Способ определения гомолитической активности веществ Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к кшшичес- кой медицине и экспериментальной биологии и может быть использовано для экспресс-анализа гемолитической активности веществ и химической рези- стивности эритроцитов.

Цель изобретения - з рощение за счет сокращения стадий и ускорения способа, а также возможности одновременного определения распр еделення эритроцитов по резистентности к исследуемому веществу.

Цель достигается тем, что определяют долю лизированных клеток по изменению оптической плотности в не- .прерьшном потоке, регистрируют концентрации вещества, вызьшающие лизис 25,..50 и 75% клеток при равном времени контакта суспензии эритроцитов с литическим веществом (t) и определяют коэффициенты уравнения лизиса, используя зависимость

ВС; BC;. .

Спсс об осуществляется следующим образом.

Эритроциты человека отмывают в

10-:кратном объеме физиологического

1508152 концентраствора и суспендирзаот до рации 0,04%,

До проведения анализа готовят суспензии, содержащие 23, 50 и 75% зри- 5 троцитов/мм от исходного раствора и определяют величины оптических плотностей этих суспензий в измери- тельной кювете,

В камеру смешения подают 0,05 N 10 раствор NaOH с убывающей по экспоненциальному закону концентрацией и суспензию клеток. Время движения жид- костл от камеры смещения до измерительной кюветы составляет. 2,00 мин, 15 а от включения устройства до достижения гемолитиком камеры смешения - ,22 мин. Оптическая плотность раствора, проходящего через измерительДпя проведения анализа по предла гаемому спвсобу с использованием ЭВ необходимо 10-15 мин, в то время ка по; способу-прототипу 10-15 мин необ ходимы лишь регистрации значения п.

.Формула изобретени

Способ определения гемолитической активности веществ,включающий с шивание суспензии эритроцитов с исследуемым веществом путем непрерывного добавления его в убывающей кон центрации в камеру смешивания с последующей регистрацией ЙБ в проточной юовете, определением доли лизи- рующнх клеток и рассчетом, о т л и

25

ную кювету, изменяется по S-образному 20 чающийся тем, что , с целью закону и достигает 25%-ной плотности нелизированных клеток через 6,50 мин (доля лизиса 0,75), 50%-ной через 8,20 мин (доля лизиса 0,50) и 75%-Мой через 11,00 мрзн (доля лизиса 0,25), Концентрации ЫаОН, рассчитанные по закону изменения концентрации с учетом времени контакта щелочи с зри- троцитами и времени движения гемоли- тика до камеры смешения, составляют 0,0094, 0,0117, и 0,0141 N для Cfc,K С75-соответственно.

Подставляя полученные результаты в приведенную систему уравнений, рас- считьгоают коэффициенты гемолитичес-. 35 кой активности;

30

упрощения за счет сокращения стад;ии и ускорения способа, а также возмож ности одновременного определения ра пределения эритроцитов по резистент ности к исследуемому веществу, реги рацию Д. D осуществляют трижды при ра ном времени контакта суспензии с ис следуемым веществом, а расчет проводят по формуле

где А

R n

R -гемолитическая активность

вещества, м -мин ; . .- крнцентрационная константа

распределения эри Гроцитов ,. резистентности;

-временная константа;

п,0; .7j .5

Дпя проведения анализа по предлагаемому спвсобу с использованием ЭВМ необходимо 10-15 мин, в то время как по; способу-прототипу 10-15 мин необходимы лишь регистрации значения п.

.Формула изобретения

Способ определения гемолитической активности веществ,включающий смшивание суспензии эритроцитов с исследуемым веществом путем непрерывного добавления его в убывающей концентрации в камеру смешивания с последующей регистрацией ЙБ в проточной юовете, определением доли лизи- рующнх клеток и рассчетом, о т л и

чающийся тем, что , с целью

упрощения за счет сокращения стад;ии и ускорения способа, а также возможности одновременного определения распределения эритроцитов по резистент-- ности к исследуемому веществу, регистрацию Д. D осуществляют трижды при равном времени контакта суспензии с исследуемым веществом, а расчет проводят по формуле

где А

R n

R -гемолитическая активность

вещества, м -мин ; . .- крнцентрационная константа

распределения эри Гроцитов по ,. резистентности;

-временная константа;

-коэффициент Хилла,

Изобретение относится к клинической медицине и экспериментальной биологии, к способам определения гемолитической активности веществ. Цель изобретения - сокращение времени анализа и упрощение способа. Это достигается за счет того, что в способе, заключающемся в смешивании суспензии эритроцитов с постоянной концентрацией с лизирующим веществом различной концентрации, определяют долю лизированных клеток по изменению оптической плотности в непрерывном потоке. Регистрацию ΔД проводят трижды при равном времени контакта суспензии с исследуемым веществом, а расчет проводят по формуле A=B/R, где A - гемолитическая активность вещества, M^-N. мин^-1

B - концентрационная константа распределения эритроцитов по резистентности

R - временная константа

N - коэффициент Хилла.