Способ получения пероральной композиции для профилактики кокцидиоза у домашней птицы Советский патент 1989 года по МПК A61K39/12 

Изобретение относится к биотехнологии , а точнее к созданию вакцинных препаратов для профилактики болезней сельскохозяйственных животных.

Целью изобретения является повьппе- ние имкгуногенности композиции.

Пример 1. В качестве гелевой основы используют альгинат натрия (llanucol LB) , характеризующийся высоким соотношением кислотных остатков маннурановой, гулуроновой кислот и низким молекулярным весом Manucol - торговое название фирмы Kelko/Alh International) .

95 мл водного раствора, содержащего 11 мас.% itanucol LB, смешивают с 5 мл водной суспензии жизнеспособных спорулированных ооцист кокцидий (Eimeria

tenella), содержащей приблизительно 600 000 ооцист.Эту смесь выливают по каплям с высоты 76,2 мм в 5%-ный вод- №1Й раствор дигидрата хлорида кальция. Получают бисеринки свернувшегося геля диаметром 5 мм и весом 40 мг. В течение 2 мин получают 2 500 бисеринок.

Бисеринки оставляют в свертывающей ванне на 15 мин, отделяют от свертывающего агента и затем вымачивают в течение ночи под током водопроводной воды для удаления избытка хлорида кальция. Затем бисер сушат на адсорбирующей бумаге при температуре окружающей среды по конечной влажности 15-16%.

сх

Пример 2. В качестве гелево- го материала применяют альгинат натрия, а в качестве увлажнителя - гли- цин,

45 мл водного раствора, содержащего 11 мас,% Manucol LB (альгина- та натрия), смешивают с 5 мл суспензии ооцист кскцидий (как в примере 1) и 50 мл глицерина. Из полученной смеси получают бисер аналогично примеру 1, за исключением того, что избыток хлорида кальция удаляют из жела- тинизированного бисера путем вымачива

возраста, а вторая группа получает обычную не содержащую ооцист, диету. Птицы содержатся за проволокой, так что колич(ество принятых за день ооцисг можно регулировать. Помещение, в котором содержат птиц, предварительно тщательно обрабатывают с целью обеспечения отсутствия оставшихся ооцист.

Ооцисты получают путем инфицирования четырехнедельных бройлерных цыплят СоЬЪ оральной дозой 50 000 ооцист каждому цыпленку. Их помет собирают

Изобретение относится к области биотехнологии, а точнее к созданию вакцинных препаратов для профилактики болезней сельскохозяйственных животных. Предлагается способ получения пероральной иммуногенной композиции для профилактики кокцидиоза у домашней птицы. Согласно изобретению используют в качестве наполнителя альгинат натрия, 11%-ный раствор которого смешивают с суспензией спорулированных цист кокцидий EIMERIA TENELLA, содержащей 120000 цист в 1 мл, до конечной концентрации 6000 цист в 1 мл. Затем указанную смесь выливают по каплям в водный раствор дигидрата хлорида кальция, получаемые при этом бисеринки выдерживают в указанном растворе 15 мин, после чего их вынимают, промывают проточной водой и сушат до остаточной влажности 15...16%. 1 табл.

ния в течение ночи в смеси вода/глице- с на шестой, седьмой и восьмой день

рин 50/50, конечная влажность сухого бисера 15-16 мас.%.

Жизнеспособность ооцист кокцидий в альгинатном бисере, полученном в соответствии с примерами 1 и 2, определяют следующим образом.

После хранения в обезвоженном состоянии в течение нескольких дней пробу альгинатного бисера смешивают с 500 г обычного корма для домашней птицы таким образом, что каждый 500- граммовый образец содержит приблизительно 2500 бисеринок. Каждый образец корма дают двум 30-дневным циплятам по потребности в течение двух дней. При сохранной жизнеспособности ооцист у всех птиц наблю- дают клинические симптомь кокцидиоза с кровью в помете на пятый и шестой день после приема корма, содержащего ООЦИСТЫ.

Экперимент показывает, что большое количество ооцист кокцидий остается в жизнеспособной форме, несмотря на обработку, которой их подвергают, и они могли удовлетворительно существовать в кишке, несмотря на то, что заделаны в твердой альгинатной гель- матрице .

Пример 6, Эксперимент проводят с целью подтверждения того, что очень незначительное количество вирулентных спорулированных ооцист, добавленных в композиции согласно предлагаемому способу к корму для домашней птицы, могут выжить и вызвать регулируемую субклиническую инфекцию при введении восприимчывым птицам, Иммунитет, создаваемый при такой обработке в течение 27 дней.

20

25

30

35

40

45

50

после инфицирования, смепшвают приблизительно с двойным объемом 2,5%-но- го водного раствора бихромата калия и затем гомогенизируют с целью получения однородной суспензии. Суспензию процеживают через нейлоновое сито, и ООЦИСТЫ отделяют от фильтрата методом солевой флотации следукщим образом. Сначала ооцисты седицеити- руют центрифугированием со скоростью 1 OOO g в течение 15 мин, и осадок повторно суспендируют в насьш енном водном растоворе хлорида натрия. Полученную суспензию центрифугируют со скоростью 500 g в течение 10 мин и оставшуюся суспензию ооцист разбавляют 10 объемами дистиллированной воды, В результате центрифугирования со скоростью 1 в течение 15 мин из ООЦИСТЫ образовываются гранулы. Повторяют всю процедуру солевой флотации и в заключе ше полученные гранулы ооцист помещают в 2,5%-ный вод- нвй раствор бихромата калия. Экстрагированные ООЦИСТЫ подвергают спору- ляции при непрерывной аэрации суспензий в течение 4 дней при 28 С, Эти ООЦИСТЫ хранят при 4°С в буферном фосфатном растворе в качестве суспензии штамма,

Биссер получают по способу, описанному в примере 1, за исключ ением того, что общее количество спорулированных ооцист кокцидий 30 000,240 бисеринок добавляют к 3 кг куриного корма и дают однодневным цыплятам в течение 3 недель. Количество ооцист, выделявшихся с экскрементами каждой группой, контролируют.

Установлено, что ооцисты выживают

проводят путем введения 50 000 ооцист,- - в корме в течение периода эксперйменБерут две группы по 12 птиц каждая. Первая группа получает ооцистсодер- жащую диету, начиная с однодневного

0

5

0

5

0

5

0

после инфицирования, смепшвают приблизительно с двойным объемом 2,5%-но- го водного раствора бихромата калия и затем гомогенизируют с целью получения однородной суспензии. Суспензию процеживают через нейлоновое сито, и ООЦИСТЫ отделяют от фильтрата методом солевой флотации следукщим образом. Сначала ооцисты седицеити- руют центрифугированием со скоростью 1 OOO g в течение 15 мин, и осадок повторно суспендируют в насьш енном водном растоворе хлорида натрия. Полученную суспензию центрифугируют со скоростью 500 g в течение 10 мин и оставшуюся суспензию ооцист разбавляют 10 объемами дистиллированной воды, В результате центрифугирования со скоростью 1 в течение 15 мин из ООЦИСТЫ образовываются гранулы. Повторяют всю процедуру солевой флотации и в заключе ше полученные гранулы ооцист помещают в 2,5%-ный вод- нвй раствор бихромата калия. Экстрагированные ООЦИСТЫ подвергают спору- ляции при непрерывной аэрации суспензий в течение 4 дней при 28 С, Эти ООЦИСТЫ хранят при 4°С в буферном фосфатном растворе в качестве суспензии штамма,

Биссер получают по способу, описанному в примере 1, за исключ ением того, что общее количество спорулированных ооцист кокцидий 30 000,240 бисеринок добавляют к 3 кг куриного корма и дают однодневным цыплятам в течение 3 недель. Количество ооцист, выделявшихся с экскрементами каждой группой, контролируют.

Установлено, что ооцисты выживают

та. Существенный иммунитет начинает развиваться вскоре после достижения цыппа.тами двухнедельного возраста.

Формул а

3 о

бретени

так как отмечается резкое повышение выделения ооцист, которое к 21 дню снижается,

Обцисты, вызывакхцие иммунитет, не оказывают никакого патогенного действия. В течение всего периода иммунизации не наблюдают в помете кровь и, кроме того, средняя прибавка веса контрольной группы и/группы, у которой создают иммунитет, 11)актически одинаковая до дня контрольного заражения с цепью проверки им tyнитeтa,

Контрольное заражение 50 000 ооцист на 27-й дель вызывает серьезные забо- .с содержащей 120 000 цист в 1 мл, до левания у контрольной группы, что мож- конечной концентрации 6000 цист в

10

Способ получения пероральной ко позиции для профилактики кокцидиоз у домашней птицы, включающий смеши ние суспензии спорулированных цист к цидий с наполнителем, о т л и ч а щ и и с я тем, что, с целью повыше ния иммуногенности композиции, в к честве наполнителя используют альги нат натрия, 11%-ный раствор которо смешивают с суспензией спорулирова ных цист кокцидий Eimeria tenella,

ио судить по содержанию крови в помете и обильному выделению ооцист. Иммунизированная группа явно не подвергается действию инфекции, но смертность не наблюдается в обеих группах.

Примеры 4-7. Применение наполнителей ДЛЯ получения альгинатно- го бисера.

Бисер получают по методике, описанной в примере 1, с применением раствора, указанного в таблице.

По примерам 2-7 после свертывания и сушки, как в примере 1, получают прочный биссер.

Малисо LM представляет собой аль- гинат с высоким соотношением кислотных останков маннурановой; гулуроно- вой кислот и высоким молекулярным весом. При применении наполнителя предпочтителен высокомолекулярный аль гинат, чтобы обеспечить получение геля- требуемой прочности.

рмул а

6

3 о

бретения

содержащей 120 000 цист в 1 мл, до конечной концентрации 6000 цист в

Способ получения пероральной композиции для профилактики кокцидиоза у домашней птицы, включающий смешивание суспензии спорулированных цист кок- цидий с наполнителем, о т л и ч а ю- щ и и с я тем, что, с целью повыше- ния иммуногенности композиции, в качестве наполнителя используют альги-: нат натрия, 11%-ный раствор которого, смешивают с суспензией спорулирован- ных цист кокцидий Eimeria tenella,

20

мл, после чего указанную смесь выливают по каплям с высоты 76,2 мм в 5%-ный водный раствор дигидрата хлорида кальция, получаемые при зтом бисеринки выдерживают в указанном растворе 15 мин, после чего их вынимают, про№)1вают проточной водой и сушат до остаточной влажности 15-16%.

25

30

5

6 7

110%-ная коммерческая белая пшеничная мука

0,2510%-наЯ|коммерческая белая пшеничная мука

110%-ный каолин

0,2510%-ный каолин