Способ определения атерогенного нарушения липопротеинового спектра плазмы крови Советский патент 1989 года по МПК G01N33/92 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к клинико-биохимичес- кой лабораторной диагностике и кардиологии .

Цель изобретения - повьшение точности способа диагностики за счет повышения его чувствительности.

Способ осуществляют следующим образом.

После 12-часового голодания утром натощак в сухую чистую пробирку, содержащую кристаллический ЭДТА в качестве антикоагулянта, из вены локтевого сгиба исследуемого берут

ло 2 мл крови. В плазме определяют содержание холестерина липопротеинов высокой плотности () и общего холестерина иэвестньшн методами Про изводлт также электрофоретическое фракционирование окрашенной на липи- дь1 плазмы способом диск-электрофореза липопротеинов в многослойном по- лиакриламидном геле (Д) , После вы- держивания в буферном растворе в течение одних суток заключенных в стеклянные трубки столбиков полиакрил- амидного геля производят денситомет- рическую запись диск-электрофореграм липопротеинов (ЛП), для чего может быть использован денситометр ,

Денситограмма диск-электрофорег- раммы имеет следующий вид (от катода к аноду): I - альбумины,связан- ные. с неэтернфицированными-жирньии кислотами (НЭЖК); 2 - быстро мигрирующая подфра.кция с/-липопротеинов; 3 - медленно мигрирующая подфракция попротеинов; 4 -/3-липопротеины; 5 - пре-р липопротеины; 6 хиломикроны Альбумин-НЭЖК и хиломикроны не имеют непосредственного отношения к формированию атеросклеротических изменений в организме, позтому их в расчет не принимают. Для количественной оценки диагностически важных пиков замеряют их высоту и ширину на уровне середины высоты. Полученные, значения умножают друг на друга и на постоянный коэффициент 1,064. Сумму площадей -пиков складывают и принимают за 100%о Затем определяют процентную долю каждого пика. Дополнительно складывают площадь пиков быстро и медленно мигрирующей подфрак- ции of-липопротеинов и принимают их сумму за 100%, затем рассчитывают-их процентную долю и соотношение между быстро и медленно мигрирующими под- фракциями. После чего производят расчет индекса атеиогенности по формуле „. (

d

ИА

g 5

0 5 0 5

5

0

d - процентное содержание медленно мигрирующей подфрак- ции липопротеинов.

При значении ИА 2,8 и бодэе диагностируют атерогенное нарушение липо- протеинового спектра плазмы крови.

Холестериновьш индекс атерогенности находят следующим образом.Сумму двух пиков в(-липопротеинов (быстро и медленно мигрирующей подфрак- ции) принимают за содержание al- КС в ммоль/л. Находят соотношение этих подфракций и содержание холестерина в них. Далее рассчитывают холестериновый швдекс атерогенности по формуле

хс - (-хс)

. ™ - оГ- хс;

где ХИА - холестериновый, индекс атерогеыности;

ХС - содержание общего холестерина плазмы крови; о( -ХС - содержание холестерина eLлипопротеинов;tx -ХС - содержание холестерина

медленно мигрирующей под- фракции (-липопротеинов. При значении ХИА 19,5 и более диагностируют атеросклероз.

, П р и м е р 1 . Больная Ш., 43 лет с диагнозом: остаточные изменения после перенесенного туберкулеза тригрудных лимфоузлов. Сегментарный пневмосклероз язычкового сегмента слева.

Лабораторно больная исследована до начала лечения. Из ординарных унифицированных тестов для суждения об атерогенных нарушениях в липопротеи- новом спектре плазмы .крови были использованы тесты на содержание -ХС, общего холестерина плазмы (ХС) и холестериновый коэффициент атерогенности липопротеинового спектра ХСз14.1ХС1 о( -ХС

Изобретение относится к области медицины, а именно клинико-биохимической лабораторной диагностике и кардиологии. Целью изобретения является повышение точности способа за счет повышения его чувствительности. У пациента натощак берут около 2 мл крови, центрифугированием отделяют плазму. В плазме определяют содержание общего холестерина и холестерина с -липопротеинов. Кроме того, проводят электрофоретическое разделение липопротеинов электрофорезом в полиакриламидном геле с последующий записью денситограммы и определением содержания пре- -липопротеинов, /ь-липопротеинов, медленно и быстро мигрирующих подфракций о -липопротеинов. После чего рассчитывают индекс атерогенности, и при его значении 2,8 и более диагностируют ате- рогенное нарушение липопротеинового спектра плазмы. При атеросклерозе дополнительно определяют содержание холестерина в медленно мигрирующей подфракций о(-липопротеинов и рассчитывают холестериновый индекс атерогенности. При его значении 19,5 и более диагностируют атеросклероз. Чувствительность способа увеличивается более чем в пять раз по сравнению с прототипом. I з.п. ф-лы. (Л 4 а СП

Ид - индекс атерогенности;

а. - процентное содержание пре

/i-липопротеинов; b - процентное содержание р-липопротеинов;

с - соотношение между быстро и медленно мигрирующими подфракциями о -ли1 опроте- инов;

Содержание с(-ХС составило 1,36 ммоль/л при норме 1,235-1,435 со значениями XtSxl,335±0,051 ммоль/л. Содержание ХС составило 5,10 ммоль/л при норме 3,909-4,382 со значениями X±Sx4,145±

±0,121 ммоль/л. Холестериновый коэффициент атерогенности липопротеинового спектра 2,75 при норме 1,986 - , 2,406 со значениями Xt S.x 2,19610,107.

51

Определение атерогенности липопроте- инового спектра по известному способу дает показатель 0,59, который весьма мало отличается от показателя нормы (0,645-0,745 со значениями XiS 0,69510,026), обнаруживая некоторое превалирование содержания антиатерогенных липопротеинов - ЛПВП у больной с легочной патологией,

Определение атерогенности липопро- теинового спектра по предлагаемому способу дает следующий результат:ИА 1,055 (при норме 1,240-1,816 со значениями X ± S 1 ,528±0, 147) .

Оценивая полученные данные, нельзя не обратить внимание на то, что найденный показатель далеко отстоит от критериев обнаружения атеросклероза, который не выявился и при тщательном клиническом исследовании больной, если показатель атерогенности липопротеинрвого спектра, найденный известным способом, в 1,77 раза меньше среднего показателя нормы, то показатель атерогенности липопротеи- нового спектра, определенный предла- гаемьт способ.ом, в 1 ,448 раза меньше среднего показателя нормы, предлагаемый способ более правильно отражает содержание патохимических изменений в организме больной, чем холестериновый КА, поскольку при тщательном клинико-экспериментальном исследовании у больной не был выявлен атеросклероз, легочная же патология обычно обусловливает суммарной фракции в(-липопротеинов.

Приме р 2. Больной Р, 57 лет с диагнозом основным: цирротический туберкулез в/доли левого легкого с полостями БК- и сопутствующим: ИБС: стенокардия покоя. Атеросклерюз аорты, коронарных и мозговых сосудов, пен 1-11 стадии.

Лабораторно рольной исследован до начала лечения. Из ординарных унифицированных тестов для суждения об атерогенных нарушениях в липопротеи- новом спектре плазмы крови были использованы тесты на содержание о(-ХС, общего холестерина плазмы (ХС) и холестериновый коэффициент атерогенности (КА) липопротеинового спектра (-ХС} ,. of-XC

Содержание cf-XC составило 0,526 ммольД (при норме 1,235-1,435 со значениями

xtS l,335tO,051 ммоль/л), содержа67516 6

ние ХС составило 2, ммоль/л (при норме 3,908-4,382 со значениями ,15tO, 121 ммоль/л). Холесте , риновый коэффициент атерогенности липопротеинового спектра 2,865 (при норме ,986t2,406 со значениями XtS Г2,196 iO,P7).

Определение атерогенности липо10 протеинового спектра по известному способу дает показатель 0,62, который практически не отличается от показателя нормы (0,645-0,745 со значениями XtS 0, 695 0,026).

15 Определение атерогенности липопротеинового спектра по предлагаемому способу дает следукяций результат: ,8 при норме 1,240-1,816 со значениями Х± S х 1 , 528+0, 147 . Получен20 ный показатель в 1,83 раза превосходит средний показатель нормы, отличаясь на 1,0 ед.от верхней границы нормы.

Оценивая полученные данные, нель25 зя не отметить, что если традиционный показатель холестеринового коэфХС-(о(-ХС)

фнциента атерогенности-j---- -

O - ЛС

отражающий отношение содержания ате30 рогенных липопротеинов к таковому атиатерогенных ЛП, у данного больного увеличен в 1,3 раза (отличаясь на 0,46 ед. от верхней границы нормы), то показатель, определенный по

25 предлагаемому способу, в 1,83 раза превосходит средний показатель нормы, отличаясь на 1,0 ед. от верхней границы нормы. Следовательно, предлагаемый способ правильно отражает

4Д содержание биохимических изменений при сопустствующем атеросклерозе, более чувствителен и точен, чем известный, связанный с определением холестеринового коэффициента атеро45 генности липопротеинового спектра плазмы.

Известный способ оценки атерогенных нарушений в липопротеиновом спек50 тре плазмы в данном случае оказьтает- ся незффективньш.

П р и м е р 3. Больная Е., 70 лет с диагнозом основным: инфильтратив- ный туберкулез легких в фазе распа55 да, БК+, острая // долевая правосторонняя пневмония, и сопутствующим: атеросклероз аорты, коронарных и мозговых сосудов, атеросклеротический кардиосклероз, ЛСН 1-П ст.

Из ординарных унифицированных тестов для суждения об атерогенных нарушениях в липопротеиновог- спектре плазмы крови бьши использованы тесты на содержание -ХС, общего холестерина плазмы (ХС) и холестериновый коэффициент атерогенности липопроте- инового спектра j

сх;-хс . . . .

Содержание составило 0,800 ммоль/л (при норме 1,235-1,435 со значениями X±S V 1,,551 ммоль /л), содержание ХС составило 3,80 ммоль/л (при норме 3,908-4,382 со значениями X ± 8x4,,1 21 ммоль/ 1 Холестериновый коэффициент атерогенности липопротеинового спектра 3,75, (при норме 1,986-2,406 со значениями Xi S У 2, 196 t О, 107).

Определение атерогенности липопротеинового спектра по известному способу дает показатель 0,59, который весьма мало отличается от показателя нормы (0,645-0,745 со значениями Xt ±S к 0,695+0,026), обнаруживая некотог рое превалирование содержания анти- атерогенных липопротеинов - ЛПВП у больного с сочетанной патологией.

Определение атерогенности лнпо- протеинового спектра по предлагаемому способу дает следующий резуль- тат:ИА 40,44 (при норме 1,240-1,816 со значениями X±SУ1,52810,147).

Оценивая полученные данные, о:б- ращают внимание на следзтощее: показатель холестеринового коэффициента атефогенности в 1,7 раза (3,75:2,196 превышает средний показатель нормы, подтверждая атерогенные изменения в организме; найденньш предлагаемым способом показатель в 25,5 раза (40,44:1 ,528) пр евьшае т средний пока- затель нормы, что подтверждает его гораздо более высокую чувствитель- ность по сравнению с предыдущим (традиционным).

Известньй способ оценки атероген- ньпс нарушений в липопротеиновом спектре плазмы у данного больного оказался неэффективным.

П р и м е р 4. Больной 67 лет, - поступил с диагнозом: ИБО, стенокардия покоя и напряжения. Атероелеро- тический кардиосклероз. Атеросклероз аорты, венечных артерий, Н,.

При биохимическом ксследовании плазмы крови общепринятьми методами оказалось, что содержание общего

0

Q

Q с

0

5

холестерина составляет 5,224 ммоль/л ХС-ЛПВП 0,864 ммоль/л. Показатель холестеринового коэффициента атерогенности липопротеинового спектра:

ХС-(л-ХС) ,- -,.- .- равен 5,046 (при норме

1,8-3,3 со значениями XtS f2,196± ±0,107).

Дополнительно было проведено диск- электрофоретическое исследование спектра липопротеинов в столбиках полиакриламидного геля.

Затем определяют холестериновый

v«A ХС-()

индекс атерогенностиХИА -7 )

л -лС м

равный 34,88 (при норме 3,253-5,520 со значениями X ±S х4,227tO,107).

Поскольку полученный показатель оказался больше 19,5, у больного диагностируют атерослероз.

П р и м е р 5. Больной 70 лет поступил с диагнозом: ИБС, стенокарг дия напряжения (отеросклеротичес- кий) и постинфарктный кардиосклероз, инфаркт, атеросклероз венечных артерий, аорты.

Йри биохимическом исследовании плазмы крови общепринятыми методами оказалось, что содержание общего холестерина составляет 5,983 ммоль/л, о(-ХС, 0,7481 ммоль/л. Показатель холестеринового коэффициента атерогенности липопротеинового спектра плазмы, найденный известным способом и определенный по формуле (5-ХС)

равен 6,997 (при норме 1,8-3,3 со значениями Xt Sx 2,196t 0,107). I Дополнительно было проведено диск- электрофоретичесКое исследование спектра липопротеинов в столбиках полиакриламидного геля.

Далее вычисляют холестериновый инХС-(е(-ХС)

деке атерогенности jvr

« м

19,533 (19,5).

Поскольку полученный показатель равен 19,5, у данного больного диагностируют атеросклероз.

Таким образом, предлагаемый способ более чем в 5 раз чувствительнее известного способа.

Формула изобретения

pa плазмы крови путем электрофорети- ческого разделения липопротеинов, определения процентного содержания npe-/J-липопротеинов, /J-липопротеинов и з(-липопротеинов с последующим расчетом соотношения суммы пре-;з-липопротеинов и -липопротеинов с о(-липо- протеинами, отличающийся тем, что, с целью повышения точности ю способа за счет повьшзения его чувствительности, дополнительно разделяют С-липопротеины на быстро и медленно мигрирующие подфракции, определяют их процентное содержание с последующим is расчетом индекса атерогенности по формуле

ЙА i2ib)c . -

где ИА - индекс атерогенности, а - 20 процентное содержание пре-/у-липопро- теинов, Ъ - процентное содержание /5-липопротеинов, с - соотношение между быстро и медленно мигрирующими подфракциями -липопротеинов, d - 25 процентное содержание медленно мигрирующей подфракпни а -липопротеигюм и при значении индекса 2,8 и более определяют атерогенное нарушение лн попротеинового спектра плазмы крови 2. Способ по п.1, о т л и ч а ю- щ и и с я тем, что, с целью повышения точности определения при атеросклерозе, дополнительно определяют уровень общего холестерина плазмы крови, холестерина «/-липопротеинов и холестерина медленно мигрирующей подфракции о -липопротеинов с последующим расчетом холестеринового индекса атерогенности по формуле

-..., ХС - о( -ХС

ХИЛ -j-np где ХИЛ - холеd-XL „

стериновый индекс атерогенности, ХС содержание общего холестерина плазмы крови, of-XC - содержание холестерина с -липопротеинов и / -ХС /«- содержание холестерина медленно мигрирующей подфракции о -липопротеинов, и при значении индекса 19,5 и более определяют атерогенное нарушение при атеросклерозе.