Способ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекции Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к эпидемиологии, и предназначено для отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций - к инди- видуализированному подходу при иммунизации.

Цель изобретения - повышение точности отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций.

Способ осуществляется следующим образом.

Не менее, чем у 25 лиц, предполагаемых для вакцинации, берут из пальца кровь в количестве 0,7-1,0 мл для микроварианта постановки РПГА или 2-5 мл из вены для ее макроварианта. По инструкции получают сыворотку и определяют в ней титру антител к специфическому и неспецифическому антигенам (Наставление по использованию эритроцитарных диагностикумов из шигелл Флекснера, Ньюкестл и Зонне, приложенного к этим диагностикумам производства

О

о о

ЛНИИВС. - Наставление по применению дифтерийного антигенного эритроцитарно- го диагностикума ЦНИИЭ МЗ СССР и др.).

Для получения сыворотки взятую кровь для ее свертывания выдерживают при t 3-7°С в течение 18-24 ч. Пробы центрифугируют при 3000 об/мин 15-20 мин. Сыворотку переносят а другую пробирку и при необходимости ее разводят в 2-10 раз физиологическим раствором, выдерживают при t 56°С в течение 30 мин. Сыворотку охлаждают до комнатной температуры и для освобождения от гетерогемагглютининов к ней добавляют 50% взвесь отмытых форма- линизированных бараньих эритроцитов из расчета 0,1 мл этой взвеси на 1,0 мл разведенной сыворотки. Смесь встряхивают и выдерживают при t 3-7°С в течение 15-20 ч, центрифугируют при 3000 об/мин. Сыворотку переносят в другую пробирку.

Приводим микровариант постановки РПГА, используемый в заявке.

В лунки первого ряда полистироловых пластинок для микроварианта постановки РПГА переносят дозатором по 0,025 мл еы- вороток. Добавляют в лунки первого ряда и последующих рядов по 0,025 мл фосфатного буфера с рН 7,2. Микродозатором последовательно раститровывают каждую сыворотку так, что в 1 лунке ее разведение будет двухкратное, во 2 - четырехкратное и т.д. Добавляют в каждую лунку по 0,025 мл 0,3% взвеси эритроцитов дифтерийного или столбнячного диагностикума. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1,5-2,0 ч.

Учет результатов реакции проводят по следующей схеме:

+-положительная реакция

РПГА, эритроциты равномерно покрывают всю сферу лунки

+-переходная форма, отмечается

частичная гемагглютинация широкое кольцо с заметной гемагглютинацией по краю; отрицательная реакция РПГА.

Реакцию сопровождают обязательными контрольными исследованиями, проводят контроль диагностикума на отсутствие спонтанной гемагглютинации и на отсутст- вне агглютининов к эритроцитам барана

Титр антител к антигену Ньюкестл определяют в РПГА макровариантом ее постановки.

Сыворотку в количестве 0,5 мл дозато; ром переносят в лунки 1 ряда планшета. Добавляют в лунки по 0,5 мл забуферного физиологического раствора (рН 7,2). Сыворотку раститровывают дозатором путем последовательного двухкратного разведения

в объеме 0,5 мл. В каждую лунку приливают по 0,2 мл 1%-ной взвеси эритроцитов диагностикума Ньюкестл. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при t б-10°С в течение 16-18 ч и оценивают результаты. Титром антител сыворотки считают максимальное ее разведение, которое оценивается не менее, чем на три креста.

Абсолютные величины титров антител (величина, обратная титру антител) к специфическому и контрольному антигенам складывают. Полученные величины делят на количество обследуемых лиц и получают средние величины титров антител.

В дальнейшем вычисляют индивидуальные величины индексов соотношения титров антител по формуле, где в числителе произведения титра антител к специфическому антигену и среднестатистического титра антител к неспецифическому антигену, в знаменателе - произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического титра антител к специфическому антигену.

Затем эту группу обследуемых лиц вак- цинируютанатоксином и через месяц исследуют титры антител к специфическому и контрольному антигенам.

Изучают связь между исходными уровнями титра антител к бактериальным антигенам, индекса соотношения титров антител и специфическим изменением титра антител после вакцинации.

По результатам исследований выделяют две группы обследуемых: у первой группы с низким индексом определяют специфическое повышение титра антител, у второй группы с высоким индексом изменение титра антител не выявляют или отмечают специфическое снижение его величины.

Результаты исследований возможности определения индивидуального уровня специфического изменения титров антител с использованием для оценки титра антител антигенных эритроцитарных диагностику- мов различных серий отражены в ниже приведенных примерах.

Пример 1. Определение специфического изменения титра антител к дифтерийному анатоксину.

Проведены две серии исследований.

В первой серии брали кровь в количестве 0,7-1,0 мл из пальца у проживающих в городе Перми 100 обследуемых лиц в возрасте от 17 до 56 лет. Получали сыворотку и определяли в РПГА титр антител к дифтерийному анатоксину с использованием дифтерийного эритроцитарного диагностикума С. 3. активностью 1:3200, выпуска 1987 г. 11НИИЭ МЗ СССР и титр антител к антигену

шигелл Ньюкестл с применением эритроци- тарного диагностикума из этого антигена, С. 72. № 387. годн. 1988 г. ЛНИИВС.

Показано, что средняя исходная абсолютная величина титра антител к дифтерийному анатоксину у 100 обследуемых лиц составила 96 в РПГА. Однако отмечались значительные индивидуальные вариации от 1 до 1280.

Средняя исходная величина титра антител к антигену шигелл Ньюкестл у этой груп- пы обследуемых лиц равняется 145, индивидуальные колебания составляли - от 20 до 1280.

Средняя величина индекса соотношения титров антител к дифтерийному анатоксину и антигену шигелл Ньюкестл равнялась 3.00. Индивидальные вариации этого показателя колебались от 0,005 до 96,6. По величине этого показателя обследуемых лиц делили на две группы. К первой группе отнесли лиц с индексом менее 3,00, ко второй группе - 3,00 и более.

Обследуемых лиц вакцинировали вакциной АДС-М в дозе 0,5 мл С. 6-7, К 1 830, годн. 1988 г.

Как видно из таблицы, через 4 недели после введения вакцины титр антител к дифтерийному анатоксину повысился, по средним данным, в 7,72 раза. У лиц первой группы, как и ожидалось, у большинства лиц отмечается повышение титра антител к анатоксину - из 83 у 76 (92%). У лиц второй группы, наоборот, из 17 у 16 (94%) выявлено снижение титра антител к анатоксину или его величина не меняется. В целом величина индекса в сравнении с известным способом повышает точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции с 85% до 92%. Во второй серии исследований брали кровь из вены у 29 обследуемых лиц мужского пола в возрасте от 20 до 50 лет. По инструкции определяли исходный титр антител к дифтерийному анатоксину в РПГА с использованием дифтерийного эритроцитарного диагностикума С.-100, активностью 1:3200, выпуска 1987 г. ЦНИИЭ МЗ СССР и контрольному антигену шигелл Ньюкестл эритроцитарным диагностику- мом С. 37 № 695, годн. 1988 г. ЛНИИВС.

Показано, что средняя величина титра антител в РПГА у обследуемых лиц к дифтерийному анатоксину составила 10, индивидуальные величины равнялись от 1 до 80. Средняя исходная величина титра антител к антигену шигелл Ньюкестл у этих обследуемых составила 50, индивидуальные вариации - от 10 до 320. Величина индекса колебалась от 0,05 до 20,0. К первой группе,

как и в первой серии, отнесли лиц с индексом менее 3,00, ко второй - 3,00 и более.

Обследуемых лиц вакцинировали вакциной АДС-М в дозе 0,5 мл серии 6, К 2781, № 5 166, годн. 1У8У г.

Из таблицы видно, что титр антител к дифтерийному анатоксину, по средним данным, повысился в 2.1,20 раза. У лиц первой группы, как и предсказывалось, у подавляю0 щего большинства лиц отмечается специфическое повышение титра антител к анатоксину - из 27 и у 25 (93%), и только у 1 реакция не выявляется, а у 1 отмечается- специфическое снижение титра антител к

5 этому анатоксину. Следует отметить, что специфическая депрессия титра антител отмечается у обследуемого лица с очень низким индексом (0,06), что, по-видимому, связано со специфической иммунологиче0 ской толерантностью исходной активности факторов иммунитета к дифтерийному анатоксину.

И, наоборот, у обследуемых лиц второй группы с индексом 3,00 и выше, как и про5 гнозировалось, отмечается снижение титров антител или их величина не меняется.

Таким образом, по исходной величине индекса в сравнении с известным способом в этой серии точность отбора лиц для вакци0 нации против дифтерийной инфекции повышается с 86% до 93%, а с учетом обследуемого со специфической иммунологической толерантностью, % отбора повышается до 97.

5 Пример 2. Определение специфического изменения титра антител к столбняч- номуЪнатоксину.

Для исследования исходный титр антител брали кровь в количестве 4-5 мл из вены

0 у 29 мужчин в возрасте от 20 до 40 лет. По инструкции определяли исходный титр антител к столбнячному анатоксину в РПГА и использованием эритроцитарного антигенного диагностикума серии 80-200 активно5 стью 1:2560, выпуска 1987 г, ЦНИИЭ МЗ

СССР и контрольному антигену шигелл

Ньюкестл эритроцитарным диагностикумом

серии 37, 695, годн. 1988 г. ЛНИИВС.

Показано, что у обследуемых лиц сред0 няя величина титра антител к столбнячному t- анатоксину составила 87, индивидуальные вариации.- от 1 до 1280. Средняя величина & титра антител к антигену шигелл Ньюкестл равнялась 50, индивидуальные колебания 5 от 20 до 160. Индивидуальная величина индекса колебалась от 0,003 до 18,4. По величине этого показателя обследуемых лиц делили на две группы. К первой группе отнесли лиц с индексом 1,2 и менее, ко второй - выше 1,2.

Через 4 недели после вакцинации АДС- М в дозе 0,5 мл серии К 2781,.№ 166, годн. 1989 г. отмечалось, по средним данным, специфическое повышение титра антител к столбнячному анатоксину в 12,5 раза. Изменение титра антител к анатоксину носило строго специфический характер. Титр антител к антигену шигелл Ньюкестл не менялся или отмечалось несущественное колебание его величины. У лиц первой группы с низким индексом, как и прогнозировалось, у подавляющего большинства отмечается повышение титра антител к столбнячному анатоксину - из 25 лиц у 24 (96%), и только в 1 наблюдается снижение титра антител. И, наоборот, у лиц второй группы с большим индексом у всех трех обследуемых лиц изменения титра антител к столбнячному анатоксину не выявлено.

Таким образом; в этой серии исследований точность отбора лиц для вакцинации против столбнячной инфекции по величине индекса в сравнении с прототипом повышается с 93% до 97%.

Предложенный способ может быть использован и для отбора для вакцинации против других инфекций, а также изучения закономерности специфического изменения титра антител при иммунизации экспериментальных животных бактериальными антигенами.

Пример 3. Определение специфического повышения титра антител к шигеллам Зонне.

Исследования проведены с кровью 6 кроликов породы шиншилла весом около 3 кг. Животных вакцинировали антигеном шигелл Зонне подкожно в дозе 600 млн. микробных тел в 0,2 мл. До и после вакцинации определяли титры антител к специфическому антигену шигелл Зонне и контрольному антигену шигелл Ньюкестл в РПГА макровариантом ее постановки.

Показано, что, несмотря не существенные индивидуальные колебания исходных титров антител к антигенам шигелл Зонне и Ньюкестл, отмечается прямая корреляционная связь между этими величинами. Коэффициент ранговой корреляции (г) составляет +0,73 ±0,21, Р 0,05. В связи с этим индивидуальная величина индексов соотношения титров антител колеблется незначительно - от 0,32 до 2,56.

Через 1 неделю после вакцинации отмечается специфическое повышение титров антител к антигену шигелл Зонне, по средним данным, в 51 раз. Однако определяются значительные индивидуальные колебания кратности повышения его величины - от 4 до 256 раз.

Преимущества предлагаемого способа наиболее четко прослеживаются при сравнительной оценке связи между исходной величиной титра антител к антигену шигелл Зонне, индексом соотношения титров антител и уровнем специфического повышения титров антител к вводимому антигену. Установлена склонность к обратной корреляционной связи между исходным

титром антител к антигену шигелл Зонне и специфическим изменением его величины после вакцинации. Однако эта связь носит статистически недостоверный характер (г .-0.60 ±0,29, Р 0,05).

Наиболее ярко проявляется обратная корреляционная связь между исходной величиной индекса и уровнем специфического повышения титра антител к антигену шигелл Зонне (г -0,96 ± 0,04, Р 0,001). У

кролика с низким индексом (0,32) отмечается значительное повышение титров антител - в 256 раз. И, наоборот, у животных с относительно высоким индексом (1,28-2,56) наблюдается четырехкратное повышение

титра антител.

Таким образом, полученные результаты исследований убедительно подтверждают возможность и по индивидуальной исходной величине индекса проводить отбор обследуемых для вакцинации против различных инфекций.

Установлено, что для точного определе- ниярпецифического повышения титра антител до введения анатоксинов в организм по

величине индекса к специфическому и контрольному антигенам необходимо определение титров антител не менее чем у 25 обследуемых лиц. При снижении количества обследуемых точность способа снижается.

Исследования титра антител в РПГА следует проводить с использованием антигенных диагностикумов одной серии.

Для определения индивидуальной величины индекса во всех сериях исследований

изучали титр антител к антигену шигелл Ньюкестл. Этот выбор основан на литературных данных, в которыхустановлена прямая корреляционная связь между исходными титрами антител к антигенам этой группы микробов у

здоровых людей. Данные литературы полностью подтвердились в наших исследованиях, что позволяет сделать обоснованное заключение, что именно исходный титр антител к антигенам дизентерийной группы микробов

лучше всего отражает индивидуальный уровень неспецифической гуморальной защиты организма от микробов, участвующей в регуляции специфического изменения титра антител к анатоксинам.

Точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной ций повышается при исследовании иВход- ного титра антител у однородной группы людей: одной местности, одинакового возраста и т.д.

Преимущества предлагаемого способа в сравнении с известным прежде всего заключается в повышении точности. Предлагаемый способ по индивидуальной величине индекса в сравнении с известным повышает точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции с 85- 86% до 92-97%, а против .столбнячной инфекции с 93 до 97% в различных сериях исследований.

Следует отметить, что у небольшого количества лиц по величине индекса трудно проводить отбор лиц, подлежащих для вакцинации. Однако эти трудности связани, как правило, с лицами, индекс которых близок к пограничному - к средней его величине, что требует дополнительного прицельного исследования активности факторов иммунитета.

Отличительные особенности предлагаемого способа с известным способом иммунодиагностики инфекций отражены в таблице.

Как видно из таблицы, предлагаемый способ рекомендуется использовать преимущественно в области эпидемиологии для отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций.

..В то же время известный способ используется для иммунодиагностики инфекций. . .

Предлагаемый способ позволяет проводить отбор лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций до иммунизации анатоксинами.

При известном способе определение индекса проводится в период инфекционного процесса.

Важным преимуществом предлагаемого способа является возможность его ис- пользования для отбора лиц для вакцинации не только против дифтерийной и столбнячной, но и против других инфекций.

Применение известного способа иммунодиагностики инфекций ограничено. Этот способ невозможно использовать при ряде инфекционных заболеваний, в том числе дифтерии и столбняка. Ограничения связаны прежде всего с тем, что иммунодиагностика инфекций осуществляется по величине индекса соотношения титров антител больного, превышающий соответствующую величину здоровых доноров не

менее, чем в 4 раза. Этот диагностический критерий выведен по результатам исследований, свидетельствующих о высокой прямой корреляционной связи между

исходными титрами антител у здоровых лиц к антигенам дизентерийной труппы микробов, сальмонелл, кишечной палочки и стафи- лакокков. В связи с этим индекс здоровых доноров не превышает величину, равную 4.

Однако в наших исследованиях не уста- новленапрямая корреляционная связь между титрами антител к дифтерийному, столбнячному анатоксинам и антигенам дизентерийной группы микробов. Как былоотмечено, у здоровых лиц до их; вакцинации определяются значительные индивидуальные колебания величины индекса к дифтерийному анатоксину и антигену шигелл Ньюкестл от 0,005 до 96,6; к столбнячному

анатоксину и антигену шигелл Ньюкестл от 0,003 до 18,4. Индивидуальные вариации ве личины индекса до вакцинации, по-видимому, связаны с массовой активной профилактикой дифтерии и столбняка. В

связи с этим по величине индекса иммунодиагностика этих инфекций невозможна. И, наоборот, в предлагаемом способе индекс позволяет проводить отбор лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной

инфекций.

Таким образом, определяемые в предлагаемом способе конкретные исходные величины индексов, позволяющие проводить, отбор лиц для вакцинации анатоксинами не

только по общему состоянию организма, оцениваемого по клинической картине, но и по уровню специфической (антитела к вводимому анатоксину) и неспецифической (ан- титела к контрольному антигену)

гуморальной защиты от бактерий конкретного организма, что позволяет индивидуализирование подходить при вакцинации.

Учитывая, что титры антител к бактериальным антигенам в РЛГА определяются с

использованием коммерческих, выпускаемых отечественной промышленностью антигенных эритроцитарных диагностикумов предлагаемый способ может быть использован для отбора лиц вакцинации против диф.терийной и столбнячной инфекций практически в любой иммунологической лаборатории.

Формула изобретения

Способ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекции, включающий определение в сыворотке крови титров антител к специфическому антигену в реакции пассивной гемагглютинации

отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, у лиц выявляют индивидуальные титры антител к спе- цифическому и неспецифическому антигенам, определяют среднестатистические титры антител к данным анти- генам с последующим вычислением индивидуального индекса в виде соотношения, где в числителе - произведение титра антител к специфическому антигену

и среднестатистического титра антител к неспецифическому антигену, а в знаменателе - произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического

титра антител к специфическому антигену, и при значении индекса менее 3,0 отбирают лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции, а при величине индекса 1.2 и менее отбирают лиц для вакцинации против Столбнячной инфекции.

Изобретение относится к медицине, а сменно к эпидемиологии, и предназначено для отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций, индивидуализированного подхода при иммунизации. Целью изобретения является повышение точности отбора лиц для вакцинации. Указанная .цель достигается путем определения в сыворотке крови титров антител к специфическому антигену в реакции пассивной гемагглютинации. Новизна способа заключается в том, что определяют у лиц индивидуальные титры антител в сыворотке крови к специфическому и неспецифическому антигенам, а также среднестатические титры антител к данным антигенам с последующим вычислением индивидуального индекса в виде соотношения, где в числителе - произведение титра антител к специфическому антигену и сред- нестатического титра антител к неспецифическому антигену, а в знаменателе - произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического титра антител к специфическому антигену, и при значении индекса менее 3,0 отбирают лиц для вакцинации против дифтерийной, а при величине 1,2 и менее-против столбнячной инфекций. Предлагаемый способ по величине индекса в сравнении с прототипом повышает точность определения индивидуального уровня специфического изменения титра антител к анатоксинам до вакцинации с 85-86% до 92-97%. 1 табл.

Признак

Предлагаемый

Область применения

Сроки исследования озможности использования

В эпидемиологии для отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной

инфекций До вакцинации

При вакцинации практически любым бактериальным антигеном

Известный

В клинике инфекционных заболеваний для иммунодиагностики инфекций

В период инфекционного

процесса

Ограничено при ряде инфекций, в том числе при дифтерии и столбняке ,