Способ диагностики антракосиликоза Советский патент 1989 года по МПК G01N33/483 

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии.

Цепью изобретения является ранняя диагностика.

Способ осуществляют следующим образом.

У больных и здоровых людей берут кровь в общем количестве 1 мл с антикоагулянтом. Забор крови производят натощак. Кровь центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин для удаления плазмы. Эритроциты трижды промывают охлажденным физиологическим раствором, В эритроцитах определяют активность супероксиддисмутазы (СОД).Принцип метода заключается в определении степени ингибирования восстанов

ления нитросинего тетразолия в присутствии и феназинметасульфа- тг, Кровь с одной каплей гепарина (берут 0,5 мл) центрифугируют 10 мин при 10 тыс.об. ЕЗ минуту, к осадку

эритроцитов добавляют 2 мл дистил лированной воды, встряхивают 5 мин и добавляют хлороформ (2 части) и этиловый спирт (1 масть), смесь цен трифугируют при 1000 об/мин мин К супернатанту добавляют и оставляют на ночь при .

Определение фермента проводят на cneKTpottJOToweTpe СФ-26 при длине волны нм в кювете с ходом светового луча 10 мм. Инкубационная смесь состоит из 1,3 мл фосфатного буфера (рН 8,3)), 1 мл нитросинего тетра- . золил (200 мкг/1 Nm), w феназин- метасульфата (б9 мкг/мл;), Ор2 мл су- пернатанта i-t 0,2 ).ш НАДН-г (0,0002 М). Контролем служат пробы.без НАДИ. .Пробы с НАДН инкубируют 10 мин.

Расчет проводят по формуле

т-(100 То |.

X Р,

где Т - экстинкция пробы, Т/10 - экс- тинкция пробы.за 1 мин,

Р разведение,- единицы измерения, ед.акт/мл эр/мин.

Индуцированную хемилюминесценцию (ИХЛ) гемоглобина измеряют на установке, состоящей из термостатируемой кюветы с перемешивающим устройством, в котором находится проба, коллимиру- ющих оптических элементов с механическим затвором - светоотсекателем и фотоэлектронного умножителя, на фотокатод которого проецируется световой поток. Для соблюдения линейности характеристики Напряжение на фотоэлектронный умножитель устанавливают в области счетного плато. Возможно также использование серийных спектральных приборов, оснащенных фотоэлектронными приставками типа ИСП-5иДСФ- 2 и дро

0,02 мл эритроцитов гемолизируют в 5 мл дистиллированной воды. После приготовления раствора следует избегать попадания на него солнечных лучей, В кювету хемилюминометра вносят раствор гемоглобина в количестве

0,5 МП, а затем вводят 19x10 М раствор перекиси водорода. Регистрируют вспышку света в течение 5 минут, площадь под кривой определяют весовым

методом. При проведении исследования следует строго контролировать концентрацию гемоглобина в кювете.

Предлагаемым способом обследовано 138 человек, из них 0 человек - контрольная группа по антракосиликозу группа К, 98 человек - с антрако- силикозом 1 стадии, в том числе с сопутствующими заболеваниями, а так же 20 человек здоровых лиц - первичных доноров. У лиц с подозрением на антракосиликоз активность СОД изменя- от 350 до 450 единиц активности, ИХЛ гемоглобина .от 0,350 до 0,50 по отношению к крови здоровых людей, у больных антракосиликозом 1 стадии эти показатели составили 500-700 единиц активности и 0,500-0,700 соответственно. Удоноров показатели СОД и ИХЛ гемоглобина - 250-280 единиц активности и единица. Сопутствующие заболевания, например, хронический бронхит, не вызывали отклонений, выходящих за границы предложенных критериев.

Пример 1. Горняк X, j года, пылевой стаж 22 г, работал на должностях проходчика, забойщика, жалоб не предъявлял, направлен На обследование с подозрением на антракосили- коз (после профосмотра). При тщательном рентгенологическом обследова нии установлен усиленный рисунок легких. Наши исследования показали увеличение активности супероксиддисмутазы до 350,0 усл. ед/мл эритроцитов/мин, а интенсивность индуцированной хеми- люминесценции снижалась до 0,3 .(при 180-250 усл.ед/кп эритроцитов/мин супероксиддисмутазы эритроцитов и ИН тенсивности индуцированной хемилюми- несценции гемоглобина, принятой за 1, у здоровых людей), I Диагноз: контрольная группа по

аитракосиликозу (стадия 0-1),

Пример 2. Горняк У., +8 лет, пылевой стаж 2б лет, работал на должностях забойщика, проходчика, горнорабочего очистных забоевi жалоб не предъявля.п, после npcK ocMotpa направлен на обследование с подозрением на антракосиликоз. Рентгенологическое обследование показало начальные проявления интерстициального пневмо- фиброза. Исследования выявили увеличение активности супероксиддисму-/ тазы до it50 усл. ед/мл эритроцитов/ /мин, а интенсивность индуцированной хемилюминесценции - 0, (при

515

180-250 усл.ед/мл эритроцитов/мин, и интенсивности индуцированной хе- милюминесценции гемоглобина, принятой за 1, у здоровых людей). Диагноз: контрольная группа по антракосилико- зу, стадия (0-1).

Бьшо обследовано 200 человек шахтеров, из них 100 человек с начальными проявлениями антракосили коза, 100 больные антракосиликозом 1 стадии. 1 группа обследованных лиц показала, что значение активности супер- оксиддисмутазы не выходило из пределов усл. ед/мп.эритроци- тов/мин, а интенсивность индуцированной хемилюминесценции гемоглобина - в пределах 0,, 45 от значения контроля, принятого за 1. У шахтеров, больных антракосиликозом 1 стадии,. указанные параметры изменялись по- другому: так, супероксиддисмутаза возрастала до 500-700 усл. ед/мин эритроцитов/мин, а интенсивность индуцированной хемилюминесценции гемоглобина - до 0,7-0,8, соответственно по сравнению с контролем .(здоровыми людьми - первичными донорами).

Для доказательства высокой спёци- фичности предлагаемых показателей

для. ранней диагностики антракосили- коза, был проведен эксперимент по моделированию антракосиликоза, Крьюы были затравлены угольной пылью (свежеобразованной), исследовалась корреляция между показателями, супероксид дисмутаза и интенсивность индуцированной хемилюминесценции гемоглобина и интегральными параметрами, характеризующими развитие фиброаного про- Цесса, Установлено, что до начала интенсивного коллагенообразования в легких опытных крыс, отмечается сильная корреляция между интегральными показателями развития фиброзного процесса (массой легких, массой трахео- бронхиальных лимфатических узлов, со:.

036

держанием коллагена и общих липидов в легких) и супероксиддисмутазой, интенсивностью индуцированной хемилюминесценции гемоглобина. Например, корреляция между супероксиддисмута- зой и массой легких равна - О,97,массой трахеобронхиальных лимфатических узлов - 0,98, коллагеном - 0,8 t, об- липидасм - 0,89. Между интенсивностью индуцированной хемилюминесценции гемоглобина и массой легких - |0,92, массой трахеобронхиальных лим- фатических узлов - 0,98, коллагеном 0,92, общих липидов - 0,85.

Полученные экспериментальные данные доказывают высокую специфичность предложенных параметров, а также и то, что они адекватно отражают процессы, происходящие в легких до интенсивного коллагенообразования.

Предлагаемый способ предназначен для выявления ранних стадий развития амтракосиликоза, в связи с чем он не может быть использован для сравнения с прототипом, так как последний может быть использован только при развитом фиброзном процессе в легких, к тому же последний используется для диагностики ряда других патологий, связанных с соединительной тканью, не пылевой этиологии.

. дд35

45

Формула изобретения

Способ диагностики антракосилико за путем биохимического исследования крое.и, отличающийся тем, что, с целью ранней диагностики, определяют активность супероксидди- смутазы в эритроцитах и относительную индуцированную хемилюминесценцию гемоглобина и при значении первого показателя 350 усл. ед/мл/мин и бо- лае и второго показателя 0,30 усл.ед. и более диагностируют антрокосиликоз.

Изобретение относится к медицине, в частности к пульмонологии. Целью изобретения является ранняя диагностика. Для этого определяют активность супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов по методу Е.Е.Дубининой. Принцип метода заключается в определении степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолия в присутствии НАД^.Н и феназинметасульфата. Также определяют относительную индуцированную хемилюминесценцию гемоглобина (ИХЛ). Измерение ее интенсивности проводят на установке, состоящей из термостатирующей кюветы с перемешивающим устройством, в котором находится проба, коллимирующих оптических элементов с механическим затвором- светоотсекателем и фотоэлектронного умножителя, на фотокатод которого проецируется световой поток. При значении показателя СОД от 350 усл.ед./мл/мин и более и ИХЛ гемоглобина от 0,350 усл.ед. и более диагностируют антракосиликоз. Предлагаемый способ прост, существенно улучшает диагностику, обеспечивает высокую точность и позволяет не только осуществить дорентгенологическую диагностику антракосиликоза, что, в свою очередь, позволит проводить эффективную профилактику антракосиликоза на самых ранних стадиях развития, т.е. на стадии предболезни, но и является надежным дублирующим методом при постановке диагноза антракосиликоз 1 стадии.