Способ исследования клеток печени Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии.

Целью изобретения является повьппе- ние точности способа за счет раздельного определения паренхиматозных и стромальных клеток и их ядер.

Способ осуществляют следующим образом.

Из печени получают биоптат. Далее биоптат помещают в 2,5%-ный раствор глютарового альдегида, приготовлен- ньй на фосфатном буфере рН 7,2-7,4, на 20-24 ч. Затем биоптат переносят в 50%-ный раствор КОН и вьщерживают в термостате при 37-38 С в течение 3-5 ч. Часть биоптата извлекают из щелочи, а часть продолжают инкубировать до 7-7,5 ч.

Печень затем переносят в дистиллированную воду при комнатной температуре, помещают в центрифужные пробирки, встряхивают 20-30 раз, постукивая по пробиркам, пепетируют, получают рав-.. номерную суспензию.

Наибольшую каплю-суспензии помещают на предметное стекло, накрьтают покровным и анализируют в фазовом конт расте. После экспозиции 3-5 ч учитыва-- ют число одноядерных печеночных клеток, двуядерных печеночных клеток, сумму, паренхиматозных клеток.

После 7-7,5 ч экспозиции учитывают число ядер паренхиматозных клеток и ядер непаренхиматозных (стромальных) клеток.

СЛ

00

со

Пример,- Биопт т печени здоровой. При обработке биоптата предлагаемым способом выявлено, что через 3 ч экспозиции на препарате число одноядерных и двухядерных печеночных клеток равно 73 и 32% от общего количества клеток.

Через 7 ч диссоциации число паренхиматозных клеток равно 139, а стро- мальньк 61, При получении результата рассчитали соотношение стромальных и печеночных клеток в печени, оно равно 36%, т.е. на 65 ядер стромальных приходится 116 паренхиматозных.

Общее чисЛо клеток, равно 181, которое принято за 100%. Следовательно, общее отношение паренхиматозных и стромальных клеток равно 64:36.

Способ позволяет точно вьщелить ядра л клетки стромальной и паренхиматозной ткани печени, что дает возможность учесть как тех, так и других

клеток печени, а соответственно бол« точно рассчитать их соотношение, что важно при оценке состояния ткани печени.

Формула изобретения

Способ исследования клеток печени путем фиксации ткани, щелочной дис- социации, приготовления клеточной .-суспензии, мазка клеток и исследования под микроскопом, отличающийся тем, что, с целью повьш1е- ния точности способа за счет раздельного определения паренхиматозных и стромальных клеток и их ядер, фиксацию проводят в глютаровом альдегиде в течение 20-24 ч, а щелочную диссоциацию - при 37-38 С, при этом паренхиматозные клетки и их ядра получают через 3-5 ч диссоциации, а стромаль- ные клетки и ядра паренхиматозных клеток - через 7-7,5 ч диссоциации.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии. Целью является раздельное выявление стромальных и паренхиматозных клеток, а также их соотношения в печени. Цель достигается тем, что биоптат печени фиксируют в 2,5%-ном растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере рН 7,2-7,4. Далее проводят щелочную диссоциацию в 50%-ном растворе КОН. При этом инкубацию с щелочью проводят при температуре 37-38°С в течение 3-5 ч. до 7-7,5 ч. После первой диссоциации получают паренхиматозные клетки и их ядра, а через 7-7,5 ч диссоциации получают стромальные клетки и ядра паренхиматозных клеток. Способ позволяет точно определить соотношение стромальных и паренхиматозных компонентов ткани в печени.

Составитель Л.Стебаева Редактор Н.Бобкова Техред А.Кравчук y Корректор С.Шекмар

Заказ 6075/45

Тираж 789

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Подписное