом преимуществ перед лабораторными животными. Скорлупа и подскорлупная оболочка надежно защищают от бактериального заражения внешней среды, недостаточная развитость иммунной системы обеспечивает высокую чувствительность к вирусам, куриные эмбрионы - легкодоступный объект, не требующий ухода и кормления.

Вместе с тем, к куриным эмбрионам, используемым для получения вируссодержащего материала, предъявляются следующие требования: эмбрионы должны быть получены из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням, скорлупа должна быть непигментированной чистой (мыть нельзя), возраст эмбриона должен соответствовать избранному методу заражения (Белоусова Р.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии. - М.: КолосС, 2006, - 248 с.).

Известен способ оценки развития куриного зародыша белоскорлупных яиц в первые сутки инкубации, предложенный профессором Орловым М.В. (Орлов М.В. Биологический контроль в инкубации. - Москва: Россельхозиздат, 1966, - 164 с.). Автор оценивал куриные эмбрионы по времени появления бластодиска путем овоскопирования в первые часы после начала инкубации. При этом отмечалось, что зародыши, в которых бластодиск виден раньше, и дальше развивались более интенсивно. Процент вывода и выводимости из таких яиц был больше на 38,5%.

Однако этот способ не нашел широкого практического применения, поскольку требует частого изъятия яиц из инкубатора в первые часы инкубации, и не учитывает тот факт, что процесс деления зародышевых листков начинается сразу же после оплодотворения, то есть еще в яйцеводе курицы. К моменту закладки яиц в инкубатор имеются большие вариации в степени развития эмбриона, так как не известно, сколько яйцо находилось в яйцеводе курицы (Рольник В.В. Биология эмбрионального развития птиц. - Ленинград: Наука, 1968, - 425 с.).

В основу предлагаемого способа отбора куриных эмбрионов поставлена задача: получить максимальное количество экстраэмбриональной (аллантоисной и амниотической) жидкости для производства вакцин.

Поставленная задача достигается способом отбора куриных эмбрионов, включающим визуальную оценку яиц, учет массы и индекса формы перед закладкой в инкубацию, отличающимся тем, что эмбрионы дополнительно оценивают по интенсивности эмбрионального развития в 18-19 и 63-64 часа инкубации, причем разница диаметров зародыша куриного эмбриона должна находиться в диапазоне 1,0-1,5 см, а диаметр сосудистого поля желточного мешка должен быть не менее 2 см.

Технический результат - предлагаемый способ позволяет увеличить объем получаемой экстраэмбриональной жидкости и повысить титр вируса.

Пример конкретного выполнения.

Исследования были выполнены на курах породы белый леггорн материнской линии, материнской формы СП 9 кросса СП 789 в ЭПХ ВНИТИП.

Для опыта было отобрано 300 яиц методом случайной выборки. Оценку инкубационных яиц проводили по методическим рекомендациям ВНИТИП (Руководство по биологическому контролю при инкубации яиц сельскохозяйственной птицы. Методические рекомендации / Л.Ф.Дядичкина, Н.С.Позднякова, О.В.Главатских и др. - Сергиев Посад, 2010, - 84 с.).

Учет интенсивности развития эмбриона проводили в 18-19 и 63-64 часов инкубации путем измерения диаметра бластодиска и сосудистого поля желточного мешка при помощи штангенциркуля с точностью до 0,1 мм без вскрытия скорлупы. На основании полученных данных была вычислена разница по каждому эмбриону.

Путем биометрического анализа данных по общепринятой методике (Меркурьева Е.К., Шангин-Березовский Г.Н. Генетика с основами биометрии. - Москва: Колос, 1983, - 400 с.) подопытные эмбрионы были разделены на 3 группы по интенсивности развития (табл.1).

Таблица 1 Показатели качественного развития куриных эмбрионов Показатели Группы интенсивности развития интенсивные средние низкие Масса яйца, г 64,8±0,54 64,3±0,77 62,4±0,76 Индекс формы, % 74,4±0,38 75±0,5 73,8±0,57 Диаметр бластодиска в 18-19 часов инкубации, см 0,77±0,03 0,80±0,02 0,81±0,03 Диаметр сосудистого поля желточного мешка в 63-64 часа инкубации, см 2,24±0,02 1,94±0,01 1,62±0,03 Разница диаметров зародыша куриного эмбриона, см 1,47±0,02 1,14±0,01 0,81±0,02

Как видно из таблицы 1, интенсивно развивающиеся эмбрионы обладали большим диаметром сосудистого поля желточного мешка в 63-64 часа инкубации, а также большей разницей диаметров зародыша куриного эмбриона.

После 7 суток инкубации было отобрано по 30 эмбрионов от каждой группы и отправлено в лабораторию для заражения вирусом ньюкаслской болезни (ВНБ). Заражение проводили путем введения вируса куриным эмбрионам в аллантоисную жидкость. После заражения эмбрионы были помещены в термостат для накопления вируса. На 9 сутки после начала инкубации осуществляли сбор экстраэмбриональной жидкости отдельно по группам интенсивности эмбрионального развития (табл.2).

Таблица 2 Общие объемы экстраэмбриональной жидкости по группам интенсивности эмбрионального развития Показатель Группы интенсивности развития Интенсивные Средние Низкие Объем экстраэмбриональной жидкости, мл 323 316 285

Как видно из таблицы 2, общий объем экстраэмбриональной жидкости был больше в группе с интенсивным эмбриональным развитием.

В экстраэмбриональной жидкости определяли количество вируса ньюкаслской болезни по его титру (количество вируса, содержащиеся в единице объема материала). Титр вируса определяли по 50%-ному инфекционному действию по группам интенсивности эмбрионального развития (табл.3).

Таблица 3 Титр ВНБ экстраэмбриональной жидкости по группам интенсивности эмбрионального развития Показатель Группы интенсивности развития Интенсивные Средние Низкие Титр вируса, lg ЭИД 50/мл 9,3 8,7 8,6

Как видно из таблицы 3, титр вируса выше у интенсивно развивающихся эмбрионов.

Результаты испытания показали преимущество способа отбора куриных эмбрионов для нужд биологической промышленности по интенсивности эмбрионального развития. Использование интенсивно развивающихся эмбрионов позволяет увеличить объем получаемой экстраэмбриональной жидкости на 2% по сравнению с эмбрионами со средним развитием и на 12% по сравнению с низкоразвивающимися, а также повысить титр вируса.

Изобретение относится к биологической промышленности и касается способа отбора куриных эмбрионов. Способ отбора куриных эмбрионов включает визуальную оценку яиц, учет массы и индекса формы перед закладкой в инкубацию, при этом эмбрионы дополнительно оценивают по интенсивности эмбрионального развития в период инкубации путем определения на 18-19 час инкубации диаметра зародыша и определения на 63-64 час инкубации диаметра сосудистого поля желточного мешка, далее производят отбор эмбрионов, у которых диаметр сосудистого поля желточного мешка не менее 2 см, а разница между диаметрами сосудистого поля и зародыша находится в диапазоне 1,0-1,5 см. Представленный способ позволяет увеличить объем получаемой экстраэмбриональной жидкости и повысить титр вируса и может быть использован в производстве вакцин для сельскохозяйственных животных. 3 табл.

Способ отбора куриных эмбрионов, включающий визуальную оценку яиц, учет массы и индекса формы перед закладкой в инкубацию, отличающийся тем, что эмбрионы дополнительно оценивают по интенсивности эмбрионального развития в период инкубации путем определения на 18-19 час инкубации диаметра зародыша и определения на 63-64 час инкубации диаметра сосудистого поля желточного мешка, далее производят отбор эмбрионов, у которых диаметр сосудистого поля желточного мешка не менее 2 см, а разница между диаметрами сосудистого поля и зародыша находится в диапазоне 1,0-1,5 см.