Способ диагностики снижения резерва хемотаксиса фагоцитов Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения резерва хемотаксиса фагоцитов .

Целью изобретения является повышение точности и сокращение времени выполнения способа.

Способ осуществляют следующим образом.

В области средней трети внутренней поверхности обоих предплечий после предварительной обработки этиловым спиртом (96 ) с помощью ланцета осторожно удаляют участок эпидермиса р аз- мером мм. На одной конечности кожное окно оставляют интактным

(спонтанный тест миграции клеток), а на другой конечности кожное окно однократно облучают низкоинтенсивным гелий-неоновым лазером, (стимулированный тест миграции клеток). При этом плотность потока мощности (ППМ) 0,64- 1,13 мВт/см2 и экспозиция воздействия составляет 3 мин. Оба кожных окна покрывают обезжиренными и стерилизованными предметными стеклами размером 2,5x2,5 см и фиксируют к конечности лейкопластырем. Смену предметных стекол в опытной и контрольной асепти- / ческой воспалительной реакции производят через 3 и 12 ч от ее начала. Полученные цитологические препараты

1

со

№

to J

фиксируют в смеси Никифорова в течение 10 мин, промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и окрашивают по методу Романовского- Гимчы. В полученных препаратах проводят дифференцирование и подсчет клеток с помощью светового микроскопа при увеличении 7x90. Для количественрованного теста. В качестве стимулятора использовано низкоинтенсивное излучение гелий-неонового лазера при ППМ 0,64 мВт/см2 и экспозиции облучения 3 мин. Оба кожных- окна покрыты предметными стеклами (2,5x2,5 см) и фиксированы к коже конечностей лейкопластырем Смену ст екюл I проводили че

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии. Целью изобретения является повышение точности и сокращение времени определения резерва хемотаксиса фагоцитов. Для этого на симметричных участках тела обследуемого формируют два кожных окна, одно из которых облучают излучением гелий-неонового лазера с плотностью мощности излучения 0,64-1,13 мВт/см2 в течение 3 мин. Через 12 ч определяют относительную разницу в числе фагоцитов в облученном и необлученном кожных окнах и при превышении числом фагоцитов в облученном окне числа этих клеток в необлученном на 75% и менее диагностируют снижение резерва хемотаксиса Фагоцитов. Способ прост, его точность выше, чем у известных способов, более чем на 70%, а время его выполнения в 6 раз меньше.1 з.п.. С

иого определения содержания нейтрофи- ю рез 3 и 12 ч. Результат исследования

лов и макрофагов просматривают по 10 полей зрения в каждом препарате, подсчитывают их сумму и вычисляют; среднее содержание клеток в 1 поле зрения (Иммунологические методы./Под 15 ред. Г.Фримеля. Пер., с нем. А.П.Тарасова. - И., Медицина, 1987 -с. 33,5).

Показатели резерва хемотаксиса нейтроАилов (РХН) и макрофагов (РХМ) вычисляют по следующим формулам:

РХН . JL° ,100%, РХМ --й§Ј х

ХЮО%, где Н0 и М0 - среднее содержание нейтрофилов и макрофагов в опыте (в стимулированном тесте)/ Hfc и Mfc 25 среднее количество нейтрофилов и мак- I рофагов в 1 поле зрения в контроле (в спонтанном тесте). Формулы опреде20

получен через 13 ч, т.е. в 1-ые сутки обследования ребенка. Через 3 ч количество нейтрофилов в стимулированном тесте - 20,8, в спонтанном тесте - 3,2, резерв: хемотаксиса нейтрофилов - 84,6%, через 12 ч количество макрофагов в стимулированном тесте - 15,2, в спонтанном тесте - 0, резерв хемотаксиса макрофагов - 100%. Во время проведения исследований побочных эффектов и осложнений от лазера не наблюдалось. Заключение: резерв хемотаксиса нейтрофилов и макрофагов соответствует нормальным величинам. Следовательно, данный случай не требует коррекции резерва хемотаксиса фагоцитов . I

лення РХН и РХМ разработаны на принци-i I п Р и м е Р В связи с реабили- пах математической пропорции, в кото- 30 тациейребенок Т. 13 лет (история борой количество клеток в стимулирован- лезни № 639) находился в дневном стационаре по поводу астматического бронхита (атопическая форма средней тяжести, период клинической ремиссии). С целью решения вопроса о выборе

ном тесте (Н0 или М0) принимается за 100%, а разница в стимулированном и спонтанном тестах (Н„-Н к или М -Мк) является искомой величиной. По величине РХН через 3 ч и РХМ через 12 ч судят о резервных возможностях нейтрофилов (нейтрофильная фаза хемотаксиса) и макрофагов (макрофагальная фаза хемотаксиса). При показателях резерва хемотаксиса фагоцитов в пределах 76-100% устанавливают нормальный резерв, при показателях 51-75% - незначительно сниженный, 26-50% - умеренно сниженный и 0-25% - резко сниженный резерв хемотаксиса клеток. Пример 1. Больной К., 12 лет (история болезни К4 438). Диагноз: острый бронхит, йа 7-й день лечения

40

средств реабилитации в комплексе обследований было проведено исследование резерва хемотаксиса фагоцитов. Лля этого одновременно было выполнено два кожных окна (3x5 мм) в области средней трети обоих предплечий. Одно кожное окно оставалось интактным и служило для спонтанного теста. На другое кожное окно для стимуляции 45 хемотаксиса фагоцитов воздействовали низкоинтенсивным излучением гелий- неонового лазера при ППМ 1,1 мВт/см2 и экспозиции облучения 3 мин (стимулированный тест). Обе ранки асептив связи с ухудшением состояния ребен- 50 веского воспаления покрывали стериль- ка было проведено исследование резер- ными предметными стеклами (2,5X2,5 см)

и фиксировали в коже предплечья /: помощью лейкопластыря. Стекла меняли

ва хемотаксиса фагоцитов. С этой целью после предварительной дезинфекции кожи на обоих предплечьях (в области средней трети) одномоментно сделаны ; кожные окна размером 3X5 мм скари- фикационным способом. Одно кожное

служило для спонтанного теста,

окно

а другое кожное окно

, для стимуличерез 3 ч для оценки нейтрофильной 55 фазы миграции и через 12 ч для оценки макрофагальной% фазы миграции. Результат исследования получен через 14 ч. Через 3 ч количество нейтрофилов в стимулированном тесте - 40,5,

5

0

получен через 13 ч, т.е. в 1-ые сутки обследования ребенка. Через 3 ч количество нейтрофилов в стимулированном тесте - 20,8, в спонтанном тесте - 3,2, резерв: хемотаксиса нейтрофилов - 84,6%, через 12 ч количество макрофагов в стимулированном тесте - 15,2, в спонтанном тесте - 0, резерв хемотаксиса макрофагов - 100%. Во время проведения исследований побочных эффектов и осложнений от лазера не наблюдалось. Заключение: резерв хемотаксиса нейтрофилов и макрофагов соответствует нормальным величинам. Следовательно, данный случай не требует коррекции резерва хемотаксиса фагоцитов . I

I п Р и м е Р В связи с реабили- 0 тациейребенок Т. 13 лет (история болезни № 639) находился в дневном стационаре по поводу астматического бронхита (атопическая форма средней тяжести, период клинической ремиссии). С целью решения вопроса о выборе

0

средств реабилитации в комплексе обследований было проведено исследование резерва хемотаксиса фагоцитов. Лля этого одновременно было выполнено два кожных окна (3x5 мм) в области средней трети обоих предплечий. Одно кожное окно оставалось интактным и служило для спонтанного теста. На другое кожное окно для стимуляции 5 хемотаксиса фагоцитов воздействовали низкоинтенсивным излучением гелий- неонового лазера при ППМ 1,1 мВт/см2 и экспозиции облучения 3 мин (стимулированный тест). Обе ранки асептичерез 3 ч для оценки нейтрофильной фазы миграции и через 12 ч для оценки макрофагальной% фазы миграции. Результат исследования получен через 14 ч. Через 3 ч количество нейтрофилов в стимулированном тесте - 40,5,

51

в спонтанном тесте - 3,2, резерв хемотаксиса нейтрофилов - 92,1%; через 12 ч количество макрофагов в стимулированном тесте - 5,5%, в спонтанном тесте - 3,5, резерв хемотаксиса макрофагов - 36,4%. При проведении об- 9ледований и наблюдении в течение 1 мес после лечения осложнений и побочных эффектов не наблюдалось. Заключение: РХН сохранен, РХМ умеренно снижен. Следовательно, в данном случае необходима коррекция нарушений резерва, хемотаксиса макрофагов.

Предлагаемый способ технически прост и доступен для практического выполнения в лечебно-профилактических и научно-исследовательских учреждениях, позволяет быстро и точно определить резерв хемотаксиса фагоцитов. При использовании низкоинтенсивного лазера в качестве стимулятора хемотаксической активности фагоцитов в б раз сокращается время выполнения способа и на 2-3 суток сокращаются сроки обследования больных. При воспроизведении способа обеспечивается синхронность постановки стимулирован

ного и спонтанного тестов и устанав- 3Q Одно из симметрично расположенных

ливается адекватность клеточного реагирования, а также устраняется неточность результатов, обусловленная динамикой заболеваний и лечения. Использование способа в клинике повышает точность оценки функциональных свойств фагоцитов и дает возможность дифференцированно определить различную степень резерва хемотаксиса фагоцитов не только при . острой патологии, но и при рецидивирующих, затяжных и хронических бронхолегочных заболеваниях. Точность способа при рекожных окон излучением гелий-нео вого лазера, определяют относитель разницу в количестве фагоцитов в о лученном и необлученном окнах и

,г превышении числом фагоцитов в облу ченном окне на 75% и менее диагн тируют снижение резерва хемотаксис фагоцитов.

4С Щ и и с я тем, что используют лаз ное излучение с плотностью мощност 0,88510,245 мВт/см2 при длительнос облучения 3 мин.

цидивирующей, затяжной и хронической; патологии повышается на 72,7-83,3%. При оценке резерва хемотаксиса фагоцитов учитываются только абсолютные показатели, отражающие истинные резервные их свойства. Способ позволяет дифференцированно оценивать сте- пень резерва хемотаксиса фагоцитов и дает точные критерии его нормы и снижения. Данный способ безопасен для больных и не имеет ни осложнений, ни побочных эффектов. При наблюдении за 50 здоровыми и 50 больными детьми в 5 процессе обследования и через 6-12 . месяцев после него ни в одном случае не возникло каких-либо осложнений и побочных действий.

20

Формула изобретения

что,

с целью

повышения точности способа и сокращения времени исследования, облучают

Одно из симметрично расположенных

кожных окон излучением гелий-неонового лазера, определяют относительную разницу в количестве фагоцитов в облученном и необлученном окнах и при

превышении числом фагоцитов в облученном окне на 75% и менее диагностируют снижение резерва хемотаксиса фагоцитов.

2. Способ поп.1, отличаюЩ и и с я тем, что используют лазерное излучение с плотностью мощности 0,88510,245 мВт/см2 при длительности облучения 3 мин.