МЕЧЕННЫЕ 125J ПРОИЗВОДНЫЕ ТИРОКСИНА В КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТА ДЛЯ РАДИОИММУННОГО АНАЛИЗА И ПРОИЗВОДНЫЕ ТИРОКСИНА В КАЧЕСТВЕ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ 125J ПРОИЗВОДНЫХ ТИРОКСИНА Советский патент 1994 года по МПК C07B59/00 C07D233/68 

Описание патента на изобретение SU1459185A1

Изобретение относится к меченым радионуклеидам - производным тироксина, конкретно к новым меченным 125J производным тироксина общей формулы I HOOCHC где a) R1= -NH(CH2) ,
R2 = -CH3; б) R1= OH, R2= (CH2) ; в) R1= -NH(CH2) R2= (CH2) в качестве реагента для радиоиммунного анализа, что позволяет использовать его в медицине, и к новым производным тироксина общей формулы II HOOCHC где
a)R3= NH(CH2) ,
R4 = -CH3;
б) R3 = -OH,
R4= (CH2)OH ;
в)R3= NH(CH2) ;
R4= (CH2)OH в качестве промежуточных соединений для получения меченых 125J производных тироксина.

Целью изобретения является выявление новых меченых 125J производных тироксина в качестве реагентов для радиоиммуноанализа, способных связываться с антителами к тироксину, но не способных связываться с эндогенным тироксинсвязывающим белком.

П р и м е р 1. Получение N-ацетилтироксилгистамина (IIа).

Растворяют 50 г (54,4 мкмоль) N-оксисукцинимидного эфира N-ацетилтироксина в 2,5 мл диоксана и добавляют 12,8 мг (70,0 мкмоль) дигидрохлорида гистамина в 1,5 мл воды и 20,19 мкл (146,0 мкмоль) триэтиламина. Перемешивают в течение 20 ч при комнатной температуре (рН 8,5). Реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в этилацетате и промывают водой, высушивают Na2SO4, упаривают. Получают 44 мг (87,0% ) аморфного N-ацетилтироксилгистамина (IIа). ИК-спектр ( ν, см-1): 1550 (N - Н); 1645 (С= О). Мол. м. 912,0.

Найдено, % : С 29,01; Н 2,21; N 6,13; J 55,70; O - остальное.

Вычислено, % : С 28,95; Н 2,19; N 6,14.

П р и м е р 2. Получение N-ацетилтироксил-125J-гистамина (Iа).

К раствору, содержащему 5 мкг (5,5 нмоль) N-ацетилтироксилгистамина (IIа) в 10 мкл 0,5 М фосфатного буфера добавляют 37 МБк (1 мКи) Na 125J (без носителя) и 50 мкг хлорамина Т в 10 мкл воды. Реакцию останавливают через 60 с введением 300 мкг метабисульфита натрия в 10 мкл водного раствора. Реакционную смесь переносят на хроматографическую колонку, заполненную сорбентом. (Силосорб С 18 с размером частиц 7,5 мкм). Целевой продукт элюируют 50% -ным метиловым спиртом. Радиохимическая чистота продукта > 95% . Молярная активность 55-74 ПБк/моль (1500-2000 кКи/моль). Радиохимический выход 30% .

П р и м е р 3. Получение N-β-(n-оксифенил)пропионилтироксина (IIб).

Растворяют 50 мг (62,7 мкмоль) тироксина в 15 мл этилового спирта и добавляют 18,4 мг (70,0 мкмоль) N-оксисукцинимидного эфира β-(n-оксифенил)пропионовой кислоты и 0,1 мл N-метилморфолина. Перемешивают в течение 20 ч при комнатной температуре (рН 8,5). Реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток растворяют в этилацетате, промывают 0,1 н. раствором соляной кислоты, водой, высушивают Na2SO4, упаривают в вакууме. Получают 50,0 мг (87,7% ) N- β-(n-оксифенил)пропионилтироксина (IIб), т. пл. 173-176оС (этилацетат/гексан). ИК-спектр (ν , см-1): 1520 (N - Н); 1640 (С= О); 1740 (С= О карбоксильной группы). Мол. м. 925,0.

Найдено, % : С 31,23; Н 2,09; N 1,47; J 55,49; О - остальное.

С24Н19O6N4
Вычислено, % : С 31,14; Н 2,05; N 1,51.

П р и м е р 4. Получение N-β-(125J-n-оксифенил)пропионилтироксина (Iб).

К раствору, содержащему 5 мкг (5,4 нмоль) N-β-(n-оксифенил)пропионилтироксина (IIб) в 10 мл 0,5 М фосфатного буфера (рН 7,5), добавляют 37 МБк (1 мкКи) Na 125J (без носителя) и 50 мкг хлорамина Т в 10 мкл воды. Реакцию останавливают через 60 с введением 300 мкг метабисульфита натрия в 10 мкл водного раствора. Реакционную смесь переносят на хроматографическую колонку (4х250 мм), заполненную сорбентом (Силосорб С 18 с размерами частиц 7,5 мкм). Целевой продукт элюируют 80% -ным метиловым спиртом. Радиохимическая чистота продукта > 95% . Молярная активность 55-74 ПБк/моль (1500-2000 кКи/моль). Радиохимический выход 35% .

П р и м е р 5. Получение N-β-(n-оксифенил)пропионилтироксилгистамина (IIв).

Растворяют 40 мг (43,2 мкмоль) N-β-(n-оксифенил)пропионилтироксина (IIб) в смеси 2 мл диоксана и 2 мл этилацетата и добавляют 5,8 мг (50,0 мкмоль) N-оксисукцинимида. Охлаждают до 1-2оС и прикапывают раствор, содержащий 9,3 мг (45,0 мкмоль) дициклогексилкарбодиимида в 1,5 мл этилацетата. Перемешивают 1 ч при 1-2оС и 20 ч при комнатной температуре. Выпавшую дициклогексилмочевину отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме, остаток растворяют в 2,5 мл диоксана и добавляют 9,3 мг (50,0 мкмоль) дигидрохлорида гистамина в 1,5 мл воды и 14 мкл (100,0 мкмоль) триэтиламина. Перемешивают 20 ч при комнатной температуре (рН 8,5). Реакционную смесь упаривают до половины объема и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой, высушивают Na2SO4, упаривают в вакууме. Получают 30 мг (63% ) N-β-(n-оксифенил)пропионилтироксилгистамина, т. пл. 163-166оС (метиловый спирт/эфир). ИК-спектр (ν , см-1): 1520 (N - H); 1650 (С= О). Мол. м. 1018,0.

Найдено, % : С 34,27; Н 2,58; N 5,40; J 50,12; О - остальное.

С29Н26О5N4J4
Вычислено, % : С 34,18; Н 2,56; N 5,51.

П р и м е р 6. Получение N-β-(125J n-оксифенил)пропионилтироксил-125J-гистамина.

К раствору, содержащему 5 мкг (4,9 нмоль) N-β-(n-оксифенил)пропионилтироксилгистамина (IIв) в диметилформамиде (10 мкл), добавляюь 40 мкл 0,5 М фосфатного буфера (рН 7,8), 37 МБк (1мКи) Na 125J (без носителя) и 50 мкг хлорамина Т в 10 мкл воды. Реакцию останавливают через 60 с введением 300 мкг метабисульфита натрия в 10 мкл водного раствора. Реакционную смесь переносят на хроматографическую колонку (4х250 мм), заполненную сорбентом (Силосорб С 18 с размерами частиц 7,5 мкм). Целевой продукт элюируют 60% -ным метиловым спиртом. Радиохимическая чистота продукта > 95% . Молекулярная активность 130-148 ПБк/моль (3730-4000 кКи/моль). Радиохимический выход 20% .

П р и м е р 7. Использование меченых производных тироксина (1a-1в) в радиоиммунном анализе.

Биологические свойства соединений Ia-Iв оценивают в радиоиммунологических системах, которые составляют из компонентов набора Т4 - ПГ, предназначенного для радиоиммунного анализа (РИА) тироксина. Компонент набора - 125J-тироксин (III) заменяют на меченые йодом-125 производные тироксина Ia-Iв.

На чертеже показаны калибровочные кривые РИА с использованием соединений III и Ia, Iб, Iв.

В табл. 1 приведены результаты проверки параметров РИА на соответствие техническим условиям.

П р и м е р 8. Изучают связывание меченых производных тироксина Ia-Iв и промежуточных соединений IIa-IIв с антителами к тироксину и с тироксинсвязывающим белком сыворотки крови человека. Для этого одинаковые количества меченых соединений Ia-Iв и 125J-тироксина инкубируют при комнатной температуре в пробирках, содержащих анти-Т4 - АТ, ТСГ (тироксинсвязывающий глобулин) или сыворотку до достижения равновесия между свободной и связанной с белками формами соединений (1-2 ч). Эти формы разделяют путем прибавления сепарирующего агента и центрифугирования. Рассчитывают долю связанной формы. Долю связанного [125J] -тироксина принимают за 100% , доли связанных соединений Ia-Iв выражают относительно доли связанного [125J] -тироксина ("относительное связывание").

Одинаковые количества промежуточных соединений Ia-Iв и тироксина инкубируют при комнатной температуре в пробирках, содержащих нековалентный комплекс [125J] -тироксина с анти-Т4 - АТ, ТСГ или сывороткой до достижения равновесия в этих системах (1-2 ч). Разделяют связанный и свободный (вытесненный из комплекса в результате связывания соединений IIa-IIв или тироксина) [125J] -тироксин, относительную реакционную способность испытуемых соединений ("относительное связывание") определяют по отношению количеств тироксина и соединений Ia-Iв, вызывающих вытеснение половины количества тироксина из комплекса.

Результаты приведены в табл. 2.

Таким образом, меченые производные тироксина Ia-Iв связываются с антителами к тироксину, но не связываются в тироксинсвязывающим белком, что позволяет использовать их как для радиоиммуноанализа свободного тироксина, так и для радиоиммуноанализа общего тироксина (аналог может быть использован только для радиоиммуноанализа общего тироксина).

Похожие патенты SU1459185A1

название год авторы номер документа
СОРБЕНТ ДЛЯ СВЯЗЫВАНИЯ ТИРОКСИНА 1981
  • Ахрем А.А.
  • Стрельченок О.А.
  • Свиридов О.В.
  • Ермоленко М.Н.
  • Аввакумов Г.В.
SU1281005A1
ЗАМЕЩЕННЫЕ АМИНОМАСЛЯНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ НЕПРИЛИЗИНА 2012
  • Флери Мелисса
  • Гендрон Роланд
  • Хьюз Адам Д.
RU2604522C2
МОНОМЕР ТРЕТ-БУТИЛОКСИКАРБОНИЛ-L-ТИРОЗИЛ ПЕПТИДОГЛИКАНА И ЕГО J -МЕЧЕНОЕ ПРОИЗВОДНОЕ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ 1991
  • Джюрджица Левакович[Yu]
  • Бранка Вранешич[Yu]
  • Елка Томашич[Yu]
  • Иво Хршак[Yu]
  • Бранко Ладешич[Yu]
RU2046799C1
ПРОИЗВОДНЫЕ БУПРЕНОРФИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ 2007
  • Чэплео Кристофер Бурн
  • Льюис Джон Уилльям
RU2435773C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ СОЕДИНЕНИЙ, ВЫБРАННЫХ ИЗ КЛАССОВ АМИНОКИСЛОТ, АМИНОВ, АМИНОСАХАРОВ, САХАРОВ, ПУРИНОВЫХ И ПИРИМИДИНОВЫХ ОСНОВАНИЙ И НУКЛЕОЗИДОВ, КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ, АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ПРОИЗВОДНЫХ ТЕТРАГИДРОТИОФЕНА 1987
  • Золотарев Ю.А.
  • Зайцев Д.А.
  • Мясоедов Н.Ф.
SU1774613A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННОГО ТРИТИЕМ ПРОСТАГЛАНДИНА F 1990
  • Лазуркина Т.Ю.
  • Мясоедов Н.Ф.
  • Нагаев И.Ю.
  • Шевченко В.П.
  • Шрам С.И.
SU1774660A1
ПРОИЗВОДНЫЕ РОДАНИНА, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В КАЧЕСТВЕ ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКИХ АГЕНТОВ И ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА 1993
  • Джулиана Мауд Бью-Валлескей
  • Дэвид Чарльз Ханден
  • Чарльз Дэвид Джонс
  • Джилл Энн Панетта
  • Уолтер Норман Шоу
RU2131251C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КРАТНОМЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ ПРОСТАГЛАНДИНОВ ТИПА E ИЛИ ИХ ПРОИЗВОДНЫХ ТИПА A, B, F, ИЛИ МЕТИЛОВЫХ ЭФИРОВ ПРОСТАГЛАНДИНОВ ТИПА J 1988
  • Лазуркина Т.Ю.
  • Мясоедов Н.Ф.
  • Нагаев И.Ю.
  • Шевченко В.П.
  • Шрам С.И.
SU1646252A3
Ди(триэтиламмониевая)соль аденилил(2 @ -5 @ )-аденилил(2 @ -5 @ )аденозин-тирозин метилового эфира в качестве промежуточного соединения в синтезе 125J-меченого 2 @ ,5 @ -олигоаденилата 1990
  • Квасюк Евгений Иванович
  • Кулак Тамара Ивановна
  • Шуляковская Светлана Михайловна
  • Михайлопуло Игорь Александрович
  • Макаренко Михаил Васильевич
SU1768611A1
КАТИОННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ БАКТЕРИОХЛОРОФИЛЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ 2005
  • Шерц Авигдор
  • Брэндис Александр
  • Саломон Йорам
  • Эрен Дорон
  • Коэн Авраам
RU2397172C2

Иллюстрации к изобретению SU 1 459 185 A1

Реферат патента 1994 года МЕЧЕННЫЕ 125J ПРОИЗВОДНЫЕ ТИРОКСИНА В КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТА ДЛЯ РАДИОИММУННОГО АНАЛИЗА И ПРОИЗВОДНЫЕ ТИРОКСИНА В КАЧЕСТВЕ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЧЕННЫХ 125J ПРОИЗВОДНЫХ ТИРОКСИНА

Изобретение касается радиоактивно меченных соединений, в частности 125J -производных тироксина общей ф-лы I , где а) ; R2- -CH3 б) R1- -OH; ; в) , , которые могут быть использованы как реагенты для радиоиммунного анализа. Цель изобретения - создание новых полупродуктов для синтеза 125J меченных полупродуктов ф-лы I. Новые полупродукты общей ф-лы II , где а) ; R4- -CH3; б) R3- -OH; R4-(CH2)2-C6H4-OH; в) ; , получают реакцией, например, N-оксисукцинимидного эфира N-ацетилтироксина и дигидрохлорида гестамина в водно-диоксановой среде в присутствии триэтиламина. Синтез веществ ф-лы I из указанных полупродуктов ведут обработной 125J в присутствии фосфатного буфера и хлорамина Т в среде воды с последующим элюированием 50% -ным метанолом. Радиохимический выход, % ; молярная активность, кКи/моль, радиохимическая чистота, % : а) 30; 1500 - 2000; >95; б) 35; 1500 - 2000; >95; в) 20; 3730 - 4000; >90. Новые вещества способны связываться с антителами к тироксину и не способны связываться с эндогенным тироксинсвязывающим белком. 2 с. п. ф-лы, 1 ил. , 2 табл.

Формула изобретения SU 1 459 185 A1

Таким образом, меченые производные тироксина Ia-Iв связываются с антителами к тироксину, но не связываются в тироксинсвязывающим белком, что позволяет использовать их как для радиоиммуноанализа свободного тироксина, так и для радиоиммуноанализа общего тироксина (аналог может быть использован только для радиоиммуноанализа общего тироксина).

1. Меченные 125J производные тироксина общей формулы
HOOCHC
где
a) R1= -NH(CH2)
б) R1= OH, R2= (CH2)
в) R1= -NH(CH2)
R2= (CH2)
в качестве реагента для радиоиммунного анализа.
2. Производные тироксина общей формулы
HOOCHC
где
a)R3= NH(CH2) ,
R4 = -CH3;
б)R3 = -OH, R4= (CH2)OH ;
в)R3= NH(CH2) ;
R4= (CH2)OH
в качестве промежуточных соединений для получения меченных 125J производных тироксина.

SU 1 459 185 A1

Авторы

Бабынина Н.Д.

Ермоленко М.Н.

Колесникова Н.И.

Крупенко С.А.

Матевеенцев В.Д.

Мишин В.И.

Свиридов О.В.

Даты

1994-02-15Публикация

1987-02-13Подача