Способ идентификации микроорганизмов рода BRUceLLa Советский патент 1988 года по МПК C12Q1/04 

со оо

05 О5

о

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается идентификации микроорганизмов рода Bru- cellat

Цель изобретения - повышение точности способа.

При м е р. Выращенные на питательной среде культуры, находящиеся в стационарной фазе роста, смывают и отмывают А-кратно центрифугированием фосфатным буфером рН 7,0. К осадку клеток добавляют 5-кратный объем ацетона и оставляют на 2-3 нед После проверки на специфическую сте- рильность клетки отделяют от ацетона центрифугированием. Полученный осадок промывают ацетоном и диэти- ловым эфиром центрифугированием и окончательно высушивают в вакуум- эксикаторе. Высушенные убитые микробные клетки экстрагируют 50 мл смеси хлороформа и метанола, взятых в соотношении 2:1. Полученный экстракт отфильтровывают и анализируют тонкослойной хроматографией на си- ликагеле в системе хлороформ - метанол - вода. После хроматографии фосфолипиды обнаруживают раствором 5%-ной фосфорно-молибденовой кислоты в этаноле.

В опытах используют следующие 10 культур бруцелл: классические культуры В. melitensis 565, В. abortus 99, В. suis АО, В. ovis 66/6, В. canis RM 6/66, В. neotomae 5КЗЗ, культура № 513 и культуры бруцелл № А, 11 и 12. В качестве ,гетероло- гичных культур используют Shigella dysenteria A3, Esherichia coli и Yersinia enterocolityca 0:9. В клетках Brucella обнаруживают кар- диолипин, фосфатидилглицерин, фосфат идилэтаноламин, фосфатидил-(К-метил) этаноламин, фосфатидил-(N,N-диметил) этаноламин, фосфатидилинозит, фосфатидил холин и фосфатидилсерин. Сходные по серологическим признакам с Brucella микроорганизмы Y. enterocolityca 0:9, Sh. dysenteria и . Е. coli имеют другой набор фосфоли- пидов. Все изученные культуры Brucella имеют одинаковый качественный состав фосфолипидов, В клетках 10 культур Brucella обнаруживается фос- фатидилхолин и фосфатидил-(N-метил) этаноламин, которые отсутствуют у микроорганизмов, сходных с Brucella по серологическим признакам.

В таблице приведено содержание фосфатидилхолина (ФХ) и фосфатидил- -(N-метил)этаноламина (ФМЭ) в составе фосфолипидов клеток некоторых видов Brucella.

Как видно из таблицы, по коли- чественному содержанию ФХ и ФМЭ клетки Brucella близки, что значительно повьшает точность способа идентификации микроорганизмов Brucella.

Использование способа позволит повысить точность идентификации бактерий рода Brucella за счет того, что возможно проведение анализа содержания фосфолипидов клеток на одной культуре многократно (повы- щается стандартность исследования), для анализа используют собственный липидный компонент бактерий, причем содержание ФХ и ФМЭ можно определять количественно по содержанию фосфора с фосфолипидах.

Формула изобретения

Способ идентификации микроорганизмов рода Brucella путем выращивания исследуемой культуры на питательной среде с последующим проведением тонкослойной хроматографии и определением продуктов метаболизма, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, получен-, ную биомассу бактерий обр-абатывают ацетоном, экстрагируют смесь хлороформа и метанола, взятых в соотноше31386661

НИИ 2:1, хроматографию проводят с (Ы-метил)этаноламина устанавливают полученным экстрактом и при наличии принадлежность исследуемой культуры в нем фосфатидилхолина и фосфатидил- к роду Brucella.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике бруцел- леза. Цель изобретения - повышение точности.способа. Способ заключается в том, что после выращивания исследуемой культуры отделяют биомассу, высушивают ее, экстрагируют смесью хлороформа и метанола (2:1), экстракт анализируют с помощью тонкослойной хроматографии и определяют наличие и количество фосфатидил- холина и фосфатидил-(Ы-метил)этанол- амина. Наличие этих фосфолипидов в экстракте позволяет идентифицировать анализируемые бактерии как принадлежащие к .роду Brucella. 1 табл. о S (Л