Питательная среда для выделения фитопатогенных грибов из семян тритикале Советский патент 1989 года по МПК C12N1/14 A01N63/00 

Изобретение относится к фитопатологии, в частности к новым питательным средам для выделения грибной инфекции из семян зерновых культур, а именно тритикале.

Цель изобретения - повьшение достоверности определения степени инфицирования семян тритикале грибной инфекцией.

В известную среду, включающую агар-агар, пивное сусло, дистиллированную воду, вводится природный стероидный гликозид фуростанолового ряда - капсикозид, представляющий собой пентаозид .(25К)-5Л--фуростан- -2«(., , 22р(., 26-тетраила, обладающий стимулирующим действием, при следующем соотношении компонентов, г/л:

Агар-агар 18-22

Капсикозид 0,001-0,1

Пивное сусло,

разбавленное

дистиллированной водой до До 1 л

Для выявления оптимального состава среды, обеспечивающей наибольший процент выхода колоний грибов, было приготовлено пять смесей ингредиентов, отличающихся содержанием капси- козида, а также взяты известная сре- Йа и среды, содержащие структурный аналог - томатозид в различных концентрациях ингредиентов.

Полученные результаты по применению различных по составу питательных сред для определения степени

зараженности семян тритикале приведены в табл. 1 и 2.

Как видно из табл. 1, содержание капсикозида в среде в концентрации 0,01 г на 1 л среды позволяет увеличить выход колоний в сравнении с известной средой в 5,3 раза или на 26%, а по сравнению со структурным аналогом - томатозидом в 1,9 раза или на 15%, что позволяет максимально выявить количество колоний гри- б ов и тем самым получить наиболее достоверные данные о степени зараженности семян.

Пример. Пивное сусло разбавляют дистиллированной водой в отношении 1:3 (т.е. до получения пивного сусла по ареометру Баллин1;а при этом рН равен 5). Растворяют 0,01 г капсикозида. Этим раствором заливают 20,0 г агара и доводят объем до 1л. Смесь подогревают, в горячем виде разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве при 0,8 ат в течение 30 мин.

В стерильном боксе приготовленну таким образом среду разливают в горячем виде в стерильные чашки Петри по 10 мл в каждую, Семена дезинфицируют следующим образом: после 2-минутной обработки 96 этиловым спиртом семена выдерживают в 0,5%-ном растворе перманганата калия в течение 20 мин. После трех смен (по 5 мин) стерильной воды семена сушат между двумя стерильными листами фильтровальной бумаги, фламбируют в пламени горелки и раскладывают их на застывшей среде.

В опыте использованы семена районированного сорта тритикале Амфиди- плоид 206. Повторность опыта - четырехкратная, по 25 семян в каждом опыте. Подсчет выросших колоний начинают через три дня.

Окончательные данные, представленные в табл. 1, приведены согласно полученным результатам на седь-

0

5

0

мои день исследования, после которого выделение новых колоний не наблюдается.

На седьмой день проводят изоляцию грибов в пробирки со скошенным суслом-агаром. После 3-недельного культивирования при проводят идентификацию грибов по определителям Пидопличко и Билай.

Установлен следующий оптимальный состав среды для выявления внутрен- ;ней грибной инфекции семян тритика- ле, г/л:

Агар-агар 20,0 Капсикозид 0,01 Пивное сусло 7 Б в дистиллированной

воде До 1 л На данной среде было выделено 32 колонии следующих видов грибов:

30

35

40

45

Формула изобретения

Питательная среда для выделения фитопатогенных грибов из семян тритикале, содержащая пивное сусло и агар-агар, отличающаяся тем, что, с целью повышения достоверности степени инфицирования семян, среда дополнительно содержит капси- козид, представляющий собой пентаозид (25Ю-5(-фуростан-2ог,, Эр, 220, 26-тет- раила, при следующем соотношении компонентов, г/л:

50

Агар-агар Указанный капсикозид Пивное сусло 7°Б

18-22 0,001-0,1 До 1 л

Агар-агар 18,0 Пивное сусло, разбавленное дистиллированной водой до 7 Б до 1 л (известная среда)

Агар-агар 20,0

Пивное сусло

7°Е до 1 л

(известная

среда)

Агар-агар 22,0

Пивное сусло

7°Б до 1 л

Агар-агар 20,0 Томатозид 0,01 Пивное сусло 7°Б До 1 л (структурный аналог)

Агар-агар 20,0 Капсикоэид 1,0 Пивное сусло 1 л

7°Б до

Агар-агар 20,0 ЮО Капсикозид О,1 Пивное сусло 7 Б до 1 л

Агар-агар 20,0 100 Капсикозид 0,01 Пивное сусло до 1 л

6,0±1,2

6,,5

6,0+1,5

7 17,0+5,0

1 11,0+4,7

3 23,0+4,1

2 32,0+5,9

Alternaria alternata (Fr.) Keisle2 A, consortiale

(Thuem) Hughes1 Fusarium oxyspo- rum (Schlecht.)

Shyd et Hans1 F. gibbosum App. et Wr. emend.Bilai 1 F. graminearum

Schwabe1

A. Alternata1

A. consortiale1

F. oxysporum1

F. gibbosum2

F. graminearum1

A. alternate2

F. oxysporum1

F. gibbosum1

F. gramineairum2

A. alternate3

A. consortiale2

F. oxysporum2

F. gibbosumi 3

F. graminearum1

F. solani (Mart.)1 App. et. Wr.

F. moniliforme3 Shela

F. culmorum2

(W.G.Sm,) Sacc,2

A. alternata1

A. consortiale1

F. oxyaporum2

F. gibbosum2

F. graminearum2

F. solani2

F. moniliforme1

F. culmorum1

A. Alternata3

A. consortiale2

F. oxysporum2

F. gibbosum4

F. graminearum4

F. solani2

F. moniliforme3

F. culmorum3

A. Alternata4

A. conb43rtiale3

F. oxysporum3

F. gibbosum5

Продолжение табл. 1

Изобретение относится к фитопатологии, в частности к питательным средам для выделения грибной инфекции из семян зерновых культур, а именно тритикале. Целью изобретения является повышение достоверности определения степени инфицирования семян. Среда содержит, г/л: агар-агар 18,0-22,0, капсикозид 0,001-0,1, разбавленное до 7°Б пивное сусло до 1 л. Среда позволяет увеличить выход колоний фитопатогенных грибов из стерилизованных семян тритикале. 2 табл.

А

Различия относительно известлой среды сущестзенны при уровне значимости 0,05

Различия относительно известной среды существенны при уровне значимости 0,01

Агар-агар 18 100 Капсикозид 0,01 Пивиое сусло 7°Б

в дистиллированной воде , до 1 л

Агар-агар 20 100 Капсикозид 0,01 Пивное сусо 7 Б в дистиллированной воде до 1 л

31

31,0±6,0

32 32,0t5,9

Таблица 2

1,0±6,0

2,0t5,9

А.alternata3

А,consortiale4

F.oxysporum4

F.gibbosum3

F.graminearum6

F,solani5

F.moniliforme5

F.culmorum1

A.alternata4

A.consortiale3

F.oxysporum - 3

F.gibbosum5

F.graminearum7

F.aolani3

F.moniliforme6

F.culmorum1

Агар-агар 22 100 Капсиковид 0,01 Пивное сусло 7f Б в дистиллированнойводе до 1 л

Агар-агар 18 Капсикозид 0,01 Пивное сусло б°Б в дистиллированнойводе до 1 л

Агар-агар 20 Капсикозид 0,1 Пив-ное сусло в дистиллированнойводе до 1 л

Агар-агар 22 Капсикозид 0,1 Пивное сусло 8°Б в дистиллированнойводе до 1 л

Агар-агар 18 100 Капсикозид 0,001. Пивное сусло в дистиллированнойводе до 1 л

Агар-агар 20 100 Капсикозид 0,001 Пивное сусло 7°Б в дистиллированнойводе до 1 л

Продолжение табл. 2

2 32,0i6,0

3 23,0±4,5

3 23,0i4,1

3 23,0±4,3

2 22,Oil,2

А. alternataЗ

А. consortiale3

F. oxysporum4

F. gibbosum6

F. graminearum6

F, solani4

F. moniliforme5

F. culqiorum1

A, alternata3

A. consortiale.3

F. oxysporum3

F. gibbosum2

F. graminearum3

F. solani3

F. monilifqrme2

F. culmorum4

A. alternata3

A. consortiale2

F. oxysporum2

F. gibbosum4;

F. graminearum4

F. solani2 , F. moniliforme3

F. culmorum3 .

A. alternata3

A. consortiale3

F. oxysporum4

F. gibbosum1

F. graminearum2

Fi solani3

F. moniliforme3

F. culmorum4

A. alternata1

A. consortiale2

F. oxysporum4

F, gibbosum3

F. graminearum4

F. solani2

F. moniliforme3

F. culmorum2

23,0+1,0

А.alternata4

А.consortiale2

F.oxysporum4

F.gibbosum4

F.graminearum2

F.solani2

F.moniliforme, 2

100

23 ,. 23,0±1,5

Продолжение табл. 2

culmorum3

alternate2

consortiale.2

oxyaporum3

gibbosum4

graminearum3

solani3

moniliforme4

culmorum2