Способ выделения ультрамелких форм микробактерий туберкулеза Советский патент 1988 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/04 C12R1/32 

4ik

О СО Од Од

tc

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выделения ультрамелких форм микобакте- рий туберкулеза.

Цель изобретения - повьпиение точности способа.

Пример. Для получения ультра мелких форм (УМФ) 50 мг АО-дневной Iкультуры микобактерий туберкулеза бычьего типа (Bov-S) гомогенизируют в фарфоровой ступке и инкубируют в 5 мл раствора лизоцима (200 мкг/мл) на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,0 в течение 24 ч при После инкуба- ции суспензию центрифугируют 15 мин при 2000 об./мин. Суперилтант отбрасывают и к осадку добавляют 1 мл раствора трипсина (1 мг/млУ и инкубируют 20 мин при 37°С. В последующем к суспензии добавляют 2 мл раствора ингибитора трипсина из сои (0,5 мг/мл) Смесь инкубируют 20 мин при и центрифугируют 15 мин при 2000 об/мин, Надосадочную жидкость фильтруют через систему мембранных фильтров последовательно с размерами пор 0,85 - 0,45 - Oj23 мкм. Качество фильтрации проверяют методом пузырьковой точки. Полученный фильтрат засевают на питательные среды Финн-П и Левенштей на-Йенсена из расчета 0.1 мл на пробу и внутрибрюшинно заражают морских свинок из расчета 1 мг/кг массы животного.

У всех 24 животных, которым вво- |дили фильтраты, обнаружены характер- 1ные специфические и параспецифичес- кие изменения во внутренних органах, в то время, как у контрольных живот- 1цых специфические изменения во внут- SpeHHHX органах отсутствовали. При .посевах фильтратов на питательные среды, на среде Финн-П в 60% случаев

был установлен характерный рост слизистых колоний КОКОВЫХ форм микобактерий, которые образовывались в результате реверсии УМФ, а в контроле (прототипе) подобный рост был установлен в 10% случаев.

Для воспроизведения способа могут быть использованы концентрации лизоцима мг/мл, а время инкубации от 18 до 24 ч; трипсина 0,5-2,5 мг/мл при инкубации 20-г40 мин.

Использование предлагаемого способа позволяет выделять ультрамелкие формы микобактерий туберкулеза в достаточном количестве для исследовательских целей, что будет способствовать проведению систематизированных исследований по. изучению роли этих форм в патогенезе туберкулеза и развитии специфического воспаления. Использование способа позволяет также разработать новые вакцины и туберкулиновые препараты.

Формула изобретения

1.Способ выделения ультрамелких форм микобактерий туберкулеза путем фильтрации культуры микобактерий через мембранные фильтры и отбора фильтрата, содержащего целевой продукт, отличающийся тем, что,

с целью повьшения точности способа, перед фильтрацией культуру обрабатывают раствором лизоцима,отделяют образующийся осадок и обрабатывают его раствором трипсина.

2.Способ ПОП.1, отличающийся тем, что используют лизо-- цимв концентрации 0,2 мг/мл и трипсин в концентрации 1 мг/мл фосфатного буфера.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выделения ультрамелких форм (УМФ) микобактерий туберкулеза. Цель изобретения - повьшение точности способа. Сущность способа сводится к тому, что культуру микобактерий туберкулеза обрабатывают лизоцимом в оптимальной концентрации 0,2 мг/мл буферного раствора, затем смесь инкубируют, отделяют осадок и обрабатывают его трипсином в оптимальной концентрации 1 мл/мл. После инкубирования осадок удаляют, а надосадочную жидкость фильтруют через каскад мембранных фильтров. Вьщеляемость УМФ в 60% случаев. 1 з.п. ф-лы.