Способ идентификации нуцеллярных и гибридных растений цитрусовых Советский патент 1988 года по МПК A01H1/04 A01G7/00 

(/

С

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции цитрусовых. Цель изобретения - ускорение процесса идентификации и повышение точности. Берут образцы листьев 2-3-месячных проростков, экстрагируют из них белки, проводят электрофорез и получают электрофореграммы листьев. Анализу подвер|-ают электрофореграммы изоферментов аспартатаминотранс- феразы при анализе сеянцев, полученных в результате скрещивания грейпфрут х трифо- лиата и гексокиназы для сеянцев мандарин X апельсин. Нуцеллярные сеянцы имеют только аллель материнского растения, гибридные сеянцы-аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих побегов и 2-3-месячных сеянцев.

оо

О5

со оо со

Изобретение относится к селекции цитрусовых и может быть использовано в сельском хозяйстве.

В цитрусоводстве широко используются межвидовые гибриды, например мандарин х X апельсин, грейпфрут х трифолиата, грейпфрут X лимон и др., применение которых в промышленных посадках позволяет избежать инбредного вырождения. Кроме того, такие гибриды, как правило, сочетают соединенные свойства принимающих учстие в гиб- ридизации исходных форм. Идентификация на ранних стадиях развития гибридных форм среди сеянцев, полученных от скреш.ивания, и выбраковка нуцеллярных сеянцев, имеющих место в большом количестве при таких скрещиваниях, является важной практической задачей.

Цель изобретения - ускорение процесса индентификации и повышение ее точности.

Для установления достоверности идентификации гибридных и нуцеллярных сеянцев с помощью изоферментов были взяты в анализ 148 плодоносящих деревьев, среди

Пример. У исследуемых образцов берет- 20 которых 70 по морфологическим и вкусося лист весом около 50 мг. Образец помещают в ступку, добавляют песок, заливают жидким азотом, добавляют 0,2-0,25 мл 0,05 М трис-НС1 (рН 8,3) буфера, растирают пестиком, центрифугируют в течение 20 мин при 15000 об/мин в рефрижераторной центрифуге, сливают надосадочную жидкость, содержащую белки данной ткани, и проводят электрофорез в блоке 7,5% ного полиакрила- мидного геля (рН 8,3) в трис-боратной системе при напряжении 300 В в течение

25

вым показателям были идентифицированы как гибридные, а 58 - как нуцеллярные. Результаты, полученные с использованием метода электрофореза, полностью совпали с результатами идентификации деревьев по морфологическим и вкусовым показателям.

Формула изобретения

Способ идентификации нуцеллярных и гибридных растений цитрусовых, включаю1 ч 30 мин. После окончания электрофореза щий взятие образцов листьев, экстракцию

гель извлекают из электрофоретической камеры и помещают в кювету для окраски. В случае излучения образцов гибридов мандарин х апельсин гели заливают красящей смесью, содержащей 90 мг декстрозы, 20 мг MgCl2,25 мг АТФ, 25 мг НАДО, 20 мг нет, 3 мг ФМС, 80 ед (0,035 мл) глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы, 10 мл 0,5 М трис-НС1 буфера (рН 8,0), 90 мл воды, выявляющей полосы активности фермента

35

из них белков, их электрофорез, получение электрофореграмм и их анализ на присутствие характерных полос-маркеров отцовского компонента для гибридных растений и по присутствию электрофоретических вариантов материнских растений для нуцеллярных растений, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса идентификации и повышения ее точности, получают электрофореграммы листьев 2-3-месячных проростков, а

гексокин азы, а в случае анализа гибри- 40анализу подвергают электрофореграммы изодов грейпфрут X трифолиата - красяц ейферментов аспартатаминотрансферазы при

смесью, содержащей 160 мг аспартата, 40 мганализе сеянцев, полученных в результате

а-кетоглутаровой кислоты, 60 мг прочной си-скрещивания грейпфрут х трифолиата и гекней РР соли, 50 мл 0,J М трис-НС1 буфе-сокиназы для сеянцев мандарин х апельсин.

0

5

ра (рН 8,8), выявляющей полосы активности фермента аспартатаминотрансферазы.

Изученные сорта в пределах вида не отличались друг от друга по электрофоре- граммам проанализировано 8 сортов мандарина, 6 сортов апельсина, 4 сорта грейпфрута и 1 трифолиата. Имеются аллельные отличия в спектрах изоферментов между различными видами, что и позволяет однозначно идентифицировать гибриды между видами.

Нуцеллярные сеянцы имеют только аллель материнского растения, гибридные сеянцы - аллели обоих родителей, при этом электрофореграммы гексокиназы и аспартатаминотрансферазы не различаются у плодоносящих деревьев и 2-3-месячных сеянцев.

Для установления достоверности идентификации гибридных и нуцеллярных сеянцев с помощью изоферментов были взяты в анализ 148 плодоносящих деревьев, среди

0 которых 70 по морфологическим и вкусокоторых 70 по морфологическим и вкусо

вым показателям были идентифицированы как гибридные, а 58 - как нуцеллярные. Результаты, полученные с использованием метода электрофореза, полностью совпали с результатами идентификации деревьев по морфологическим и вкусовым показателям.

Формула изобретения

Способ идентификации нуцеллярных и гибридных растений цитрусовых, включающий взятие образцов листьев, экстракцию

из них белков, их электрофорез, получение электрофореграмм и их анализ на присутствие характерных полос-маркеров отцовского компонента для гибридных растений и по присутствию электрофоретических вариантов материнских растений для нуцеллярных растений, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса идентификации и повышения ее точности, получают электрофореграммы листьев 2-3-месячных проростков, а

анализу подвергают электрофореграммы изо