Способ определения асептического воспалительного процесса при повреждении ткани Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

со

со

sj

Изобретение относится к медицине в частности к педаатрии, и может быть использовано для определения асептического воспалительного про- цесса у детей.

Целью изобретения является снижение травматичИости способа за счет использования в качестве биологического материала мочи ребенка, в кото- рой определяют содержание метаболитов ЛИПИДОВо .

Способ осуществляют следующим образом,

Н-бутанольный экстракт метабрли- тов липидов производят из 5 мл суточной мочи, предварительно центрифугируют мочу от клеток при 1,5 тыс об,мин в течение 5 мин. К5 мл надосадочной мочи добавляют 5 мл н-бута- нола и оставляют на 30 мин при комнатной температуре при периодическом встряхивании. Затем помещают смесь в делительную воронку, уд аляют ниж-. НИИ слой обезжиренной мочи, а бута- нольный экстракт переносят в сахарный стаканчик и выпаривают досуха в вытяжном шкафу в.песочной (водяной) бане при 60°С, можно использовать стрзпо сжатого воздуха или азота для ускорения выпариванияо Сухой остаток взвешивают и пересчитывают на суточное количество мочи. Увеличение экскреции биологически активных метаболитов липидов более 1200 мг/сут свидетельствует о наличии асептического воспаленияо

Полученный сухой экстракт взвешивают, растворяют в 5 мп физраствора и используют для определения его хемотаксических и цитолитических свойств методом кожного окна у здоровых взрослых добровольцев in vivo

На сгибательную поверхность предплечья, предварительно обезжиренную спиртом, наносят экскориатором сеточку (1,0«1,0 см) так, чтобы не были Повреждены капилляры и на коже пояни лась только плазма, которую снимают сухим тампоном. На ранку, сделан- ную прок.симальнее контр ольной на 5 см, наносят кашцо липидного экст ракта в изотоническом растворе NaCl, После экспозиции, равной 1 мин, остаток капли экстракта устраняют мар- левым тампоном. На обе ранки накладывают предметные стекла на 9ч, которые меняют на вторые стекла и снимают их через 24 ч. Снятые стек0

г

10

tS

5

0

5 д

ла фиксируют 96 метанолом, окрашивают по Романовскому, изучают под иммерсией.

Пример 1, Больная О,, 6 лет, поступила 16.05,85 г. Получила ожог кипятком (25% поверхности тела), перенесла шок. Была многократно обследована, в моче постоянно определялся мелкогранулированный тканевой детрит, высокая повреждаемость клеток воспаления липидают. В результате консервативной терапии в течение 1 мес в отпечатках кожного окна постоянно выявлялись нейтрофи- лы-64, макрофаги - 28, гранулоциты - 4 (1), через 24 ч нейтро4«лы - 60, макрофаги - 20, гранулоциты - 16 (И), Все клетки воспаления имели выраженные признаки дистрофии в виде наличия крупных вакуолей в цитоплазме и пикноза ядер. Полярные метаболиты липидов постоянно определялись в моче: 18.05.85 1,66 г/сут, 2,06.85 6,2 г/сут, 26.06.85 7,45 г/сут.

П р и м е р 2. Больная Н., 9 мес. поступила в отделение с подозрением на порок развития мочевой системы Девочка от 3-й беременности, вторых родов,, протекавших с токсикозом 1 и 2-й половиШ). Во время беременности в 1-й половине мать была привита противогриппозной сывороткой, Девочка родилась весом 2800 г, до 3-х мес развивалась нормально, В 3 мес появилась дизурия, подъем температуры тела до , изменения в моче, антибактериальная терапия не бьта эффективна. Поступила в тяжелом состоянии, температура до , явления токсикоза,, частые болезненные мочеиспускания. После проведения обследования на урограммах выявлено удвоение левой почки, функция снижена, гидронефрические изменения, мочеточник резко расширен, извитой. На цис- тограмме патологии нет имеется дефект наполнения на 5 ч. Поставлен диагноз: мегауретер верхней половины удвоенной почки слева, уретроцеле. После проведения дезинтоксикационной терапии состояние несколько улучшилось, нормализовались показатели крови. Больной проведена операция гемн- нефруретерэктомия слева, иссечение уретроцеле, Послеоперационньй период протекал тяжело, потребовались прямые переливания крови № 4 по 50 мл, дли тельная инфузионн ая тер апия, з аживление раны первичное. На 20-е сут выписана домой в удовлетворительном состоянии. При обследовании в динамике через 6 и 12 мес функция оставшейся половины удовлетворительная. Анализ мочи - норма.

Результаты исследования: Анали мочи при Анализ мочи в ка- поступлении тамнезе

0,066% Белок

Сплошь L

все поле

Нет

500 тыс

микробных тел

ови

ЭритроцитыПосев мочи

Роста нет

Анализ крови общий

Нет 2-3 в поле зрения

Нет

Существующее абактериальное интер стициальное воспаление осложняется у данного ребенка присоединением микробного воспаления и нарушенным оттоком мочи. Оперативное вмешатель ство, направленное на нормализацию оттока мочи, приводит к клиническому выздоровлению, ликвидируется бак0

S

5

териальное воспаление и нормализует- .ся метаболизм,

И р и м е р 3, Больная И.К., 6 с лет, гидронефроз, хронический пиелонефрит. Поступила с обострением,, осенью. В моче определяются полярные лигавды до 500 мг/сут, кристаллы, единичные лейкоциты. После 1 ,5-месячного лечения в моче липиды до 100 мг/сут, общее состояние удовлетворительное о

Пример 4. Больной П«Р., 14 леТ} ожог (15%) кипятком. Клиническое течение тяжелое, заживление протекало плохо, с отторжением транс плантата кожи, с нагное жем и некрозом, образованием келоидных рубцов. и наличием выраженной интоксикадиио 0 Лшшдурия в моче 1900 мг/сут.

Пример 5. Больной В.В., 8 лет, ожог пламенем верхних конечностей, ппощадью 10%. Клиническое течение средней тяжести, эпитепиза- ция первичным натяжением без нагноения с приживлением трансплантата кожи через 8-10 дней, выписан в удовлетворительном состоянии. Липидурия в моче 230 мг/суто

Пример 6. Больная С.А,,

4года, проникаюсций перелом теменной области, ушиб и размозжение мозга, ликворея. Острый период клинически протекал тяжело, липидурия в моче 1200 мг/сут. Состояние после пластики тяжелое, длительная температура,

П р им е р 7. Больная К.С,,

5лет, перелом левой теменной области, ущиб головного мозга. Острый пеQ риод протекал тяжело, однако температурная реакция бьта тапько один день, проводилась инфузионная терапия, лечили нейролептиками о Уровень липидов в моче 200 мг/сут

5 Проведена диагностика воспалитель ного процесса с помощью предлагаемого способа у 40 детей с интерстици- альным нефритом (биопсия), а также у больных с ожогами (30 чел) и скелетной травмой (10 чел о)о Результаты представлены в табл и 2,

0

5

0

55

В контрольных отпечатках через 9 ч воспалительный процесс характв ризовал-ся проявлением нейтро ялов, которые через 24 ч замещались макрофагами Признаков деструкции клеток не выявлялось. Результаты исследования морфологической картины в отпе

чатке опытной кожной ранки показали наличие извращенного хемотаксичес кого действия биологически активных метаболитов липидов: вместо пришедших в контрольную ранку нейтрофилов (норма) через 9 ч (табл,2) в огытной ранке появляются гистиоциты и макрофаги с признаками дистрофии,а у двух обследуемых (1,3) преобладал цитоли- тический эффект над хемотаксическим, так как практически все клетки, приходящие в опытную ранку, были разрушены в течение всего периода наблюдения (через 9 и 24 ч) В остальных случаях (2,4,5) во 2-й фазе воспаления в опытном кожном окне отмечалось сохранение или усиление извращенного макрофагапьного хемотаксиса при выраженном цитолитическом эффекте биологически активных метаболитов липидово Лимфоциты оставались неизменными. Нормальной ймены клеток воспаления не наступало. Кроме того, в отпечатках кожной ранки в опыте отмечались в большом количестве мелко гранулированные липидные структуры, а в ряде случаев кристаллы ура- тов,

Таким образом, исследование свойств биологически активных метаболитов липидов на клетки воспаления in vivo у взрослых здоровых добровольцев методом кожного окна свидетельствует о хемотаксическрй и цнтолитической активности их, что полностью подтверждает наличие зндо- генного асептического воспаления в организме ребенка.

Для идентификации и характеристи - ки экстрагируемых из мочи полярных метаболитов липидов применялись следующие методы:

-ИК-спектрометрия и масс-спект- рометрия - показано, что основная

часть экстрагируемых липидов мочи представлена дпиноцепочечными жирными кислотами (С,g.jo), эмульгированными этаноламином или мочевиной. Это бьшо подтверждено проведением высоковольтного электрофореза на бумаге;

-тонкослойная хроматографическая на силикагеле в неполярной системе растворителей для разделения общих .. пипидов (1) и в полярной системе растворителей, используемой для раз

0

0

деления фосфолипидов (2), Фракция, остающаяся на старте при применении 1-й системы растворителей, во 2-й системе растворителей разделяется на РЯД фракций, которые не совпадают по величине Р с основными.фракциями фо сфолипидов;

- газожидкостная хроматография полярных метаболитов липидов показала, что 32+3,1% от общего количества жирных кислот составляет арахидоно-г вая кислота, а также отмечается вьгсо- кое содержание моно- и полиненасьш1ен- ных жирных кислото

В моче здоровых детей и взрослых полярные метаболиты липидов отсутствуют, появление незначительных количеств (до 500-800 мг/сут) не свидетельствует о наличии воспалительного процесса в организме, являясь разновидностью адаптации цитомембран к стрессовым ситуациям, Тое ответной реакцией на воздействие новых факто- 5 ров окружающей среды (перемена климатических зон, сезона года), на воздействие повреждающих факторов (местный ожог, травма). Изучение действия малых концентраций полярных метаболи

тов липидов в кожном окне показало отсутствие провоспалительного действия этих концентраций: не было : отличия воспалительной реакции в ранках кожного окна под действием таких доз препарата и под действием изотонического раствора хлористого натрия (физраствор)

Предлагаемый способ определения асептического воспалительного процесса у детей является атравматичным, доступным для воспроизведения в клинических лабораториях.

Формула изобретения

Способ определения асептического воспалительного процесса при повреждении ткани путем исследования биологического материала, отличаю- щ и и с я тем что, с целью снижения травматичности способа, определяют содержание в моче метаболитов липидов, экстрагируе « 1х н-бутанолом, и при их уровне 1200 мг/сут и более при наличии хемотаксической и цито- итичеекой активности определяют

асептический воспалительный процесс.

Т а б л и ц а 1

Критерии диагностики воспапительного процесса у детей с хирургической патологией

Нозоология Количество Характер хемотаксиса Выраженность

липидов, . в кожном окне деструкции г/сут

Интерстициальный неф- езко. повьшен при наг Выражена

рит (40)5,9±0,7 личии цитолиза

Ожоговая болезнь (30) 5, Резко повышен при

наличии цитолизаВыражена

Скелетная травма (10) 2,67±0,3ПовышенВьфажеиа

Здоровые дети ОУмеренный, нейтро4ИЛЫНевыражена

Таблица 2

Результаты токсического действия полярных метаболитов липидов на клетки воспаления у добровольцев (метод кожного окна)

Обследуемый,,КонтрольОпыт

fr П/П------- -- «.-..

9ч24 ч9ч24 ч

Изобретение относится к медицине, точнее к педиатрии, касается способов диагностики асептического восг палительного процесса в организме ребенка пр различных заболеваниях ; Цель изобретения - снижение травма- тичности способа Для этого проводят биохимический анализ количества ли- пидов, выд1еляемых с мочой за сутки. Обнаружено, что суммарная экскреция липидов за сутки является специфич- иыы и чувствительным тестом для диагностики наличия, активности и тяжести асептического.интерстициального воспаления в ткани почек, в коже у детей. При уровне метаболитов липидов, экстрагируеьих н-бутанолом, 1200 мг/сут и более при наличии хе- мотаксической и цитолитической ности: определяют асептический воспалительный процесс. Предлагается без- биопсийньб атравматичный метод контроля за течением воспалительного процесса у двт. 2 табл. I (Л

н-70

м-20

г-10 .

н-70

м-20

л-2

н-90

м-8

л-2

н-70

г-10

л-10

н-90 м-10

м-60 л-10

м-18 и-35 ЗОЗ-2 эоз-4

Клеток нет, боль- шое количество

разрушенных клеток

м-90 л-10

Большое количесво фрагментов разрушенных ией

{Единичные

Большое количест- во фрагментов разрушенных клеток

. ::

и-40м-90

цитолиз н-8 эоз-15л-2

1377737

н-95 м-5

н-70 м-20

л-10 ф-10

П р и м е ч а н и е, н

г

нейтро йшы, м - макрофаги, л - лимфоциты, гистиоциты, ф - фибробласты, эоз - эозинофилы.

10 Продолжение табл.2

н-30 м-60

м-90 н-5

г-10

л-5