Способ диагностики амилоидоза, сопровождающегося нефротическим синдромом Советский патент 1989 года по МПК G01N33/68 

1

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики амилоидоза, сопровождающегося нефротическим синдромом.

Цель изобретения - снижение травматичности, упрощение и ускорение способа за счет определения активности активатора плазминогена, содержащегося в эуглобулиновой фракции плазмы по методу Аструпа, Мюллертца.

Способ осуществляют следующим образом.

К 0,4 мл плазмы крови добавляют 8 мл дистиллированной воды, подкисленной до рН 5,3, смесь центрифугируют при 2000 об./мин в течение 10 мин, затем отделяют осадок и добавляют к нему 0,4 мл боратного раствора, содержащего 0,5%-ный тетраборат Na и 4,5%-ный хлористый Na, и 0,03 мл полученной смеси наносят на фибрино- вую пластину, приготовленную из 0,3%-ного раствора фибриногена.

0,03 мл этой же смеси наносят на прогретую при 86°С в течение 30 мин фибриновую пластину, обе пластины инкубируют при 37 С в течение i 8 ч и определяют зоны лизиса как произведение двух взаимно перпендикулярных диаметров. Разность между зонами лизиса на прогретой и непрогретой фибриновых пластинах характеризует активность активатора плазминогена. Увеличение ее от 62 мм2 и более свидетельствуют о том, что нефротичес- кий синдром обусловлен амилоидоэом, в то время как при нефротическом синдроме, обусловленном хроническим гломерулонефритом, уровень активатора плазминогена не выше 20 мм .

Пример 1. Больной Ч., 20 лет. С 2-летнего возраста страдает хронической пневмонией с бронхоэктазами и частыми обострениями (ежегодно лечился антибиотиками), в течение последнего года стали появляться отеки

1

С& 00

s

лица и голеней, стоп. В моче появился белок до 3,3% . К моменту поступления в клинику протеинурия достигла 6-87,о .Поступил с развернутой карти ной нефротического синдрома (отеки, суточная протеинурия 6,9 г, общий белок крови 4,9%, альбумин 1,8%, олестерин 405 мг%) для уточнения диагноза нефропатии. У больного была взята кровь из вены для определения в плазме содержания активатора плаз- миногена. Ход определения следующий. К 0,4 мл плазмы добавляют 8 мл дистиллированной воды, подкисленной до рН 5,3, центрифугируют, к полученному осадку приливают 0,4 мл боратного раствора, содержащего 0,5%-ный раствор тетрабората На и 4,5%-ный раствор хлористого натрия. 0,03 мл полу- ченной суспензии наносят на стандартную фибриновую пластину, приготовленную из 0,3%-ного раствора фибриногена, 0,03 мл суспензии наносят на прогретую при 86°С в течение 30 мин стандартную пластину. Через 18 ч инкубации обеих пластин в термостате при 37°С определяют зоны лизиса как произведение двух взаимно перпенди-- кулярных диаметров. Активность актив тора плазминогена оценивают как разность между зонами на непрогретой и прогретой пластинах.

У больного Ч. установлено содержание активатора плазминогена 110 мм при норме 5-18 мм2. На основании резко повышенного уровня активатора плазминогена был поставлен диагноз вторичного амилоидоза. При гистологическом исследовании биоптата поч- ки обнаружено отложение амилоида по ходу базальнои мембраны капиллярных петель клубочков почки, что подтвердло диагноз.

П р и м е р 2. Больная И,, 37 лет в течение двух лет, когда появились и стали нарастать отеки тела, протеинурия с 0,66 до 3,3%о, слабость в ногах, анемия (гемоглобин 64%), лечилась с диагнозом хронический гломе- рулонефрит безуспешно. Поступила с клиникой развернутого нефротического синдрома (отеки, протеинурия 6,2У0 общий белок крови 5,2 г%), альбумин 2,9 г%, холестерин 565 мг%) для уточ нения диагноза нефропатии.

У больной была взята кровь из вены, осуществлены операции, аналогичные примеру. 1, установлено содержание активатора плазминогена 62 мм2 при норме до 18 мм . На основании повышенного содержания в плазме крови активатора плазминогена поставлен диагноз первичного амилоидоза. Через 1,5 г, произведена биопсия почки. В биоптате гистологически выявлено отложение амилоида в стенке капиллярных петель клубочка, что подтвердило диагноз.

П р и м е р 3. Больной Е., 39 лет, с 10-летнего возраста страдает периодической болезнью (торако-абдоминально-суставная форма). В течение последних 4 лет отмечает появлению отеков, белок в моче до 1%„,снижение гемоглобина до 50 ед, Поступил для уточнения диагноза нефропатии с клинической картиной синдрома (отеки степени анасарки, протеинурия до 25 г/сут, альбумин 2,4 г%, холестерин 320 мг%) . Одновременно выявле-- ны признаки хронической почечной недостаточности (азот мочевины 70 мг%, креатинин 10,6 мг%, клубочковая фильтрация 6 мл/мин). Установлено, что содержание активатора плазминогена в плазме крови методом,приведен- ным в примере 1 ,, повышено до 65 мм , на основании чего поставлен диагноз амилоидоза. При морфологическом исследовании биоптата десны выявлен амилоид, что подтвердило диагноз.

Предлагаемый способ по сравнению

с прототипом имеет следующие преимущества.

1. Точность предлагаемого способа не уступает таковой в прототипе. Она бусловлена тем, что фермент актива- тор- плазминогена располагается в самом поверхностном внутреннем слое кровеносного сосуда - в эндотелии. Поэтому субэндотелиальное отложение амилоида, свойственное амилоидозу, раздражая эндотелиальный слой, приводит к освобождению ферментов эндотелия, в том числе активатора плазминогена, что вызывает резкое возрастание его активности в крови, регистрируемое методом Аструпа, Мюллертца. Способ позволяет диагностировать амилоидов у больных с нефротическим синдромом в 92% случаев, в то время как исследование биоптатов прямой кишки дает 80% правильных результатов , а десны - 30%.

51476387

2. Нетравматичность способа. Отсут- ф о вугот необходимость взятия биоптата нанесения при этом раны, что может ивести к осложнениям в виде кроточивости или тромбоза у больного.

сопр синд ческ лени ли цель щени ве б зуют кров ност ее з тиру нефр

3. Простота способа. Способ-прототип предполагает морфологическое (исследование биоптата, микроскопичес кое изучение тканей, что удлиняет и усложняет процедуру. Предлагаемый способ представляет чисто биохимическое определение активности фермента активатора плазминогена, где продукт реакции оценивается визуально.

ф о

рмула изобретения Способ диагностики амилоидоза, сопровождающегося нефротическим синдромом, путем исследования биологческого материала, включающего опредление уровня маркерного белка, отличающийся тем, что, с целью снижения травматичности, упрощения и ускорения способа, в качестве биологического материала используют эуглобулиновую фракцию плазмы крови, в которой определяют активность активатора плазминогена, и при ее значении 62 мм2 и более диагностируют амилоидоз, сопровождающийся нефротическим синдромом.

Изобретение относится к медицине и может быть применено в нефрологии, гематологии, биохимии, патофизиологии для диагностики амилоидоза при заболеваниях почек. Цель изобретения снижение травматичности, упрощение и ускорение способа. Способ заключается в том, что определяют активность активатора плазминогена в эуглобулиновой фракции крови и при ее величине 62 мм² и более диагностируют заболевание. Точность способа 92%.