Способ получения фосфолипидов Советский патент 1984 года по МПК A23J7/00 

Изобретение относится к технической биохимии, а именно к способам получения фосфатидов, и может быть использовано в масложировой, кондитерской, хлебопекарной отраслях пищевой промьппленности, а также в медицинской и фармацевтической промьга ленности. . Осуществление этого способа в отсутствие активаторов неэффективно выход фосфолипидов очень низок и со тавляет 1,2-12,2% для различных спи товых акцепторов. В связи с этим для повышения выхода фосфолипидов в известных спосо бак применяют различные активаторы. Известен способ получений фосфолипидов путем ферментативной переэтерификации лецитина фосфолипазой из листьев капусты путем использования в качестве активатора больших количеств диэтилового эфира (50% от объема реакционной смеси). Реакцию проводят при 25 в течение одного часа, рН среды составляе 5,8 а О,1 М ацетатном буфере. Расход ферментного препарата 250 г на 1 моль лецитина. Выход реакции в этом случае достигает 28% l . Недостатком данного способа является длительность процесса и боль шой расход катализатора. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ пол чения фосфолипидов путем ферментати ной транспереэтерификацией лецитина с использованием в качестве фермент ного препарата фосфолипазы D из листьев капусты и использованием в качестве активирующего воздействия обработку ультразвуком. Выход фосфо липидов (соответствующий проценту лицитина, превращенного в другие фо фолипиды) достигает 20%. В качестве активатора реакции ис пользуют также анионный детергент додецилсульфат натрия, при этом выход получаемых фосфолипидов составляет 18-32%, а в оптимальных условия проведения процесса она может достигнуть 46. Реакцию проводят при 27 при рН 5,4 в 0,1 М ацетатном бу фере в течение 50 мин. Расход ферме ного препарата 120 г на 1 моль лецитина, Г21 . Однако известный способ не обеспечи вает высокогС) выхода целевого продукта Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта, сокращение прот долйштельности процесса. Указанная цель достигается тем, что в способе получения фосфолипидов путем ферментативной переэтерификации лецитина фосфолипазой D в присутствии спиртовых акцепторов и активатора в буферном растворе в качестве активатора используют гексан при соотношении реакционной смеси, спиртового акцептора и гексана 15:(2-10): :(1-3), при этом используют фосфолипазу D, полученную из корнеплода среднеазиатской редьки Raphanus sativus в количестве 0,02-0,04. Способ осуществляют следующим образом. На первой стадии готовят суспензию лецитина в воде, используя гомогенизатор РТ-1 с числом оборотов 8000 об/мин (в течение 10 мин). К 1,25 л приготовленной таким образом суспензии при перемешивании добавляют последовательно 2-10 л спиртового акцептора, 0,1-2,0 л раствора хлористого кальция с концентрацией 50 г/л. О,1 л ферментного раствора с концентрацией 0,3-10 г/л, 15 л одного из двух буферных растворов (ацетатного или три с -НС 6) и воду до конечного объема 25 л. К приготовленной смеси добавляют активатор гексан в количестве 1-3 л и проводят реакцию при 5-45 С в течение 10-180 мин. После окончания реакции к ней добавляют равный объем хлороформа для остановки реакции и экстракции фосфолипидов и хлороформенный слой отделяют декантацией. Обработку хлороформом повторяют дважды. Объединенные хлороформенные вытяжки фосфолипидов отгоняют под вакуумом (40 мм рт.ст.), используя роторньш испаритель с числом оборотов 40-60 об/мин. После отгонки растворителя целевой продукт растворяют в хлороформе до концентрации 10% и добиваются окончательной очистки его пропусканием через колонку с силикагелем марки КСК 2, Соотношение силикагеля и фосфолипида составляет 15:1. Колонка промывается смесью хлороформ-метанол сначала с соотношением 9:1 и при этом вымывается целевой продукт, затем с соотношением 2:1 для вьЕ 1ывания непрореагировавшего фосфолипида. 3. Результаты выхода фосфолипидов представлены в табл. 1. Пример 1 Синтез фссфатиди метанола фосфолипазой D в реакционной среде с рН 5,6. Концентрация компонентов в реакционной среде: ле цитин 5 мм, CaCl,, 40 мм кальция,фер ментный препарат 0,04 г/л, метанол 120 мл/л, гексан 40 мл/л. Реакцию проводят при 5С в течение 20 мин (табл. 2). Выход целевого продукта составляет 12,4%. Пример 2. Все эксперименты проводят как в примере 1, но при рН среды 7,2. Выход целевого продукта составляет 10,2% (табл. 2). Пример 3. Все операции про водят как в примере 1 и 2, но при . Данные представлены в табл. 2. 4 Пример 4. Все операции про водят как в примере 1 и 2, но при . Данные с другими спиртовыми акцепторами приведены в табл. 2. Пример 5. Реакцию синтеза фосфатидилметанола проводят как в примере 3, но продолжительность реакции 10-180 мин. Концентрация компонентов в реакционной среде: лецитин 2,5 мм, CaClj 40 мм кальция, ферментный препарат 0,04 г/л, метанол 120 мл/л, гексан 20 мл/л. , Пример 6. Реакцию синтеза фосфатидилметанола проводят как в примере 3, используя ферментные препараты из различных источников. Данные приведены в табл. 3. Предлагаемый способ позволит получить новые виды фосфолипидов и увеличить выход на 10-30%. Таблица 1

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФОЛИПВДОВ путем ферментативной переэтерификации лецитина фосфолипазой D в присутствии спиртовых акцептордв и активатора в буферном растворе, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, сокращения продолжительности процесса, в качестве активатора используют гексан при соотношении реакционной смеси, спиртового акцептора и гексана 15:

5,612,450,3

7,210,236,1

5,68,030,0

7,27,325,0

54,412,150,047,811,547,743,5

40,610,838,437,59,635,526,4

47,39,0034,747,17,827,030,3

28,38,523,427,06,521,623,1

Продолжительность

30 реакции, мин

Выход продукта при

Продолжение табл. 2

Таблица 3

30

20