Способ отбора лиц для вакцинации против бактериальных инфекций Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

специфическое изменение фагоцитоза в первые 1-2 ч и через неделю после вакцинации бактериальным антигеном.

Доза вводимых бактериальных антигенов и сроки исследования специфического изменения фагоцитоза после вакцинации применены с использованием данных литературы.

Для оценки фагоцитоза к пробам добавляют по 0,1 мл 1-2 %-ной взвести эритрош/h тов диагностикумов из вводимого бактериального антигена (специфический объект фагоцитоза). Для контроля специфичности изменения фагоцитоза используют 0,1 мл 1-2 %-ной взвеси контрольных эритроцитов (неспецифический объект фагоцитоза). Пробы выдерживают при t° - 36,5-37,0° в течение 10-15 мин делают мазки, их красят по методу Романовского- Гимза. Подсчитывают количество объектов фагоцитоза в 100 полинуклеарны фагоцитах. Уровень фагоцитоза определяют по фагоцитарному числу - среднему количеству объектов фагоцитоза, фагоцитированных 1 лейкоцитом из 100.

Одномоментно с исследованием фагоцитоза определяют титр антител до и после введения бактериального антигена в РПГА по наставлению.

По уровню специфического изменения фагоцитоза ин витро обследуемых распределяют на две группы. К 1 группе относят лиц с повышением специфического повышения фагоцитарной активности лейкоцитов и титра антител, К 2-й группе распределяют лиц со снижением фагоцитоза или без изменений, вакцинация которых нецелесообразна. У этих обследуемых после иммунизации отмечают снижение активности факторов иммунитета или реакцию не определяют.

В приведенных примерах отражена динамика индивидуальной величины специфического изменения фагоцитоза и титра антител с использование заявляемого способа при вакцинации против бактериальных инфекций.

Пример 1. Определение специфического изменения фагоцитарной активности лейкоцитов к антигену шигелл Зонне.

Исследования проведены с кровью 7 кроликов весом около 3-х кг. Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов у животных из вены уха брали кровь, стабилизировали ее гепарином. К 0,1 мл крови для индукции специфического изменения фагоцитоза добавляли 0,1 Мл раствора антигена шигелл Зонне активностью 0,01 АЕ/мл в РТПГА. К контрольным пробам приливали

0,1 мл физраствора. Смесь обрабатывали при to S37,0°C в течение 45 мин.

Оценку фагоцитоза проводили с использованием 0,1 мл % взвеси эритроцитов антигенного диагностикума шигелл Зонне, неспецифического - со взвесью контрольных эритроцитов с аналогичным содержанием этих клеток. Смесь обрабатывали при t° 37°С в течение 10 мин. Уровни фагоцитоза оценивали по выше описанной методике.

Показано, что отмечаются значительные индивидуальные колебания как исходной величины фагоцитоза, так и уровня

специфического изменения фагоцитарной активности лейкоцитов ин витро под влиянием антигена: у 1-4 кролика t повышение фагоцитоза. И, наоборот 5-7 кролика отмечается специфическая депрессия фагоцитоза.

Статическая обработка результатов выявляет обратную зависимость уровня специфического изменения фагоцитоза под влиянием антигена шигелл Зонне от исходной активности лейкоцитов (коэффициент корреляции (г) - 0,95 ± 0,04, 0,01).

Результаты исследований позволяют сделать заключение, что у животных с высо ким уровнем специфического повышения

фагоцитоза ин витро и после вакцинации будет значительное усиление . его величины.

Кроликов вакцинировали подкожно взвесью шигелл Зонне с содержанием 600

млн. микробных тел в 0,20 мл физиологического раствора. Фагоцитарную активность лейкоцитов определяли в динамике через 1-2 ч после вакцинации животных,

Как видно из таблицы, как и предполагалось, у 1-4 кролика отмечается значительное специфическое повышение фагоцитоза в ранние и поздние сроки после иммунизации кроликов антигеном шигелл Зонне. У 5-6 кроликов реакция носит несущественный характер, а у 7 кроликов в 1-е часы выявлено специфическое снижение фагоцитоза. В то же время отмечается прямая кор- реляционная связь между уровнями специфического изменения активности лейкоцитов ин витро, в ранние и поздние сроки после введения шигелл Зонне в организм (г соответственно + 0,96 ± 0,03, Р 0,01 и + 0,96 ± 0,07 Р 0,01)..

Выявленные результаты в этой серии исследований подтверждают возможность определения специфического изменения фагоцитоза до введения животным антигена шигелл Зонне.

Пример 2. Определение специфического повышения фагоцитарной активности к антигену шигелл Ньюкестл.

Исследования проведены с кровью 6 кроликов. К 0,1 мл крови взятой из вены, добавляли 0,1 ммл раствора иммунных антител к антигену шигелл Ньюкестл титром в 256 в РПГА, к контрольным пробам - 0,1 мл физиологического раствора. Смесь выдерживали при,t° 36,5°C в течение 45 мин.

Для оценки уровня фагоцитарной активности лейкоцитов к пробам добавляли 0,1 мл 2 % взвеси эритроцитов антигенного диагностикума шигелл Ньюкестл. Смесь выдерживали приг° 36,5°С в течение 10 мин. Оценивали фагоцитоз.

Показано, что несмотря на значительные индивидуальные вариации исходного фагоцитоза и специфического повышения фагоцитоза под влиянием иммунных анти- тел к шигеллам Ньюкестл реакция вносит статистически достоверный характер. В то же время выявлена обратная корреляционная связь между исходными уровнями фагоцитоза и изменениями их величин после введения шигелл Ньюкестл животным (г соответственно -0,93 ± 0,06, Р 0,01).

С учетом выявленных результатов исследований обосновано предположение, что после вакцинации антигеном шигелл Нью- кестл у 1-3 кролика с высоким уровнем специфического повышения фагоцитоза ин витро будет выявлено значительное усиление его величины, а у 4-6 кролика - реакция будет носить менее существенный харак- тер.

Кроликам подкожно вводили взвеси шигелл Ньюкестл с содержанием 300 млн микробных тел в 0,1 мл физиологического раствора.

Уровни фагоцитарной активности лейкоцитов определяли в динамике через 8 дней после вакцинации животных.

У кроликов с высоким уровнем специфического повышения фагоцитоза в сравне- нии с низким ин витро под влиянием иммунных антител уровень специфического усиления фагоцитарной активности лейкоцитов после вакцинации антигеном шигелл Ньюкестл носит более яркий характер, (г - + 0,73 ± 0,21, Р 0,01).

Результаты этих исследований свидетельствуют о возможности по уровню специфического повышения фагоцитоза ин витро под влиянием иммунных антител, к вводимому антигену определить индивидуальный уровень специфического усиления фагоцитарной активности лейкоцитов до

вакцинации экспериментальных животных бактериальным антигеном.

Пример 3. Определение специфического изменения титра антител к столбнячному анатоксину.

Исследования проведены с кровью 20 здоровых мужчин в возрасте от 20 до 40 лет. До вакцинации к 0,1 мл крови, взятой из вены, добавляли 0,1 мл раствора с содержанием микродоз столбнячного антоксина, полученного путем разведения коммерческого препарата в 10000 раз физиологическим раствором. К контрольным пробам приливали 0,1 мл физиологического раствора. Пробы обрабатывали при t° 36,5°С в течение 20 мин. Для оценки фагоцитоза к смеси добавляли по 0,1 мл 1 % взвеси эритроцитов столбнячного диагностикума. Смесь выдерживали при t° 36,5°С 10 мин. Оценивали фагоцитоз. Одномоментно определяли в сыворотке титр антител к столбнячному анатоксину в РПГА.

Показано, что средняя исходная величина фагоцитоза составляет 0,72, индивидуальные вариации - от 0,38 до 1.38. Исходный средний титр к столбнячному анатоксину равняется 54, колебания его величины - от 5 до 640. В то же время не установлена прямая корреляционная связь между уровнями исходного фагоцитоза и титра антител к столбнячному анатоксину.

После взаимодействия крови ин витро со столбнячным анатоксином отмечается статистически достоверное повышение фагоцитоза к этому анатоксину.

С учетом характера изменения специфического фагоцитоза, обследуемых делили на две группы: к группе 1 отнесли - с повышением специфического фагоцитоза, ко 2 - со снижением или без изменения его величины.

Обследуемых лиц вакцинировал вакциной АДС-М в дозе 0,5 мл.

Уровень специфического изменения титра антител определяли по кратности изменения его величины к столбнячному анатоксину в РПГА через 4 недели после вакцинации.

Отмечается статистически достоверное повышение титра специфических антител к анатоксину. В то же время, как и предполагалось, у лиц 1 группы отмечается значительное 20-кратное повышение титра антител; индивидуальная величина усиления колеблется от 8 до 512 раз. И только у 1 обследуемого из 15 с невысоким уровнем : повышения фагоцитоза не определяется усиления титра антител.

И, наоборот, из 5 обследуемых 2 группы только у 1 отмечается повышение титра антител к анатоксину.

Коэффициент корреляции между уровнями специфического повышения фагоцитоза ин витро под влиянием микродоз анатоксина и кратности повышения титра антител после введения всем обследуемым этого анатоксина составляет + 0,92 ± 0,03, Р 0,001.

Таким образом, полученные результаты исследований убедительно подтверждают возможность отбора лиц для вакцинации против столбнячной инфекции. В сравнении с прототипом точность определения специфического изменения титра антител до вакцинации анатоксином повышается с

использованием заявляемого способа с 45 до 90%.

Формула изобретения Способ отбора лиц для вакцинации против бактериальных инфекций путем имму- нологического исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем, выявления колебаний индивидуальной чувствительности, к

исследуемой крови добавляют специфическую вакцину или специфические иммунные антитела, инкубируют в течение 20 мин при Зб,5°С, далее вводят специфический эрит- роцитарный антигенный диагностикум, определяют фагоцитарную активность лейкоцитов и осуществляют отбор лиц для вакцинации с повышенной фагоцитарной активностью лейкоцитов.