Способ подготовки эритроцитов к электронно-микроскопическому исследованию Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

со со со о: 00

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике патологии крови, например вызванной иммунной несовместимостью крови матери и плода.

.Целью изобретения является упрощение способа за счет сокращения стадий и дополнительное повышение точности исследования, нарушений структуры эритроцитов.

Цель достигается тем, что взятую в сухую пробирку кровь в количестве не более 1 мл без добавления антикоагулянтов оставляют при +2 - 4 С в те- чение 30-40 мин до образования сгустка, кусочки которого затем фиксируют обезвоживают, подвергают сушке в аппарате критической точки, напыляют в вакууме и просматривают в сканиругсш,ем микроскопе.

Способ осуществляют следующим образом.

Взятую из пупочной вены в обычную сухую пробирку кровь в кол1гчестве 1 мл без добавления антикоагулянтов оставляют при до образования сгустка (примерно 30-40 мин). Сгусток извлекают из прюбирки, острым лезвием иссекают кусочки размером 1-2 мм, кото- рые переносят в фиксирующий состав - 4%-ный глютаровой альдегид. Фиксация продолжается 3-4 ч при +4°С. Затем производят обезвоживание в спиртах возрастаюп;ей крепости и изоаминоцита- те, далее сушку в аппарате критической точки (Hitachi Critical Point Dryer НСР-2). После этого материал монтируют на предметном столике и на- пьшяют в BaKyyivie парами металлов в катодном испарителе (фирмы led). Изучение препаратов производят в сканирующем электронном микроскопе ISM 200.

Эффективность оценки степени очист ки крови новорожденных при иммунной патологии предлагаемым способом бьша подтверждена в процессе изучения эритроцитов при гемолитической болезни

новорожденных по резус-фактору и пос

,,Составит

ле ее лечения гемосорбцией в Специализированном род. доме № 1 г. Ленинградца. Наблюдалось 17 новорожденных. Кровь больных исследовали до и после гемосорбции с углем АДБ-1 при перфузии, равной 2 и 4 объемам циркулиру- кщей крови (ОЦК), а в качестве контроля - 8 здоровых новорожденных. Все новорожденные доношенные, с оценкой по Апгар при рождении не ниже 7 баллов. У здоровых новорожденных эритроциты имеют размер 7-8 мкм, двояковогнутую или уплощенную форму и poB-f ную поверхность клеточной оболочки. У больных детей размеры эритроцитов увеличены до 15 мкм, форма шаровидна или неправильная. Поверхность округлых эритроцитов отличается наличием мелких полусферических выступов, размер которых составляет около 0,03 мк После гемосорбции некоторая часть эритроцитов деформируется (количество их увеличивается в случаях перфузии 4 ОЦК). Одншсо на поверхности эритроцитов существенно уменьшается количество мелких полусферических выступов размером до 0,03 мкм.

Упрощение способа достигается за счет исключения стадии взятия биоп- сийного материала для подготовки об- разца. Использование сгустка предотвращает механическое повреждение эритроцитов, так как в течение всей обработки эритроциты заключены в сетку образованную нитями фибрина.

Формула изобретения

Способ подготовки эритроцитов к электронно-микроскопическому исследованию, включающий фиксацию образца, сушку и напьщение в вакууме парами металла, отличающий с я тем что, с целью упрощения способа за счет исключения стадий и дополнительного повышения точности исследования нарушений структуры эритроцитов, в качестве образца используют сгусток крови.

А. Агуреев

Изобретение относится к медицине, предназначено для диагностики патологии крови (напр, при иммунной несовместимости крови матери и плода). Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения стадий и дополнительное повышение точности исследо- вания нарушений структуры эритроцитов. Для этого пробу крови 1 Ш1 из пупочной вены в сухой пробирке без добавления антикоагулянта оставляют при 2-4°С 30-40 мин до образования сгустка, кусочки которого фиксируют, обезвоживают и сушат в аппарате Kpjs- тической точки. Затем напыляют в вакууме и просматривают в сканирующем микроскопе. Способ позволяет нсклю-.ит чить взятие биопсийного материала для подготовки образца, а использование сгустка предотвращает механическое поврезкдение эритроцитов, так как в течение всей обработ1 и эритроцита заключены в сетку, образованную нитями фибрина. § (Л

Редактор М. Бандура

Техред А.Кравчук

Заказ 2662/46Тираж 847Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-ЗЗ, Раушская наб., д. 4/5

Корректор А. Обручар