Способ определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к биологии и медицине, преимущественно к иммунодиагностике.

Целью изобретения является повышение точности определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции.

Способ осуществляют следующим образом.

Испытуемую сыворотку титруют в нескольких рядах полистероловой пластинки с лунками или пробирках. Татем, начиная с второго ряда, вносят антиген последовательно во 2-й ряд 2 единицы, в 3-й 4 единицы, в 4-й 8 единиц и далее. Через 30 мин во все ряды добавляют дифтерийный антигенный эритроцитарный диагностикум (ДАЭД). Учет результатов проводят через 1,5- 2 ч, регистрируя проявления гемагглю- тинации. Для оценки эффекта торможения можно использовать количественный показатель - индекс торможения (ИТ), который вычисляют по отношению дозы антигена в РТПГА к кратности снижения титра, по сравнению с титром в РПГА. ИТ дробные, меньшие единицы (1/2, 1/4, 1/8...), присущи эквивалентному торможению. Пелые числа - 1,2,4,8 наел

со

Јь Јь

блюдлютсл при неэквивалентном торможении антигена IgM-антителами.

Для оценки этот положения были проведены опытн с выделением Фракций TgM и TgG in i ипериммунных сывороток лошадей, которые провели методом бесколоночной хроматографин с помощью ДЕАЕ целлюлозы.

Полученные фракции были испытаны в РОГА и РТПГА (табл. 1).

На основании анализа клинических материалов и результатов исследования гыпорогок больных дифтерией, ан- гином, бактерионосителей токсигенных коринебактерий дифтерии, а также здоровых лии, проведенных однократно и в фиксированные сроки и в динамике, были приняты следующие критерии онен- ки состояния иммунитета при дифтерийной инфекции.

антитела не обнаруживаются в первые пять дней болезни или к 5-му появляются н низких титрах (1:10), а к 2-3-й неделе титр повышается до 1 :80- :320 и в дальнейшем возрастает, в РТПГА торможение неэквивалентно (индексы равны целым числам - рассматривается как реализация первичного ответа;

антитела до 5 сут обнаруживаются в низких титрах и к 7-10 дню титры их возрастают до 1:320-1:1280-1:2560, в РТПГА титры снижаются эквивалентно либо наблюдается сменл зоны эквивалентного торможения неэквивалентным - индексы торможения от дробных переходят к пелым; такие результаты свойственны заболеваниям ранее иммунных с проявлением вторичного ответа;

антитела на первой неделе заболевания у пациента с ЛОР-патологией, выделяющего токсигенные коринебактерий дифтерии, могут быть в значите ль- ных титрах, которые повышаются в динамике относительно нерезко} в таких случаях результаты ТРПГА сходны с таковыми у иммунных бактерионосителей, не имеющих клинических признаков болезни; индексы торможения в обоих си- . туациях дробные, отражают преобладание антител IgG класса;

антитела у больных с ЛОР-патологией, не связанной с возбудителем дифтерии, имеют, как правило, стабиль ную динамику титров, некоторые колебания параиммунитетно о характера на фоне инфекции могут регистрироватьгя

0

5

0

35

5 0

.,

40

50

55

и о v . иных к дифтерии лиц терпение носи xapaKiep квивапент- ног о .

В условиях ппановои иммунизации и иммунологического контроля за состоянием иммунитета населен:; посредством только РИГА была оценена структура напряженности иммунитета к дифтерии у разных контингентов (табп. 2).

Из табл. 2 видно, что больные дифтерией и больные ангиной не имели существенных различий по структуре титров антител. Лишь у бактерионосителей заметна доля лиц с высокими титрами антител (около 80%). Однако на основании результатов только РПГА высказать какие-либо обоснованные суждения об иммунном ответе не представляется возможным.

с

Пример 1. Больной П. Клинический диагноз: дифтерия, подтвержденная выделением возбудителя. Сыворотка взята на 1-й неделе болезни. Титр антител в РПГА 1:32. В РТПГА с 2 единицами антигена титр снизился до 1:16, с 4 единицами остался 1:16, с 8 единицами снизился до 1:8 и с 16 единицами - до 1:4. Соответственно ИГ составили 1 ; 2,; 2 и 2, что свидетельствует о неэквивалентном торможении.

Полученный в РПГА титр (1:32) не противоречит суждению о дифтерийной инфекции и, вероятно, первичному характеру ответа. Такой ответ йе содержит больше информации, в частности, о качестве антител. Параллельная постановка РТПГА по предлагаемому способу позволяет считать, что в сыворотке содержатся антитела к дифтерийному токсину (анатоксину), требующие для своей нейтрализации более высоких доз антигена, чем это нужно для нейтрализации IgG-антител, ИТ - целые числа. Эти результаты однократного исследования на первой неделе болезни позволяют установить признак первичного иммунного ответа у заболевшего.

Пример .2. Больная М. Клинический диагноз: дифтерия, подтвержденная выделением возбудителя. Сыворотка взята на 6-й день. Титр антител в РПГА 1:256. В РТПГА с 2 единицами антигена титр снизился до 1:16,

5

с 4 осiалея 1:16, с 8 остался 1:16, с 16 1:16, с 32 1:16. Соответственно ИТ составил 1/8; 1/4; 1/2; 1 и 2.

Титр сыворотки в РИГА 1:256 на первой неделе болезни может свидетельствовать о реализации вторичною ответа у заболевшего. В пользу этого -эквивалентное торможение антител малыми дозами антигена (2,4 и 8). Однл- ко РТПГА с более высокими дозами антигена позволяет обнаружить присутствие и таких антител, торможение которых нуждается в более высоких дозах антигена. Такое сочетание результатов РИГА и РТПГА с разными дозами антигена позволяет охарактеризовать иммунный статус у заболевшего, обладавшего иммунологической памятью.

Предлагаемый способ определения

состояния иммунитета при дифтерийной инфекции имеет следующие преимущества перед известным: повышается точность определения состояния иммунитета, важного для диагностики (на пер- вой неделе у обследованных можно установить объективные признаки первичного иммунного ответа или вторичного) полученные в первые 5 дней результаты могут иметь важное значение для определенной части больных (ведение, лечение, иммунотерапия); определение- типа иммунного ответа к концу первой началу второй недели опережает возможности известных способов; раннее выявление первичных дифтерий в очагах или контингентах риска повышает эффективность эпидемиологического надзора. Объективное контролирование состояния иммунитета посредством предлатаемого способа необходимо для оценки эффективности иммунопрофилактики (препараты, дозы, схемы и т.п.), что не достигается известными способами, более зависимыми от динамичес- ких обследований.

10

|20

2530 «л д§

44016

Способ пригоден как элемент дифференциальной диагностики дифтерии и сходных с нею заболеваний другой этиологии, бактерионосительства ток- сигенных Коринебактерий дифтерии. На такой основе могут быть усовершенствованы профилактические и противоэпидемические мероприятия..

Способ обеспечен всеми необходимыми средствами для применения в условиях практической лаборатории: коммерческими диагностическими препаратами для РПГА и РТПТА, стандартным анатоксином (полуфабрикат вакцин), стандартным антитоксином, отечественными пластинками для серологических реакций, не требует сложного оборудования или высокой квалификации персонала .

Способ экономичен и может быть осуществлен при наличии малых объемов сыворотки (0,1-0,2 мл).

Формула изобретения

Способ определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции путем добавления к исследуемой сыворотке дифтерийного антигенного эритропи- тарного диагностикума с последующим выявлением специфических антител в реакции пассивной гемагглютинации, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно ставят реакцию торможения пассивной гемагглютинации с возрастающими дозами дифтерийного анатоксина, сравнивают результаты реакций между собой и по неэквивалентному снижению титров антител определяют состояние первичного иммунного ответа организма, а по эквивалентному определяют стационарную фазу вторичного иммунного ответа.

Таблица 1

Изобретение относится к биологии и медицине, преимущественно к иммунодиагностике. Способ оценки сывороток в серологических реакциях может быть использован для дифференциальной лабораторной диагностики первичного и вторичного имунного ответа в клинической и эпидемиологической практике, экспериментальной работе. Цель - повышение точности определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции. Способ осуществляется следующим образом: испытуемую сыворотку титруют в нескольких рядах полистероловой пластины с лунками и к первому ряду добавляют дифтерийный эритроцитарный диагностикум, а в последующих рядах сыворотку соединяют с возрастающими дозами анатоксина (например, 8, 16, 32 единицы МНД) и через 30 мин вносят диагностикум дифтерийный анатоксинный эритроцитарный. Учет результатов производят через 1,5 - 2 часа и оценивают по эквивалентности торможения. Наличие в сыворотке эквивалентного торможения свидетельствует о стационарной фазе вторичного иммуного ответа, а при неэквивалентном - первичный иммунный ответ. 2 табл.

Индексы эквивалентного (б) и неэквивалентного (а) торможения .

Таблица 2

16

25 73

29

12,5

4,0 12,3

Составитель Г.Крюкова Редактор В.Петряш Техред М.Дидык

Заказ 39

Тираж 502

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113015, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

31,25 25

40,0 24,6

36,0 48,0

13,8 79,3

Корректор С.Шекмар

Подписное