Изобретение относится к биологии клетки и медицине.
Цель изобретения - определение способности клеток секретировать простп- гландин Е (ПГЕ) в культуральную среДУЦель достигается тем, что культуральные жидкости (КЖ) исследуемых клеток, предварительно обработанных и необработан {ых ингибитором 1:-л1нтеза ПГЕ индометацином, добавляют к нормальным клеткам-киллерам (НК-клет- Кс1м), и досле инкубации определяют цитотоксическую активность (ЦТА) НК- клеток. Вывод о способности клеток секретировать ПГЕ делают на основа- НИИ снижения ЦТА НК-клеток после инкубации их с культуральной средой исследуемых клеток, не обработанных индометацином, при одновременном сохранении зтой активности в присутствии КЖ-клеток, обработанных индометацином.
Пример. Двухсуточную KyjibTypv клеток высокозлокачественной опухоли сирийского хомяка, индуцированной вирусом саркомы Рауса (OnX--SR), обработанную или необработанную в течение двух часов индометацином (20 мкг/мл ростовой среды), снимали со стекла версеном, осаждали центрифугированием при 400 g, в течение 5 мин, и ресус- пендировали в питательной србде RPMI-1640 (с 10% бычьей сыворотки) до концентрации не ниже 2-10 клеток в 1 мл среды.
Клетки повторно центрифугировали 5 мин при 400 g, затем помещали а,
Ю
сл
термостат при З7 с на 20 мин, отсасывали КЖ и 0,2 мл КЖ добавляли к равному объему суспензии НК-клеток, содержащей (2-5) 10 клеток в 1 мл среды. НК-клетки предварительно выделяли из крови человека в ступенчатом, градиенте плотности перколла. После 30 мин инкубации при 37 С к НК-клет- кам добавляли 0,4 мл меренных клеток человека MOLT А такой концентрации, чтобы соотношение клеток-мишеней и эффекторов (ПК-клеток) составляло 1:50. Затем ставили цито- токсический тест стандартным методом в 96-луночной плате. Через 4 ч отсасывали из лунок по 0,1 мл надосадоч- ной жидкости в пластиковые ампулы и просчитывали их в тамма-счетчике. Уровень ЦТА определяли по общепринятой формуле расчета процента лизиса мишеней (процент выхвда радиоактивной метки из клеток в надосадочную жидкость)
ЦТА
1спи1 - IlkOHJ I моче - I кпитр
I 00%,
де I
опит noirt p
:и I
макс
количество импульсов в надосадоч- ной жидкое- 30 ти в опыте, контроле или при полном лизисе клеток-ми- 35 шеней соответственно .
В данном примере ЦТА интактных К-клеток равна
П47-689 2252-689
100% 29,3%;
0
0
5
5
30 35
100% 26,1%.
ЦТА НК-клеток, обработанных КЖ OnX-SR, снижалась до
939::689
2252-689 °°
ЦТА НК-клеток, обработанных КЖ OnX-SR, преобработанных индометаци- ном, равна
1097;689
2252-689
Кэ представленных данных видно, что КЖ клеток ОПХ-SR снижает ЦТА К-клеток почти в 2 раза (с 29,3 до 15,6%), а индометацин отменяет этот эффект. На основании этих данных бьш сделан вывод о секреции этими клетками простагландина типа Е, Формула изобретения
Способ определения способности кле- ток секретировать простагландин Е в среду культивирования, включающий обработку нормальных клеток-киллеров культуральной жидкостью исследуемых клеток, обработанных индометацином, и культуральной жидкостью тех же клеток, не обработанных индометацином, с последующим определением цитотокси- ческой активности исходных и обработанных культуральными жидкостями клеток-киллеров, при этом способность клеток секретировать простагландин Е в среду определяют при наличии снижения цитотоксической активности в пробе без индометацина и одновременном отсутствии снижения в пробе с индометацином.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| КОМБИНИРОВАННЫЙ КЛЕТОЧНЫЙ ТРАНСПЛАНТАТ НА ОСНОВЕ ЛИМФОКИНАКТИВИРОВАННЫХ КИЛЛЕРОВ И ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ, ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И ИММУНОДЕФИЦИТНЫХ СОСТОЯНИЙ | 2006 |
|
RU2309753C1 |
| СПОСОБ ОЦЕНКИ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ НАТУРАЛЬНЫХ КИЛЛЕРОВ | 2012 |
|
RU2514019C2 |
| Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L.-продуцент моноклонального антитела к гликопротеиду миелина головного мозга, угнетающего активность естественных киллеров человека | 1990 |
|
SU1721092A1 |
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ БИОАКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ И СОСТАВ ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ | 1992 |
|
RU2125727C1 |
| СПОСОБ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ РАКОВЫХ КЛЕТОК К ЛИЗИСУ, ОПОСРЕДОВАННОМУ КЛЕТКАМИ-КИЛЛЕРАМИ | 1994 |
|
RU2153332C2 |
| АУТОЛОГИЧНАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ | 2008 |
|
RU2392946C2 |
| СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОРОВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ | 2010 |
|
RU2429005C1 |
| СПОСОБ ОЦЕНКИ ЦИТОПРОТЕКТИВНОГО ЭФФЕКТА ПРЕПАРАТОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ В ОТНОШЕНИИ КЛЕТОК ТРОФОБЛАСТА В УСЛОВИЯХ ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С ЕСТЕСТВЕННЫМИ КИЛЛЕРАМИ | 2021 |
|
RU2768461C1 |
| Производные нестероидных противовоспалительных средств | 2018 |
|
RU2732297C2 |
| ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ НУКЛЕАЗЫ БАКТЕРИЙ РОДА SERRATIA | 2014 |
|
RU2580242C2 |
Изобретение относится к биологии клетки и медицине и может быть использовано для изучения способности нормальных и опухолевых клеток секретировать простагландин Е. Целью изобретения является определение способности клеток секретировать простагландин в культуральную жидкость. Сущность изобретения состоит в том, что исследуемые клетки культивируют в присутствии ингибитора синтеза простагландина Е-индометацина или без него, а затем полученные культуральные жидкости добавляют к нормальным клеткам-киллерам (НК-клеткам) и после инкубации определяют цитотоксическую активность (ЦТА) НК-клеток. Вывод о способности исследуемых клеток секретировать простагландин Е в среду делают на основании снижения ЦТА НК-клеток в присутствии культуральной жидкости этих клеток, не обработанных индометацином, при условии отмены этого эффекта в присутствии культуральной жидкости исследуемых клеток, обработанных индометационом.
