Штамм культивируемых клеток человека,используемый для выявления антител к вирусу кори Советский патент 1988 года по МПК C12N5/00 

00

00

со

00

Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии, и касается субстрата для-диагностики кори и проведения серологических исследований.

Цель изобретения - создание штампа культивируемых клеток человека, хронически инфицированных вирусом кори.

Штамм используется в качестве субстрата при использовании метода флю- оресцирующих антител (МФА) для выявления антител к вирусу кори.

Штамм депонирован в специализированной коллекции перевиваемых клеток при Институте цитологии АН СССР под номером ВСКК(П) 7.9Д.

Штамм ВСКК(П) 79Д получен путем заражения клеток НЕр-2 вирусом кори, штамм Ленинград-16 - при множественности инфекции 0,001 ТЦЦ /клетка. Единичные клетки, вьвкившие.гпосле первичного заражения дали начало хронически инфицированной культуре.

Культуральные свойства.

Тип роста смешанный, перевивка 1-2 раза в неделю в среде 199 с 10% сыворотки крупного рогатого скота при температуре , монослой снимают 0,2%-ным раствором версена.

Вирусологическая характеристика.

В цитоплазме 90-95% клеток хронически инфицированной культуры МФА определяется антиген вируса кори в виде мелких и крупнызс гранул. Хранят в замороженном состоянии в присутст- ВИИ среды 199 с 10% сыворотки крупного рогатого скота и 10% глицерина.

Пример. Использование штамма ВСКК(П) 79Д.

Клетки ВСКК(П) 79Д культивируют в среде 199 с добавлением 10% сьшорот- ки крупного рогатого скота в 1-литровом матрасе. Клетки пересевают кажды 4-6 дней в соотношенрш . Культура постоянно имеет 90-95% клеток, содер жащих вирусоспецифич€ ский антиген, и клетки в любое время после пересе- ва могут быть использованы для приго товления препаратов ддтя МФА.. С этой целью клетки с поверхности матраса снимают механически и суспендируют в среде 199 таким образом, чтобы концентрация клеточной.суспензии составляла 1,5-2,0 -10 клеток/мп. Из полученной суспензии готовят маз- ки, нанося на предметное стекло по

0

5

O

5

0

3,0-4,0 10 клеток. Мазки фиксируют в холодном ацетоне в течение 15 мин. Препараты хранят до использования при минус 20°С.

Культура клеток БСКК(П) 79Д на всех пассажных уровнях характеризуется высоким процентом клеток, содержащих вирусоспецифический антиген (табл. 1).

МФА с применением в качестве ан- тигенсодержащего субстрата клеток ВСКК(П) 79Д пригоден для определения активности-антител к вирусу, кори в сыворотках больных и вакцинированных (табл. 2).

С помощью этого метода обследовано 44 больных и вакцинированных. Показана более высокая чувствительность МФА с использованием предлагаемого, субстрата по сравнению в РТГА.

Использование клеток ВСКК(П) 79Д позволяет стандартизировать и ускорить получение результатов по определению антител к вирусу кори в сыворотках больных и вакцинированных.

Формула изобретен и я

Штамм культивируемых клеток чело- века ВСКК(П) № 79Д, используемый для выявления антител к вирусу кори.

Т а б л и ц а 1 Количество клеток, содержащих антиген вируса кори в первично и хронически инфицированных клетках

ВСКК(П) 79Д

Таблица 2

Результаты исследования сывороток переболевших корью и привитых коревой вакциной методом флюоресцирующих антител при использовании в качестве антигена хронически зараженных клеток (П) 79 Д

и в РТГА

Изобретение относится к области медицины и касается способа усовершенствования диагностики кори и проведения серологических исследований. Целью изобретения является штамм культивируемых клеток человека, не- пользование которого в качестве субстрата способствует ускорению и стандартизации метода иммунофлюоресцен- ции для выявления антител к вирусу кори. Штамм ВСКК(П) 79 Д представляет собой клетки НЕр-2, хронически инт фицированные вирусом кори, штамм Л- 16. Использование данного .субстрата позволяет сократить время приготовления вирусосодержащего препарата с 5-7 до 2-3 дней. Предлагаемый субстрат может быть использован для выявления противокоревых антител в сьшо- ротках больных и вакцинированных. 2 табл. (Л