Способ определения антиокислительной активности биологического материала Советский патент 1988 года по МПК G01N33/49 

(21)389729J/28-J4

(22)14 .05.85

(46) 07.09.88. Бюл. № 33

(71)Ленинградский санитарно-гигиенический медицинский институт

(72)Е.Г. Доброхотова, В.Г. Крунчак, П.П. Денисенко, А.Т. Бурбелло,

М.С. Бурбелло и А.Е. Барсуков

(53)612.015(088.8)

(56)Куликов В.ГО., Молчанова Л.В.- Лабораторное дело, 1980, № 7, с. 419.

(54)СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

(57)Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения антиокислительной активности (АОА) биологического материала, предназначено для практической медицины, биологии, фармакологии. Цель изобретения - упрощение способа путем сокращения числа трудоемких операций. Для этого в электродную ячейку

с электродами дозатором подают окислительно-восстановительную систему (ОВС)-р-р ферроферрицианида калия, включают термостат, магнитную мешалку, измерительный и регистрирующий приборы для измерения и регистрации потенциала ОВС(Ео). Дозатором вводят исследуемую пробу и через фиксированное секундомером время измеряют и регистрируют значение потенциала ОВС (Е.). Вычис71яют значение потенциала ОВС 6f ЕО - Е и по градуировочной зависимости йf 5 Г(АОА) находят соответствующее значение АОА. Построение градуировочной зависимости Лf f(AOA) проводят одновременным измерением 4 ft и АОА наиболее точным способом. Происходит также корреляция изменения АОА биоматериала - крови, ее фракций, мочи, тканей, органов с изменением восстановительной емкости пробы. Время исследования сокращается с 3-7 ч до 5-10 мин.

i

(Л

4

to ю

ел ю

Изобретение относится к биохимическим способам определения антиокислительной активности (АОА) биологического материала и может быть использовано в практической медицине, биологии, фармакологии.

Цель изобретения - упрощение спо соба за счет сокращения числа трудоемких операций.

Способ осуществляется следующим о0разом«

: В электродную ячейку с электрода Mj дозатором подают окислитель-но- вЬсстановительную систему (ОБС) - раствор ферррферрицианида калия, включают термостат и магнитную мешалку, измерительньй и регистрирующий приборы, которыми измеряют и регистрируют потенциал ОВС (Е). Дозатором вводят исследуемую пробу, включают секундомер и через фиксированное время измеряют и регистрируют значение потенциала ОВС (Ej.). Вычисляют значение потенциала ОВС ЛГ.;. ЕО - Е и по градуировочиой зависимости &f f (ДОА) находят соответствующее значение АОА. Построение градуировочной зависимости dff f {АСА) проводят одно- нременш м измерением к АОА наиболее точным способом.

Новым свойством изобретения является корреляция изменения антиокислительной активности биологического материала -.крови, ее фракц мочи, тканей, органов с изменением восстановительной емкости Пробы.

Пример 1. Взята кровь у тяжелого больного, отцентрифугирована при 3000 об/мин в течение 20 мин, отобрана сыворотка. В качестве ОВС использовали раствор ферроферрици- ,анида калия при концентрации (CH)el/K4CFe(CH),05/0,005H

в 1 H.NaOH. В измерительную ячейку вводили 20 мл ОВС, измеряли потен- .циал системы (Вд 407 мВ), вводили 0,2 мл сыворотки и через 5 мин снимли значение ЕС которое оказалось равным 377 мВ. dfj 30 мВ. Также измеряли значение АОА по известному способу (АОА 1200) в системе с ли нетолом и по количеству малонового диальдегида (ЩА) 0,24 мкмоль/мл.

Пример 2. Взято 3 мл крови у того же больного в центрифужную пробирку с 0,3 мл 3, цитрата натрия, отцонтрифугировали при

10

15

20

3000 об/мин, отделена плазма от эрит- роцитпрной массы (измеряли последнюю). Остальное проведено по примеру I , Ер 407 мВ, Е5 318 мВ, iJf 90 мВ, МДА 0,95 мкмоль/мл

.эритроцитов.

П р .и м е р 3. Взята на исследование кровь 18-летнего практически здорового студента. Измерение проведено, по примеру 1. Получены сле- дуюпше результаты: сыворотка (Ео 407, ES, 363), 44 мВ, АОА 1800, МДА 0,68 мкмоль/мл сыворотки.

Пример 4. На исследование взята кровь 18- летнего практически здорового студента. Выделена лейкоцитарная фракгщя. В качестве ЬВС использовали раствор ферроферрициани да калия ( Д Fe ( i-lO-VS Ю- - г-моль/л в 1 н .ШОН. В ячейку вводили 20 мл ОВС, измеряли Ер, вводили 0,2 мл лейкоцитарной 25 фракции и через 5 мин снимали значение Е 48 мВ-. Измеряли также в этой же лейкоцитарной фракции МДА, равное 0,78 мкмоль/мл лейкоцитов.

Прим е р 5. Взято 5 мл крови у практически здорового 18-летнего студента в центрифужную пробирку с 0,5 мл 3,8%-него цитрата натрия. Проведено первое центрифугирование при 1000 об/мин в течение 7 мин, выделена обогащенная тромбоцитами плазма. Затем проведено второе центрифугирование при 4000 об/мин в течение 20 мин. Плазму отделили и в пробирку с тромбоцитами ввели 1 мл 3,8%-ного цитрата натрия. Число тромбоцитов в этом растворе равно 7,5 тыс. В качестве ОВС использЬвали раствор K3tFe(CH)(CH)J. 0,0025/ /О,00025 н. в 1 H.NaOK. В ячейку вводили 20 мл ОВС, измеряли Е, вводили 0,4 мл тромбоцитарного раствора и через 5 мин снимали значение Е,.

4f5 Измеряли также МДА (0,88 мкмоль/мл 0,17 мкмоль/1 тыс. тромбоцитов).

30

35

40

45

50

55

1

Пример 6. После декапитации у белой крысы выделили печень, взяли навеску ткани 100 мг, измельчили в гомогенизаторе. В качестве ОВС использовали раствор КзГГе(СН) /i (CH)g 0,05/0,0005 н. в 1 н. NaOH. Измеряли Eg, вводили 20 мл ОВС и этим раствором количественно переносили из

31422:

стакана и пестика гомогенизатора измельченную йавеску в измерительную , ячейку. Вводили в ячейку электроды и через 5 мин после соприкосновения ткани с ОВС измеряли 62 мВ. Измеряли также МДА этой же печени (19,1 мкмоль/1 г влажной навески ткани),

Пример 7. После декапитации д у белой крысы вьзделено сердце, взята навеска 100 мл, измельчена в гомогенизаторе. Дальнейшее измерение проводили по примеру 6. fj 56 мВ, МЦА 13 мкмоль/1 г влг1жной ткани. 15

П ри м е р 8. Исследование проведено по примерам 6 и 7. Взято 100 мг икроножной мьшцы. f J- 52 мВ, МДА 9,0 мкмоль/ I г ткани. 20

24

Изобретение позволяет сократить время исследования с 3-7 ч до 5- 10 мин.

Формула изобретения

Способ определения антиокислительной активности биологического материала путем исследования кинети- ки окисления пробы, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения трудоемких операций, к исследуемой пробе добавляют щелочной раствор ферроферрицианида калия, измеряют восстановительную емкость полученной смеси при скачке потенциала в пределах 30-90 МВ, а активность определяют по кривой описьшающей зависимость активности от величины восстановительной емкости.