1
(21)4405929/30-13
(22)05.03.88
(46) 30.11.89. Бюл. № 44
(71)Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт
и Московский технологический институт пищевой промьшшенности
(72)Н.А.Острикова, С.А.Коновалов, М.М.Переведенцева, Н.Н.Павлова, Ю.А.Белогорцев, К.А.Калунянц, М.В.Гернет, Л.П.Замотайлова
и Ф.Н.Чегодаев
(53) 577.15 (088.8)
(56) Авторское свидетельство СССР
№ 1090713, кл. С 12 N 9/42, 1982.
Авторское свидетельство СССР № 1073282, кл. С 12 N 9/42, 1982.
Авторское свидетельство СССР № 745933, кл. С 12 N 15/00, 1980.
(54) ШТАММ ГРИБА TRICHODERMA VIRIDE ВКПМ F-374 - ПРОДУЦЕНТ ВНЕКЛЕТОЧНОЙ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ И КСИЛАНАЗЫ (57) Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения целлкшолитических ферментов на основе культуры гриба Trichoderma vi- ride. Целью изобретения является создание штамма гриба Тг. viride 44-11- 62/3, на основе которого могут быть получены препараты целлюлозы разной степени очистки, сохраняющих продуктивность штамма. В результате мутагенной обработки исходного штамма и последующей селекции выделен штамм Тг. viride 44-11-62/3, обладающий искомыми свойствами.
i
(Л
Изобретение относится к области биотехнологии и касается получения целлюлолитических ферментов на основе культуры гриба JRICHODERMA VIRIDE. Целью изобретения является создание штамма гриба JR. VIRIDE 44-11-62/3, на основе которого могут быть получены препараты целлюлозы разной степени очистки, сохраняющих продуктивность штамма. В результате мутагенной обработки исходного штамма и последующей селекции выделен штамм JR. VIRIDE 44-11-62/3, обладающий искомыми свойствами.
Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и касается нового штамма - продуцента внеклеточных целлю- лаз, которые используются при силосовании грубых кормов, в производстве спирта, а также для получения сахаристых растворов из отходов пищевой и деревообрабатывающей промышленности..
Цель изобретения - получение нового штамма - продуцента внеклеточной целлюлазы и ксиланазы, обладающего более высокой активностью.
Штамм был получен путем селекции исходного штамма Trichoderma viride 44.
Штамм Тг. viride - 44-11-62/3 депонирован в Центральном музее промьш- ленных микроорганизмов института ВНИИгенетика под номером ВКПМР-374 и от известных продуцентов отличается не только более высокой продуктивностью внеклеточной целлюлазы, но и высокой продуктивностью сопутст- вующего фермента - ксиланазы, способствующего более глубокому расщеплению растительных остатков до легко усвояемых веществ.
Штамм Тг. viride 44-11-62/3 - продуцент целлюлолитических ферментов культивируется в глубинных условиях на жидкой питательной среде.
Активность целлюлазы характеризуют по гидролизу фильтровальной бумаги с определением образующихся Сахаров по методу Шомодьи-Нельсона.
Активность ксиланазы ;сарактери- зуют по гидролизу ксилана с последующим определением Сахаров по методу Шомодьн-Нельсона.
Культуральные признаки.
На сусло-агаре на 5-е сутки роста при 30 С диаметр колоний 5,0- 5,5 см колонии слегка приподнятые, мицелий пушистый, край волнистый,
колонии покрыты сплошь спорами лимон
но-желтого цвета, за исключением тонкого (1-2 мм) края. В среду выделяется желтый пигмент.
На картофельно-декстрозном агаре на 5-е сутки роста диаметр 6,0 - 6,5 см, колонии концентрические, приподнятые, край ровный, белый, размер 0,8 см. Среда не пигментирована.
На среде Чапека-Докса с сахарозой на 5-е сутки диаметр колоний 3- 4 см, колонии плоские, мицелий тонкий, колонии желтые, в центре колоний в среде желтый пигмент.
На среде Росдлен-Тома колонии кон центричес сие, вьтуклые, центр не приподнят, край волнистый, споры по все колонии, кроме тонкого края. Среда пигментирована.
На среде с микроцеллюлозой колонии диаметром 5,0 см. Концентричес
кие, плоские, центр слегка приподнят, мицелий тонкий стелющийся, белый. В среде желтый пигмент.
На среде с лактозой колонии диаметром 5,0 см, плоские, мицелий белый, споры редкие, в центре желтого цвета, среда пигментирована,
На среде Гетчинсона на поверхности жидкой среды светлый мицелий, бумага и среда окрашены в желтый цвет.
Морфологические признаки.
Конидиекосцы слабо дифференцированы, иногда разветвлены.
Конидии овальные, желтого цвета, размер (2,5-2,8)-(3,9-4,2) мкм.
Физиолого-биохимические приз наки.
Усваивает рамнозу, маннит, ксилозу, целлобиозу, арабинозу, лактозу.
0
C
0
5
0
5
0
5
0
галактозу, глицерин, крахмал, фруктозу, мальтозу, сахарозу.
Желатину разжижает, молоко не коагулирует. Использует аминную, нитратную и белковую формы азота. Гид- ролизует клетчатку до олигосахаров и глюкозы
Штамм интенсивно продуцирует цел- люло- и ксиланолитические ферменты на питательных средах, содержащих производные целлюлозы или растительные остатки.
Изобретение поясняется примерами.
Пример 1. Штамм Тг. viride выращивают в пробирках на скошенном сусло-агаре в течение 7 сут при 30 С и 7 сут при комнатной температуре. Полученным споровым материалом инокулируют 50 мл питательной среды состава,%: жом свекловичный - 3,0; NaN03-0,4; КН5,,2; (NH) 0,4; ,03 солодовые ростки 1, 43 ; картофельная барда 5, вода - ос-, . тальное. рН - 5,5 до стерилизации. Культивирование микроорганизмов проводят в течение 168 ч в конических колбах емкостью 750 мл на круговой качалке 180 об/мин. Активность целлюлозы 24 ед/мп культуральной жидкости,ксиланазы - 21 ед/мил.
Пример 2. Культивирование гриба Т. viride 44-11-62/3 осуществляют на питательной среде того же состава, что и в примере 1, в ферментере емкостью 10 л с коэффициентом заполнения 0,6, при аэрации 1 л кислорода на 1 л питательной среды, при начальном рН 5,5 в течение 144 ч. Активность целлюлазы 35 ед/мл, ксиланазы - 40 ед/мл.
В таблице приведена сравнительная характеристика биосинтетической способности предлагаемого штамма Т.viride 44-11-62/3 и известногоШтамм Т. viride 44-11-62/3 обладает большей продуктивностью и его использование может интенсифицировать процесс получения внеклеточной целлюлазы и ксиланазы.
Формула изобретения
Штамм гриба Trichoderma viride ВКПМ F-374 - продуцент целлюлазы и ксиланазы.
Т, viride
44-11-62/3 35 Т.viride 44 24
40 21
