Способ получения фосфолипидов Советский патент 1989 года по МПК A23J7/00 

Изобретение относится к биотехнологии и масложировой промьшшенности :и касается способов получения фосфо- липидов.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.

Способ осуществляется следующим образом.

Лецитин суспендируют в 0,1 М натрий-ацетатном буфере с рН 5,6. Лля реакции переэтерификации к суспензии добавляют спиртовый акцептор, раствор хлористого кальция и раствор фосфоли- пазы D. При встряхивании вносят диэтиловый эфир, а затем инозит из расчета 2-16% к объему реакционной смеси.

Пример 1. Синтез фосфатидил- метанола фосфолипазой D из Rhaphanus sativas в 0,1 М натрий-ацетатном буфере, рН 5,6. Концентрация компонентов в реакционной среде: лецитин 2,5 мМ, CaClii 2,6 мМ; фермент 0,4 г/л; метанол 40 мл/л; диэтиловый эфир 300 мл/л; инозит 2% к объему реакционной среды. Реакцию переэтерификации проводят в течение 2 ч. Выход целевого продукта 75%.

Пример 2. Синтез фосфатидил- метанола фосфолипазой D из Rhaphanus sativas в 0,1 М натрий-ацетатном буфере, рН 5,6. Концентрация компонентов в реакционной среде при переэтерификации : лецитин 2,.5 мМ; CaCl 2,6 мМ; фермент 0,4 г/л; метанол 40 мл/л; диэтиловый эфир 300 мл/л; инозит 20% к объему реакционной среды. Реакшш переэтерификации проводят с течение 2 ч. Выход фосфати- дилметацола 58,2%.

Пример 3. Синтез фосфати- дилметанола пр и переэтерификации фосфолипазой D из haphanus sativas в 0,1 М натрий-ацетатном буфере, рН 5,6. Концентрация компонентов в реакционной среде: летицин 2,5 мМ: CaCli 2,6 мМ; фермент 0,4 п/л; метанол 40 мл/л; диэтиловый эфир 300 мп/л; инозит 12,5% к объему реакшяонной среды. Реакцию проводят при 3/с в течение 2 ч.

с

(Л

to

о

4

to

При этом достигается оптимальньй выхо фосфатидилметанола (95%).

Пример 4. Синтез фосфатиди этанола при переэтерификации фосфо- липазой D из Rhaphanus sativas в 0,1 М натрий-ацетатном буфере, рН 5,6, Концентрация компонентов в реа ционной среце; фосфолипида (сумма) 2 г/л, CaClj: 2,6 мИ; фермент 0,4 г/л; этанол 12% к объему реакционной среды, инозит 12% к объему реакционной среды. Реакцию проводят в тех же условиях. Выход фосфатидил этанола 86,6%.

Выход фосфатидилметанола и сопутствующего фосфатидилинозита в зависимости от количества добавки (инозита) представлены в табл. 1.

Из данных табл, 1 видно, что ино зит, введенный в среду, повышает выход фосфатидилметанола. Видно, чт при содержании инозита в среде до 12,5% выход продукта растет и доходит почти до 95%. Когда содержание инозита ниже 2% от объема реакционн среды, повышение выхода меньше, чем в известных способах. Увеличение ег концентрации сверх 16% снижает выход, и при содержании инозита 20% выход сравним с известными способами. Однако, это происходит лишь в том случае, если инозит вводят после добавления в реакционную сред спиртового акцептора (метанола). В том случае, если инозит введен

в среду раньше, чем метанол, количество фосфатидилинозита становится значительным, что нежелательно,.так как в этом случае он сам поступает в качестве спиртового акцептора.

Выход фосфатидилметанола при введении инозИта (12%) в реакционную среду до добавления метанола приведе в табл. 2.

Не только фосфатидилметанол, но и другие фосфолипиды могут быть получены с повьш1енным выходом в присутствии инозита. Известно, что фос- фолипаза D катализирует как гидролитическую, так и синтетазную реакцию. Функция инозита в данном случае заключается в смещении равновесия-в сторону протекания синтетазной реакции.

Предлагаемый способ позволяет повысить выход фосфолипидов на 40-62%.

Формула изобретения

Способ получения фосфолипидов, п . включающий переэтерифика цию лецитина фосфолипазой D в присутствии спиртового акцептора и активатора в буферном растворе, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения выхода целевого продукта, в качестве активатора используют инозит в количестве 2-16% к массе реакционной смеси, причем вво- дят его после добавления спиртового акцептора.

Изобретение относится к биотехнологии и масложировой пром. Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта. Это достигается тем, что проводят переэтерификацию фосфолипазой Д в присутствии спиртового акцептора и инозита - активатора в буферном растворе, причем инозит вводят после добавления спиртового акцептора в количестве от 2 до 16% к массе реакционной смеси. 2 табл.

Содержание инозита, % 1

Фосфатидилметанол, % 32,1 75,0 70,6 92,4 95,0 80,0 58,2

Фосфолипид

0,6 ,0 3,0 1 4,0 .. рб,0

Таблица 1

10 12,5

16 20

Таблица 2

Содержание метанола. %