1
Изоб рете ние относится к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к бактериологической диагностике микробов Pseudomonas aeruginosa с помощью специфических бактериофагов.
Пиоцианеус бактериофаг МГ-2- вьще- лен из канализационных сточных вод и представляет собой смесь специфических клонов бактериофагов Ps. aeruginosa. Пиоцианеус бактериофаг МТ-2 депонирован под N0-129 в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сьшороток.
Фаг МТ-2 характеризуется следующими свойствами.
При посеве двухслойным методом на агаре Мартена (рН 7,2-7,4) фаг МТ-2 по морфологии стериальных пятен полиморфен. Диаметр негативных колоний (н.к.) 1-5 мм.
Специфичность фага МТ-2 изучалась в опытах перекрестного лизиса с ге- терологичньми ввдами микроорганизмов: эшерихиями (199 штаммов),, шигел- лами (197 шт.), салмонеллами (224шт.) протеем (61 шт.), Gersinia enteroco- litica (94 шт.).
Диапазон литической активности нового бактериофага МТ-2 определяют на коллекции музейных культур: Ps,aeruginosa -25; Ps.fluorescens - 5; Ps, maltophilia - 5; Ps,testosteroni - 5; Ps,putida-5j PsoStutzeri - 5; и на 1170 свежевыделенных штаммах различ-- ньщ видов и серологических типов микроорганизмов семейства Enterobac- teriaceceo
Бактериофаг МТ-2 обладает строгой специфичесностью и широким диапазоном действия в отношении штаммов .
ю ел
PS.aeruginosa (лизирует 93,4% свежевыделенных штаммов).
Фаг МТ-2 проявляет высокую стабилность специфического действия„ После многократного пассирования.на гомологичных и гетерологичных штаммах, на их смеси и на устойчивых клонах гомологичных бактерий, фаг МТ-2 остается строго специфичным, лизируя только, один вид - PS.aeruginosaо
Таким образом, фаг МТ-2 удовлетворяет требованиям, предъявляемым к диагностическим фагам как по специфичности, так и по стабильности ли- тического спектра.
В результате изучения фаз взаимодействия фага МТ-2 с клеткой (эталонная культура PS.aeruginosa 1038) установлено, что бактериофаг обладает высокой адсорбционной способностью (максимальное время адсорбции 10 мин и урожайностью (110 частиц ни 1 инфицированную клетку), коротким скрытым периодом (60 мин)„
Высокий показатель эффективной множественности является одним из важнейших качеств индикаторного фага исключающий возможность передози- ровки фага в РНФ (реакция нейтрализации фага), следствием чего может наступить лизис без размножения. В этих случаях РНФ будет отрицательной при нахождении в среде бактерий. Установлено, что специфический бактериофаг МТ-2 обладает достаточно высоким показателем эффективной множественности. Интенсивное размножение фаза наблюдается при множественности 1 и ниже.
Пиоцианеус бактериофаг МТ-2 характеризуется довольно высокой термоустойчивостью - нижняя граница термоинактивации равняется - 55°, верхняя - 85°С.
0
5
0
5
0
5
0
Для апробации эффективности РНФ в диагностике Ps.aeruginosa в частности, эффек:тивности бактериофага МТ-2 как индикаторного фага, проведен ряд опытов на клиническом материале. Всего исследовано 41 проба (20 проб крови, полученных из инфекционной больницы от больных с заболеваниями невыясненной этиологии; 10 проб гноя из ожогового центра; 11 проб мочи из разных инфекционных больниц). П р и м е РО К исследуемому материалу добавляют мясо-пептонный бульон (МПБ) в соответствии 1:10 и 1 мл индикаторного фага МТ-2, взятьй .в рабочем разведении 10 фаговых частиц в 1 мл. Параллельно ставят контроль на присутствие в исследуемом материале свободного фага. По истечении времени инкубации содержимое каждой пробирки разводят в 100 раз МПБ. Конечные разведения прогревают при 56-58 С в течение 30 мин. По 1 мл Ьодержимого каждой пробирки исследуют по методу Грациа на , лонной культуре Ps.aeruginosa 1038. Результаты исследований считают положительными, начиная с трехкратного нарастания титра фага.
Таким образом, бактериофаг МТ-2 по своим биологическим свойствам : удовлетворяет требованиям, предъявляемым к индикаторным фагам. К тому же литическая активность бактериофага МТ-2 весьма высока, а негативные колонии хорошо просматриваются на поверхности агара.
Формула изобретения
Штамм бактериофага Pseudomonas aeruginosa. ТбНИКВС NФ-129, используемый для идентификации и индикации микробов Pseudomonas aeruginosa.
Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к бактериологической диагностике микробов PSEUDOMONAS AERUGINOSA с помощью специфических бактериофагов, и касается нового пиоцианеус бактериофага. Поливалентный пиоцианеус бактериофаг МТ-2 депонирован под номером Ф-129 в коллекции Тбилисского НИИ вакцин и сывороток и характеризуется свойствами, присущими для диагностических бактериофагов: специфичностью и стабильностью литического спектра, высокой активностью и т.д. Эффективность диагностики PS. AERUGINOSA посредством нового пиоцианеус бактериофага МТ-2 подтверждена на клиническом материале (41 проба).
| Аналогов в патентной и научно- технической литературе не обнаружено. |
