Способ определения оптимального состава среды для культивирования подвижных микроводорослей Советский патент 1989 года по МПК C12N1/12 A01G33/00 

СП

1

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и может быть использовано при выборе сред для культивирования подвижных микроводорослей.

Цель изобретения - повьппение точности и упрощение способа оценки степени оптимальности состава сред по токсической реакции подвижных мик- роводорослей.

Способ позволяет осуществлять прямой подсчет числа клеток и определить вес их сухой биомассы в единице объема исследуемой среды и конт- ролировать физико-химический состав этой среды не только по окончании опыта, но и в динамике, т.е. неоднократно по ходу эксперимента. Способ возможно осзтцествить двумя вариантам

При первом варианте осуществления способа подвижные микроводоросли выращивают до достаточной плотности (10-20-10 кл/мл) на исходной среде в культуральной камере емкостью 500 мл, продуваемой снизу смесью воздуха с COj. После этого в суспензию водорослей через отверстие в крышке камеры вставляются стеклянные

трубки типа пипеток с оттянутым кон-

чиком (площадь отберстия кончика 0,15-0,90 мм, емкость трубки 2- 3 мл), целиком заполненные исследу- eMOJi средой и загерметизированные сверху короткой стеклянной палочкой, вставленной в отрезок резиновой трубки, надетой сверху на пипетку. Среды в трубках и в культуральной камере при этом практически не смешиваются, если только удельный вес сред в труб ках не превьппает значительно удельного веса среды в культуральной камере. Подвижные микроводоросли из камеры переходят в .трубки с исследуемыми средами в количествах, пропор- циональных степени оптимальности данной среды для их жизнедеятельности. Через 1-2 сут стеклянные трубки вынимают из камеры с культурой и со держимое их анализируют обычными методами (плотность суспензии по числу клеток определяют подсчетом в камере Горяева, общая концентрация солей в среде высушиванием 1 мл и взвешиванием сухого остатка, содержание отдельных элементов в среде методом плазменной фотометрии и ТоП,). При втором варианте осуществления способа .подвижные микроводоросли вы1622

ращивают в любом культуральном сосуде до той же примерно плотности, что и при первом варианте осуществления способа.

После этого 50 мл суспензии микро водорослей заливают в одно из колен закрепленной на штативе U-образной системы, состоящее из двух загнутых снизу под прямым углом трубок диаметром 20 мл, соединенных в нижней своей суженной части прозрачной эластичной трубкой пережатой посередине зажимом. Во второе колено системы заливают исследуемую среду любого состава и любого удельного.веса Остатки воздуха из горизонтального участка системы удаляют пальпированием эластичной трубки. После этого зажим в горизонтальной части системы осторожно удаляют и обе среды соединяются одна с другой таким образом, что между ними образуется поверхность раздела фаз достаточно большой площади (10-12 ммМ. Систему можно усложнить, составив ее из трех (Ш-образная система) и более сообщающихся сосудов (через стеклянные трои НИКИ в нижней части). Через поверхность раздела фаз микроводоросли из исходной среды свободно переходят в . колена с исследуемыми средствами в соответствии со степенью оптимальности каждой исследуемой среды для их жизнедеятельности. В вертикальные .части трубок системы можно вставлять сверху тонкие стеклянные капилляры или пластиковые трубочки, через которые культура продувается смесью воздуха с С02. Через определенные промежутки времени (обычно раз в сутки) из трубок отбирают пробы для определения плотности культуры по числу клеток и по весу сухой биомассы клеток в единице объема суспензии и для одновременного контроля за тем, насколько сохраняется постоянство каждой из сред в трубках по ее физико-химическим показателям.

Пример 1. Штамм подвижных микроводорослей Dunaliella primolec- ta Butch. № 63, полученный из коллекции Института Ботаники АН УССР, выращивают в культуральной камере емкостью 500 мл, продуваемой снизу смесью воздуха с 0,5% СО до плотности 20«10 кл/мл на среде следующего состава, г/л: NaCl 29,0; KNOj 5,0; KHiP04 0,5; .3НгО 0,75;

г onU

0,38; MgSQ,.7HjO 0,24; раствор микроэлементов А4 1 мл, раствор FeS04 7 в смеси с ЭДТА ( З мг/л и ЭДТА 37 мг/л) 1 мл. Содержание Na в этой среде равно 11,41 г/л, К 2,33 г/л, так как значение рН среды до 7,0 доводили при помощи КОН

После этого в суспензию водорос-.

лей через отверстия в крьппке камеры вставляют стеклянные трубки типа пи- петок с оттянутым кончиком, запол- нейрые исследуемыми средствами и загерметизированные сверху короткой стеклянной палочкой, вставленной в надетый на пипетку отрезок резиновой трубки.

в табл.1 показан характер иссле- |цуемьк сред и содержание в них основных ионов.

Продолжение табл.1

Характер исследуемой среды

Содержание ионов г/л

Ка

,1,398 0,698

ю Основная среда, разбавленная в 8 раз 15

0

В табл.2 приведено среднее число клеток, обнаруженных через 2 сут. в трубках-пипетках с исследуемыми средами.

Таблица 2

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и может быть использовано при выборе сред для культивирования подвижных микр о- водорослей и бактерий. Целью изобретения является повышение точности, упрощение и снижение трудоемкости оценки степени оптимальности сред по токсической реакции микроорганизмов. Способ заключается в создании контакта между исходной суспензией клеток и испытываемыми средами на микроповерхности в системе из соединенных между собой в нижней части стеклянных сосудов и учете количества переместившихся в разные среды клеток после нескольких часов экспо-; зиции. 3 табл. с W

Таблиц

Основная среда без NaCl, разбавленная в 4 раза

Основная среда без NaCl, разбавленная в 1,5 раза

Основная среда без NaCl, разбавленная в 4 раза

Основная среда без NaCl, разбавленная в 1,5 раза

Основная среда, разбавленная в В раз

При этом исходные параметры исследуемых сред в трубках, как это

1

Вариант средд,

I Число кле- I ток, 10 кл/мл

Основная среда без NaCl, разбавленная в 4 раза

0,030

30

Основная среда без NaCl, разбавленная в 1,5 раза

Основная среда, разбавленная в 8 раз

Таблица 3

2,08 7,72

3,26 7,75 3,88 7,75

видно из табл.3, сохраняются практически без изменений.

Таким образом, отсутствие ЦаС1 в среде является фактором, неблагоприятным для жизнедеятельности Du- naliella primolecta. В случае отсутствия NaCl в среде водоросли отдают предпочтение менее разбавленной по сравнению с исходной среде, т.е. предпочитают среду с более высоким осмотическим давлением.

Пример 2. Штамм водорослей Dunaliella salina Teed. № 10, полученный из коллекции культур института Ботаники АН УССР, выращивают на

14511626

можности свободно перемещаться из средней трубки в боковые.

Установлено, что через А8 ч культивирования микроводоросли из средней трубки переместились в левую трубку, тогда как среда в правой трубке осталась совершенно прозрачной.

10 Таким образом, исходная, культураль- ная среда, разбавленная в 4 раза, становится неблагоприятной для жизнедеятельности Dunaliella salina и они из плотной исходной суспензии.в по д. 1 СЛ-ЧХ1 Л И А.- -I л. у х.-.j(. j . -

среде того же состава, что и Dunalie- 15 исках более благоприятных по осве11а primolecta Butch, штамм 63, но содержащей NaCl в количестве не 29,0, а 87,0 г/л. В остальном водоросли выращивают в тех же условиях,

щенности условий перемещаются только в среду, содержащуюся в левой трубке, т.е. их осмотаксис положителен только по отношению к исходной среде, разФормула

изобретения

что и Dunaliella primolecta до плот- 20 бавленной не более чем в 2 раза. ности 10-10 кл/мл.

Монтируют на штативе Ш-образную систему, состоящую из трех вертикально расположенных трубок, соеди-.

ненных снизу через стеклянный тройник 25 состава среды для культивирования прозрачным шлангом из силиконовой подвижных микроводорослей, включающий вьфащивание микроводорослей в соСпособ определения оптимального

резины, пережатым межд,у трубками при помощи съемных зажимов, затем в среднюю трубку заливают 50 мл полученной суспензии водорослей, в левую трубку такое же количество чистой осходной среды разбавленной в 2 раза, а в правую - ту же среду, но разбавленную в 4 раза (также 50:мл). После этого, не снимая зажимов пальпированием шлангов, удаляют оставшиеся в системе пузырьки воздуха, а затем осторожно снимают зажимы. Межд,у исходной суспензией водорослей и исследуемыми средами в результате этого образуются поверхности непосредственного соприкосновения (раздела фаз), обеспечивающие микроводорослям возсуде с контрольной средой с последующим контактированием полученной куль30 туры водорослей с исследуемой средой и определением токсической реакдии микроводорослей по отношению к исследуемой среде, отличающий- с я тем, что, с целью повьшения

35 точности и упрощения способа, контактирование культуры водорослей с исследуемой средой осуществляют путем создания поверхности раздела фаз с исследуемой средой, находящей40 ся по крайней мере в одном сообщающемся сосуде с сосудом с контрольной средой, с последующей инкубацией . культуры водорослей.

Составитель Е.Золотухина Редактор М.Недолуженко Техред А.Кравчук Корректор И.Эрдейи

Заказ 7036/20

Тираж 500

ВНШПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

исках более благоприятных по освещенности условий перемещаются только в среду, содержащуюся в левой трубке, т.е. их осмотаксис положителен только по отношению к исходной среде, разФормула

изобретения

бавленной не более чем в 2 раза.

.

.

Способ определения оптимального

25 состава среды для культивирования подвижных микроводорослей, включающий вьфащивание микроводорослей в сосуде с контрольной средой с последующим контактированием полученной куль30 туры водорослей с исследуемой средой и определением токсической реакдии микроводорослей по отношению к исследуемой среде, отличающий- с я тем, что, с целью повьшения

35 точности и упрощения способа, контактирование культуры водорослей с исследуемой средой осуществляют путем создания поверхности раздела фаз с исследуемой средой, находящей40 ся по крайней мере в одном сообщающемся сосуде с сосудом с контрольной средой, с последующей инкубацией . культуры водорослей.

Подписное