Ди(триэтиламмониевая)соль аденилил(2 @ -5 @ )-аденилил(2 @ -5 @ )аденозин-тирозин метилового эфира в качестве промежуточного соединения в синтезе 125J-меченого 2 @ ,5 @ -олигоаденилата Советский патент 1992 года по МПК C07H21/00 

Изобретение относится к области органической , конкретно, к новому производному тримера 2 , 5;-олигоадениловой кислоты общей формулы (I):

-но о

2ШЕЦ

°ТЧ

Н0 n Ade

О

° 000 COOCH-s

снГсНгСНг-И-КН-сн-ен -Оон шг,

гически активных 2,5 -олигоаденилатов в различных биологических объектах.

Соединением, близким по строению к описываемому, которое использ/ют для получения 125 l-меченого лиганда на основе метилового эфира тирозина, является аде- нилил(2-5)аденозин-2 , З -ди-О-сукцинилти- розмн метиловый эфир (I) формулы (II):

XI ON 00 СЬ

НОуОм

но о

Ade

Использование: в качестве полупродукта в синтезе 125 1-меченого 2|,5|-олигоаденила- та. Сущность изобретения: продукт: ди(триэ- тиламмониевая) соль адекилил I ТI L

11 N где AOE I,

N N

которое является полупродуктом в синтезе 125 i-меченого лиганда, используемого пои радиоиммунологическом определении биолоO -OIAW«

соосн,

P-O-i nMl COOCHj4- ,

HO CHrCH-NH-C-CHfCHfC-ob-C-CHfCHrC-NH-CH-CHf ОО HI) 6б

Недостатком этого соединения является наличие в нем лабильной сложноэфирной

связи. Как было показано для 2 -0-сукцината аденозин-3 ,5 -циклофосфата и его конъюга- тов с белком, гидролиз сложноэфирной связи в водных растворах происходит даже при -20°С (2).

Целью изобретения является ди(триэти- ламмониевая) соль аденилил (2-5)адени- лил(2-5 )аденозин-тирозин метилового эфира - полупродукт в синтезе 125 1-ме- ченого 2,5 -олигоаденилата, более стабильный по сравнению с описанным в литературе.

Поставленная цель достигается соединением (I), которое получают путем конденсации аденилил(2-5 )аденилил(2 -5 )-2 ,3 -0-(2-карбоксиэтил)этилиденаденозина (III) с метиловым эфиром тирозина (IV) в диме- тилформамиде в присутствии бутилхлор

Сущность изобретения поясняется еле- дующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1 Ди(триэтиламмониевая) соль аденилил(2 -5 )аденилил(2-5)аденозин- тирозин метилового эфира.

К раствору, охлажденному до 0-+4°С, 6,3 мг(4,7 мкмоль)аденилил(2 -5 )аденилил(2 -5 )-2 ,3-0-(2-карбоксиэтил)этилиденадено- зина три (триэтиламмониевой) соли (ill) в смеси 300 мкл диметилформамида и 8,3 мкл (6,06 мг, 60 мкмоль) триэтиламина добавляют 7,7 мкл (8,18 мг, 60 мкмоль) бутилхлор- формиата. Смесь перемешивают при комнатной температуре 40 минут и добавля- ют к ней суспензию, полученную при смешивании 6,96 мг (30 мкмоль) гидрохлорида метилового эфира тирозина, 300 мкл диметилформамида и 4,15 мкл (3,03 мг, 30 мкмоль) триэтиламина. Смесь выдерживают при комнатной температуре 15 часов, добавляют к ней 0,1 мл насыщенного при 0°С раствора аммиака в метаноле и упаривают. Остаток хроматографируют на колонке (50 см3) с ДЕАЕ-целлюлозой 23 SS в НСОз-фор- ме. Колонку элюируют раствором триэги- ламмонийбикарбоната в градиенте концентрации от 0,01 до 0,3 М. Фракции, содержащие продукт, собирают и лиофили- зуют. Получают 2,5 мг (1,6 мкмоль), 35,6%

5

соединения (I) УФ-спектр в воде, / на: . 260 им. 1Н-ЯМР спектр в , (5), мд от ТИС, 8,17; 8,13; 8,11; 7,91, 7,83; 7,75 с (по 1Н, Н-2, Н-8), 7,01 д(2Н, орто-Н, PliOH. .6 Гц), 6,68 д(2Н, мега-Н, PhOH, J-9.6 Гц); 6, ЮдОЫ, Н-1. ,,8Гц);5,94л(1Н, Н-1 , 0 Гц), 5,84 д(1Н,Н-1 ,Ji -2 H,2 Гц): 5,05 м(1Н, Н-2 ). 5,01 м (2bj, 2Н-2 ); 3,38 с (ЗН, ОСНз); 3,31 г (1Н, -NH-CH-CO-); 2,46 т (2Н, -CH2CH2-CO-NH-), 2,13 т (2Н, -CH2CH2CONH-); с (ЗН, СН3ССН2-СН2-)

Соединение (I) получают с хорошим выходом в индивидуальном виде и используют в качестве полупродукта в синтезе 1-ме- ченого лиганда (У)для радиоиммунологического определения 2.5 -олигоаденилатов в биологических объектах

,,п ,

W

НС о ie n-P-O J

In °е

Щ ::

O P-OV°N о- Т

0 00

(.0

i

;5 Г 0

Эh h

4D- 2 HjC-CH-CCOCH

Обработкой соединения (I) раствором Ма 31 в натрийфосфатном буфере в присутствии хлорамина Тс последующим добавлением раствора натрия бисульфитами колоночной хроматографией получают меченый лиганд (V).

Использование соединения (I) в синтезе

°1-меченою лиганда (V) иллюстрируется

конкретным примером синтеза последнего.

П р и м е р 2. го -меченый аденилил (21 -5) аденилил(2-5)зденозинтирозин метиловый эфир динатрпевая соль (IV).

В ампулу, содержащую 10 мкл 0,1 М натрий фосфатного буфера (НФБ) рН 7,5, добавляют 5 мкл раствора, содержащего 1,5 мкг (1,0 нмоль) аденилил(2/-5)аденилил(2-5) аденозин-тирозин метилового эфира (I) в 0,1 М НФБ. 6 мкл раствора, содержащего 100 МБк Na °l в НФБ, и 10 мкл раствора, содержащего 20 мкг хлорамина Т в 0,1 М НФБ Смесь перемешивают при комнатной температуре 15 минут, добавляют к ней 10 мкл раствора, содержащего 20 мкг натрия мета- бисульфита в 0,1 М НФБ, и хроматографируют на колонке (1x25 см) с ТЗК-гелем HW-40. Продукты элюируют раствором 0,1 М НФБ, содержащим 0,1% БСА, со скоростью 6 мл/час. Фракции, содержащие I- производное (V), объединяют и

лиофилизу от Пол ia ст 6 Р Г р 6 соединении(Vj-р диохил то on 95 98% и уделыоп pa диоа чч ью1960 Ки/ммоль Связывание мече:-ого мгзнгнс антителами специфичш м i к 2 Ь oi оад нилату(Ш) составляло QG „ /

Сравнительны а атиз устоичизос и сп единения и указанного потпх реакции иодирован i б m победе i методо1 препаративной то коспом oi /рема orpc фии на пластинках гилуфп ,а Кпнтроть прп водился путгг1 определения i or продуктов 133 i так е ко ii ice ва иг ходногосоедин°нпiсовместно г его I про иоводным t о т о р ы а з тс и i х хроматографа 1 иг i vi с е смотра плттиикм 251 -IMI i с вырезались зон соог mir - гг ленным соединениям отор Р о г з л1 л 005% раствором нито идо i° v cv/ r m Полученные ртстворь: вапись на спгктрофото егрп дпине волны 26 1 i

В реакцио шую г ть т

оптически4 одит ц (/з з г г /°1 г 1 аденилил(2 5 Ъдени розин метитпрого эг|ипт л 1 г ного производгюго i ог i г i - 15 минут после i n ia , з L ii i

оннои т Спо 1игь a IKPOTI т ог- по 10 мкп i от с р1 v ia inci f г с ром натрии ic i nn , С/ н и раствор наносился н- и к и тм, юграфировался в ci трмг зоп отгио

КОНЦ ВОЧНЫИЗМ 1 1К 7П 1 С3 Ч

легко детектируемы ГПЕ j,c р ч

рП 1

Г I

г /1

f

мча ог

одчи w

510

6 202 о

79«С

Tpi 1C О Яь l 1С«- с г i i, i iiч с )

пога я( с -i 1Л1 5 i с I/ т |тт ноятг О б р а . г т 1 of че toqccji3i anti л ni )

i/ ац°т тлкнт о irc 1 н i ir нм1 п(2 1 тт ози- i пет i огт i тн ( nj о TQ ч р0) )- i t.ipn- ii fb De-,j та

т Р Пл. 3 г л 1 J Р 1 l i G

3 П Ч Ch°HTOf p L, Оь i v |И 11ЛЧ ПГ1

и и с nppt ант по е е

ОТЧО I П I Г enL I

Г D Р Г О V i j

г- °от ще

I ти f i in niaan3 Fiui о iioin tp t nrpi Nopi or uen- c ц 1 л i nc ч о а зат°м ipit0 a i J о/ |1гон РРТП дни i ц i чт-п ct 11 i т о о i не сто ч и

О П С Я с г ( niL i ННа ПО

о т i i- е ч i г с ° i i с i ° i

с п р т - о г r p н и i

1И ТР РЧ п П1 О ь с 1РНИ

и i л 5 ii n-iTif 10зин rie

т ПОПТ Р 1

;г( - пиогч u i ирного сррли °н1я в

1 с i i ог

т- оаде титата

псемс ер

uc ja пн

Го Г ГЬ -тр7

8 б

7 8