Способ оценки лечения хронического катарального бронхита Советский патент 1990 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии внутренних болезней.

Цель изобретения - повышение точности способа и сокращение времени исследования.

На фиг. 1-5 изображено изменение активности эластазы в процессе лечения больных.

Пример 1. Больной Б., 46 лет, находился на лечении с диагнозом хронический бронхит, стадия обострения. Больной поступил на 15 сутки с начала обострения заболевания. Состояние больного характеризовалось наличием кашля с вязкой слизистой мокротой в большом количестве, одышкой при умеренной физической нагрузке. Аускульта- цией выявлено рассеянные сухие хрипы и жесткое дыхание нац всей поверхностью обоих легких. При функциональном и бронхологическом обследовании иыявлены изменения вентиляции легких по смешанному типу II степени с эндоскопической характеристикой в форме двустороннего диффузного эндобронхита II степени с преимущественным поражением нижнедолевых бронхов. Терапия проводилась антибиотиком - метацикли- ном, муколитиком-бромгексином, а также использовались методы местного лечения трахеобронхиального дерева: эндобронхиальные санации 1%-ным раствором диоксидина и инстиляиии цефа- мезином.

В ходе терапии на 1 сутки производили забор содержимого бронхов. Брон- хоальвеолярный смыв (БАС) з объеме 5 мл, полученный во время диагностической фибробронхоскопии, гомогенизировали в стеклянном гомогенизаторе при 3000 об/мин в; течение 2 мин в бане со льдом. Гомогенат центрифугируют при 7000g, 4 С в течение 15 мин. В 2 микропробирки вносили по 30 мкл надоса- дочиой жидкости и добавляли по 15 мкл ЭДТА. В 3-ю пробирку вносили 30 мкл физиологического раствора с последующим добавлением 15 мкл ЭДТА. Смесь инкубировали при 25°С в течение 15 мин После этого вносили по 135 мкл 0,2 М трис-ИС1-буфера, рН 7,8. Затем в 1-ю и 3-ю пробирки вносили по 15 мкл 0,005 М раствора п-нитрофенилового эфира Ц-третбутилоксикарбонил-Ь-ала- нина в качестве субстрата (соотношение субстрата к буферу 1:12). В пробирку вместо субстрата вносили водный раствор ацетонитрила. Смесь инкубировали в течение 15 мин при 25°С и измеряли оптическую плотность () растворов на спектрофотометре при дли не волны 400 нм. При расчете фермент- ной активности А4ОО контрольных проб вычитали из А400 опытной пробы:

I40of

А

400

оп

-( +А4оосу6 ),

где А, - оптическая плотность, соответствующая активности элас.тазы; оптическая плотность опытной пробы; А400над - оптическая плотность контрольной пробы надосадочной жидкости; A j0oeyg - оптическая плотность контрольной пробы раствора субстрата.

Найденное значение А400Ч , отражающее активность эластазы, сопоставляли с калибровочной кривой и находили количество п-нитрофенола, освобожденного за 15 мин ферментом, содержащимся в 30 мкл надосадочной жидкости. Окончательно активность эластазы вы0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

ражали в мкмолях п-нитрофенола, освобожденного в результате гидролитического расщепления субстрата ферментом, содержащимся в 1 мл надосадочной жидкости за 1 ч инкубации в пересчете на 1 мг белка. При этом также учитывали разведение в инкубационной среде.

Аналогичные заборы и определение активности эластазы проводили с интервалом в 2 дня. Полученные данные сведены в табл. 1. На основании полученных данных построили график, приведенный на фиг. 1.

Как видно из фиг. 1, увеличение активности эластазы отмечалось с 4 дня лечения с достижением максимального значения на 13-й день и с последующей нормализацией показателя к 22 дню. Время, затраченное для определения активности эластазы при однократном заборе БАС, составляло 1,5 ч. Было проведено 10 определений. Суммарное время исследования одного больного составило 15 ч.

Отмеченное кратковременное пикооб- разное увеличение активности эластазы соответствовало улучшению субъективного и объективного статуса больного с уменьшением проявлений основных клинических и эндоскопических признаков заболевания (табл. 2). При этом следует отметить, что положительная динамика в клинике больного наблюдалась начиная с 10-16 дней лечения .

Динамика выраженности основных и патологических клинических, фиэикаль- ных и эндоскопических признаков хронического бронхита при эффективном лечении приведена в табл. 2,

П р и м е р 2. Больная X., 41 год, находилась на лечении с диагнозом хронический бронхит, стадия клинических проявлений. Клиническое состояние больной характеризовалось наличием кашля с отделением большого количества слизистой мокроты, одышкой при значительной физической нагрузке. Аускуль- тацией выявлено жесткое дыхание над всей поверхностью обоих легких. При функциональном и бронхологическом обследовании отмечались изменения вентиляции легких по обструктивному типу I степени с эндоскопической характеристикой в форме двустороннего диффузного эндобронхита T-TI степени. Больная получала бисептол, бромгексин,

эндобронхиальные санации физиологическим раствором. Определение актив ности эластазы проводили аналогично примеру 1, По полученным данным построили график, изображенный на фиг При заборе содержимого бронхов выяв пено постепенное снижение уровня ак тивности эластазы (фиг. 2). Указанные изменения уровня ферментной активности подтверждались отсутствием положительной динамики в субъективном и объективном статусе больной. При этом по отдельным показателям было отмечено ухудшение состояния. Динамика выраженности основных патологических клинических, физи- кальных и эндоскопических призна-ц ков ХКБ при неэффективном лечении приведены в табл. 3.

П р и м е р 3. Больная П., 18 лет находилась на лечении с диагнозом хронический бронхит, стадия клинических проявлений. Больная поступила на 18 сутки со дня ухудшения состояния. Клинически состояние характеризовалось наличием кашля с отделением умеренного количества слизистой мокроты. Аускультацией выявлено жесткое дыхание над всей поверхностью легких. При функциональном и бронхо- логическом обследовании отмечались изменения вентиляции легких по смешанному типу I степени с эндоскопичекой характеристикой диффузного эндо- бронхита I степени. В ходе терапии больная получала бисептол, бромгек- син, эндобронхиальные санации раствором диоксидина, эндобронхиальные инстилляции кефазолом, проводили забор содержимого бронхов. Определение активности эластазы проводили аналогично примеру 1, но при рН среды 7,9 На основании полученных данных постр или график, приведенный на фиг. 3. Как видно из фиг. 3, увеличение активности эластазы отмечалось с 7-го по 10-й день от начала лечения. Отмеченное кратковременное пикообразно увеличение активности эластазы соответствовало улучшению субъективного и объективного статуса больной с уменьшением проявлений основных клинических и эндоскопических признаков заболевания. Положительная динамика по клиническим данным наблюдалась с 10-13 дня. Время, затрачиваемое для 10 измерений, соответствовало 15 ч.

2.

10

15

20

25

30

. - ,.

363166

Динамика выраженности основных паталогических клинических, физикаль- ных и эндоскопических признаков ХКБ с при эффективном лечении приведена в табл. 4.

II р и м е р 4. Больная С., 43 г., находилась на лечении с диагнозом хронический бронхит, стадия клинических проявлений. Клиническое состояние больной характеризовалось умеренно выраженной одышкой при физической нагрузке, кашлем с отделением умеренного количества слизистой мокроты повышенной вязкости, потливостью, общим недомоганием. Аускультацией выявлено жесткое дыхание над всей поверхностью легких, рассеяные грубые сухие хрипы. При функциональном и брон- хологическом обследовании отмечались изменения вентиляции легких по смешанному типу I степени с эндоскопической характеристикой в форме двустороннего типа эндобронхнта диффузного 1-11 степени с преимущественным поражением нижнедолевых бронхов.

Лечение больной проводили бисеп- толом, отхаркивающей микстурой, эн- добронхиальными санациями физиологическим раствором с инсталляциями муко- сальвацином. Определение уровня активности эластазы проводили аналогично примеру 1. Как видно из фиг. 4 и табл. 5, постепенное ухудшение состояния больной сопровождаюсь постепенным снижением уровня активности эластазы. Время проведения 10 измерений составляет 5 ч.

Динамика выраженности основных патологических клинических, физикальных и эндоскопических признаков ХКБ при неэффективном лечении приведена в табл.5.

П р и м е р 5. Больной К., 30 лет, находился на лечении с диагнозом хронический бронхит, стадия обострения. Больной поступил на 10 сутки с начала обострения заболевания. Клинически состояние больного характеризовалось наличием кашля с вязкой слизистой мокротой в большом количестве, одышкой. Аускультацией выявлено рассеянные сухие хрипы и жесткое дыхание над всей поверхностью обоих легких. При функциональном и бронхо- логическом обследовании выявлены изменения вентиляции легких по смешанному типу Истепени с эндоскопической характеристикой в форме двусторон35

40

50

55

71

него диффузного эндобронхита II степени. Больному вводили метациклин муколитик-бромгексин, а также про- , водили эндобронхиальные санации раствором диоксидина и инсталляции цефа лизином. В ходе терапии на 1 сутки производили забор содержимого бронхов . Определение активности эластазы проводили аналогично примеру I, но при рН среды 6,5. На основании полученных данных построили график, приведенный на фиг. 5. Отмечалось кратковременное пикообразное увеличение активности эластазы, соответствующее улучшению субъективного и объективного статуса больного. Время экспзиции инкубационной смеси при одном определении составило 30 мин при рН 6,5 вместо 15 мин при рН 7,7 для достижения одинакового уровня гидролиза субстрата. Таким образом, время, затраченное на одно определение составило 1 ч 45 мин. Суммарное время исследования одного больного (10 исследований) соответственно увеличилось на 2,5 ч по сравнению с оптималным режимом, но все же ниже, чем в прототипе.

Таким образом, предложенный способ оценки лечения хронического катарального бронхита (ХБК) позволяет с высокой точностью (100%) и скоростью определить эффективность лечения больных ХКБ.

Предложенным методом проведено исследование активности эластазы у 22 больных ХКБ. Исследования проводили в динамике у каждого больного с забором материала от 7 до 10 раз с интервалом 2 дня до, в течение и пос де лечения.

13 (59%) больных ХКБ находилось до лечения в стадии обострения, у 9 (41%) больных выявлены умеренные клинические проявления заболевания. Таким образом, все обследованные больные

5

6316

0

5

8

тупили в период большей или меньшей степени активности ХКБ, имея до начала исследования и лечения длительность обострения от 1,5 до 3 недель.

Терапия проводилась антибиотиками (метациклин, олететрин, ампицилин, це- фамезин), муколитиками (бромгексин, мукалтин); широко использовались методы местного лечения трахеобронхиаль- ного дерева - эндобронхиальные санации и инстиляции цефамеэином, фурадо- нином, диоксидином.

У 17 больных наблюдалось эффективное лечение, что подтверждалось кратковременным пикообразным увеличением активности эластазы в интервале с 4- го по 13-й день с начала лечения. Как видно из графика, найденные средние значения М±т для начала лечения составили 4,75+1,36; для пикообразного увеличения - 68,,32; для окончания лечения - 11,0+3,48. Таким образом, уровень пикообразного увеличения активности эластазы достоверно отличается (,OOl) от исходного и коне-чно- го уровней фермента в процессе лечения.

Зо Формула изобретения

5

0

5

Способ оценки лечения хронического катарального бронхита путем забора бронхоальвеолярного смыва с последующим его исследованием, о т л и ч а ю- щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способам сокращения времени исследования, в процессе курса лечения определяют активность эластазы при рН 7,7-7,9 и соотношении субстрат: буфер 1:2 и при повышении ее уровня с 4 по 13 день относительно исходного в 4-17 раз с последующим постепенным снижением с 14 дня до исходного уровня оценивают лечение как эффективное, а при снижении ее уровня в 1,5-2,0 раза относительно исходного оценивают лечение как неэффективное.

1536316

Ш Таблица 1

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии внутренних болезней. Целью изобретения является повышение точности и сокращение времени исследования. Для этого у больного проводят забор содержимого бронхов в течение всего курса лечения с интервалом в 2 дня. Затем в бронхоальвеолярном смыве определяют активность эластазы при PH среды 7,7-7,9 и соотношении субстрата к буферу, равном 1:12. Активность эластазы выражают в микромолях п-нитрофенола, освобожденного в результате гидролитического расщепления субстрата ферментом, содержащимся в 1 мл надосадочной жидкости за 1 ч инкубации в пересчете на 1 мг белка. При этом также учитывают разведение в инкубационной среде. При повышении уровня эластазы с 4 по 13 день относительно исходного в 4-17 раз с последующим постепенным снижением с 14 дня до исходного уровня оценивают лечение как эффективное, а при снижении ее уровня в 1,5-2,0 раза относительно исходного оценивают лечение как неэффективное. Предлагаемый способ позволяет сократить время оценки лечения больных хроническим катаральным бронхитом с 40 до 15 ч, а также повысить точность оценки до

Расчет активности эластазы

гКоэффициент 858 включает разведение в пробирке 6,5 раз; пересчет на 1 мл экстракта к33 раза; пересчет на 1 ч инкубации л 4 раза.

Кашель .

Количество мокроты

Одышка

Физикальные данные (аускультация) .

Эндоскопия (выраженность эн- добронхита) .

+ +

+ + + + ++ +

+ + + + ++ +

+ +

+ + + ++ +

Примечание.

+ -уменьшение выраженности признаков (положительная динамика); и .- отсутствие динамики.

Таблица2

+ +

+ + + + ++ +

+ + + + ++ +

+ +

11153631612

ТаблицаЗ

Признаки

Дни лечения

1 1 4 Г 7 (10 | 13 Мб ||9 22 I 25 28

Кашель

Количество мокроты

Одышка,

Физикальные данные (аускульта - ция)

Эндоскопия (выраженность эндо- бронхита).

Примечание.

- - увеличение выраженности признаков;

, - отсутствие динамики.

Признаки

Дни лечения

1 Г 4 Т 7 1 10 ИЗ 16 I 19 22 25 28

Кашель..++ + + + + +

Количество

мокроты....++++++

Одышка.. -..+ + + + +

Физикальные данные (аускульта- . . .+ + + + + ция)

Эндоскопия (выраженность эндо- бронхита) . . . + + + + +

.««..« ««, в «и ««.«в.в - .-.--.-- .- - ,.-- - - - - -- - - -- - - -

Примечание.

+ - уменьшение выраженности признаков, положительная динамика;

-. - отсутствие динамики.

Таблица4

13

Одышка

Физикальные данные (аускуль- тация)

Эндоскопия (выраженность эндо- бронхита).

Примечание.

- - увеличение выраженности признаков;

и it

90- 60 10 60

отсутствие

I50

Ч

Г

го

1,

f Ц 1 10 К Ъ 19 П К 28 51 Дм

Фм.1

1536316

14 Таблица5

ntf SI И Ы 91 tl Ql I b I

ttJL

S

I

|

1

«a Ц

I

°i

T

01 $ J

OS %

Oh

.QЈ

S

9iЈ9e&i

it

50 W 30

W ч

Ю

so

Ј 9.

И

W 9

W 13 IS f9 tt 2f IS 4

Фиг. Ч