Штамм плесневого гриба 44-продуцент целлюлолитических ферментов Советский патент 1980 года по МПК C12D13/10 

(54) ШТАММ ПЛЕСНЕВОГО ГРИВА Тгiсhoderma viride 44 Изобретение относится к ферментной отрасли микробкологической промышленности и касается нового штамма, продуцента, внеклеточных целлюлаз , которые используются при силосовании грубых кормов, в пр изводстве спирта, а также для получения сахаристых растворов из отходов пищевой и деревообрабатывающей промышленности. Известны различные штаммы плесневых грибов, в том числе вида Triehoderma viride, ферменты которы применяются для гидролиза целлюлоэосодержащих растительных субстратов Cl3 . Недостатком известных продуцентов целлюлаз является низкая активность С1 -фермента. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является штамм Trichoderma viride, ВсесоюзiHoro научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов. Этот штамм характеризуется следукяцими признаками. При посеве уколом на агаризованную среду Роулен-Тома с добавлением кукурузного экстракта на 7 сут роста образуется колония ПРОДУЦЕНТ ЦЕЛЛКШОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ штамма, которая занимает всю поверхность чашки. Воздушный мицелий белый, порошковидный, периферия колонии не Опущена, Конидии в виде темно-зеленых подушечек густо собраны в центр колонии. Среда не окрашена. Культура способна утилизировать глюкозу, глицерин, крахмал, целлюлозу. Молоко коагулируют с последующей пептонизацией,конечная величина рН 7,8. Желатину разжижает медленно. Оптимальная температура роста штамма на агаризованной и жидкой питательных средах 28-30 С. Дыхание аэробное. Продуцируют целлюлолитические ферменты. Активность Cj -фермента - 5,5 ед/мл 23. Цель изобретения - получение HOBord штамма, обеспечиваняцего повышенную активность целлюлозы. Штамм гриба Trichoderma viride 44 получен из музейного штамма Trichoderma viride ;ВНИИГенетика (регистрационньлй ) путем трех этапов селекции с применением тепловой обработки и химических мутагенов.

745933

,Л1тамм Trichoderma viride 44 - продуцент целлюлолитических ферментов культивируется вглубинных УСЛОЁИЯХ на жидкой питательной сре дег;;;; ;;;;;;/; ;/ 7.,.,„. . .,. ,1,..L.., .,л

Активность целлюлазы Cj -фермента определяют с использованием в качестве субстрата фильтровальной бумаги по етоду Шсмодьи-Нельсона,

Активность целлюлазы С -фермента в культуральной жидкости составляет 22-25 ед/мл на 6 сут роста.

Морфологические признаки.

Мицелий септирован, конидиеносцы формируются в виде боковых ответвлений гиф на 30-32 ч роста/слабо дифференцированы, иногда разветвленные. Конидии овальные, размером 2,5-2,8 X 3,5-3,7 мк лимонно-желтого цвета. .

Культуральные признаки.

На сусло-aratie на 5 сут роста при 30 диаметр колоний З,5-3,8 см. Воздушный мицелий белый, колонии концентрические, центр приподнят, в агар не врастают, конидии лимонно-желтого цвета, в среду выделяется желтый пигмент.

На картофельно-декстрозном агаре на 5 сут диаметр колоний 3,0-3,2 см, характер роста как на среде с сусло-агаром. На среде Чапека с крахмалом на 5 сут диаметр колоний 2,53,0 см, рост слабый, мицелий в виде лёгкого налета, конидии желтые, расположены по всей колонии, среда окрашена в желтый цвет.

На среде Чапека-Докса с сахарозой на 5 сут диаметр колоний 3,03,2 см. Характер роста как на среде Чапека с крахмалом. Среда не пигментирована.

На среде Гетчинсона на 5 сут на поверхности бумаги образуется белый ыхлых мицелий, среда и полоска буШгiflSKpSiaeifiiif Б йимбнно-желтьзй цвет.

На ломтиках картофеля хорсвиий рост, мицелий пушистый, белый, кониии лимонно-желтого цвета, ломтик картофеля окрашен в желтый цвет.

На среде Роулен-Тома на 7 сут роста диаметр колонии 5,0-5,5 см, мицелий белый, порошковидный, -конидии желтогр цвета покрывают всю поверхность колонии. Среда не окрашена.

Физиолого-биохимические признаки.

Ассимилирует глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, сахарозу, глицерин. Клетчатку гидролизует до глюкозы. Крахмал гидролизует. Желатину не разжижает.

Молоко не коагулирует. Использует аммонийную, нитратную и белковую ормы азота.

Штамм ийтенсивно продуцирует

целлюлазу при росте на средесо векловичным жомом.Максимум «акоплеНИН целлюлаз в культуральной жидкости приходится на 144 ч роста.

При культивировании штамма Trichoderma viride-44 в ферментере емкостью ЗХ) л активностьCi-фермента

на 4 сут составляет 17-18 ед/мл,

на 6 сут 22-25 ед/мл.

Таким образом, предлагаемый штамм позв 1ляет повысить активность культураль юй жйдкости с 5,5 до 20-25 ед/мл, что обеспечивает-повышенный выход препарата.

Штамм характеризуется обильным спорообразованием, что имеет большое значение для производства ввиду сокращения количества посевного материала.

Экономический эффект составляет, 1333 руб/м культуральной жидкости.Формула изобретения

Штамм плесневого гриба Trichoderraa viride 44 - продуцент целлюлолитических ферментов .хранится в музее культур Всесоюзного научноисследо ательского института генетики промышленных микроорганизмов. Регистрйционный ЦМПМ F-105.

Морфологические признаки. Мицелий септирован. Конидиеносцы слабо дифференцированы, формируются к 30-32 ч роста в виде боковых ответвлений гиф, иногда разветвленные. Конидии овальные, размером 2,52,8x3,5-3,7 мк, содержат одно ядро лимонно-желтого цвета.

Культуральные признаки.

На сусло-агаре на 5. сут роста при 30 диаметр колоний 3,5-3,8 см. Воздушный мицелий белый, колонии

концентрические, в агар не врастают, центр приподнят, конидий лимонножелтого цвета, в среду выделяется желтый пигмент.

На среде Роулен-Тома скукуруз5 ным экстрактом на 7 сут роста диаметр колоний 5,0-5,5 см, мицелий бледно-желтый, порошковидный. Конидии желтого цвета, среда не окрашена.

0 На картофельно-декстрозном агаре на 5 сут роста диаметр колоний 3,0-3,2 см, характер роста как на среде с сусло-агаром.

На среде Чапека с крахмалом на

f 5 сут роста диаметр колоний 2,53,0 см, рост слабый, мицелий в виде легкого надета, конидии желтые, среда окрашена в желтый цвет.

. На среде Чапека-Докса с сахарозой на 5 сут роста диаметр колоний

0 3,0-3,2 см, характер роста как на среде Чапека с крахмалом. Среда не пигментирована.

На .среде Гетчинсона на 5 сут роста на поверхности бумаги образуется белый рыхлый мицелий, сред-п 5 74593 и полоска бумаги окрашены в лимонножелтый цвет, На ломтиках картофеля рост хороший, мицелий пушистый, белый, конидни лимонно-желтого цвета, ломтик .картофеля окрашен в желтый цвет.5 Физиолого-биохимические признаки. Ассимилирует глюкозу, галактозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, сахарозу, глицерин, лактозу, Клетчатку гидролизуют до глюкозы,.Q крахмал гидррлизуёт, желатину не. разжижает, молоко не коагулирует. Использует аммонийную, нитратную и белковую формы азота. Штамм интенсивно продуцирует целлюлазу при росте на среде со 36 ::веклоЬичным жомом. Максимум накопления целлкшаз на 144 ч. Активность С|-фермента на 4 сут составляет 17-18 ед/мп, на 6. сут 22-25 ед/мп, Источники информации, тринятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельствсэ СССР № 399522, кл. С 12 D 13/10, 1973. 2.Калунянц К.А., Ваганова М.С., Шусь Г.В., Чугунова Т.Д. и Грачев Ю,П, Оптимизация состава пйтательной среды для биосинтеза целлюлазы грибом Trichoderma . - Прикладная; биохимия и микробиология, 1976, т. XII, вып. 2, с. 269-272 (прототип).