Способ получения личинок II возраста НYроDеRма воVIS De GeeR Советский патент 1990 года по МПК A01K67/00 

Изобретение относится к ветеринарной паразитологии и может быть исполь зовано для направленного отбора биологических и химических ларвицидов, получения личинок II возраста подкожного овода, изучения биологии и физиологии этих насекомых.

Цель изобретения - повышение выхода личинок.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Личинок собирают в январе в спинно-мозговых каналах после убоя животных. Отбирают только зрелых, т.е. личинок, содержащих в пищеварительном тракте протеолитический фермент, который легко просматривается с наружной стороны личинки в виде продолговатого темно-зеленого предмета, напоминающего форму личинки, только в 3-4 раза меньше ее.

При культивировании личинкам создают условия, приближенные к организму крупного рогатого скота, для чего их помещают в плотную многослойную пита- ч тельную среду, каждый слой которой отличается от предыдущего не только количественным составом, но и плотностью. $то позволяет личинкам использовать свои биологические свойства и не только самостоятельно передвигаться к поверхности культуры,но и уходить из того места, где накопилось много метаболитов, пот ому что повышенная концентрация метаболитов отрицательно влияет на жизнедеятельность ттичинок.Температура в термостате должна быть

ел

I

о

315

3/,5-39,, т.е. нормальная температура тела крупного рогатого скота.

10 зрелых личинок 1 возраста извлекают из спинно-мозговых каналов у крупного рогатого скота после убоя. Обмывают раствором стрептомицина с температурой 30°С и рН 7,2 и помещают на дно цилиндра, высота которого 24 см, а диаметр 25 мм. Затем налива- ют 20 мл (примерный объем занимаемый 10 личинками в эпидуральном жире) питательной среды с температурой и рН 7,2 - первый слой, состоящий из следующих компонентов, мас.%: агар 0,65; среда 199-85,85$ инактивирован- ная сыворотка крови крупного рогатого скота 13,5.

Цилиндр с личинками и питательной средой оставляют при комнатной темпе- ратуре на 2 ч. После того, как питательная среда затвердеет, осторожно наслаивают на ее первый слой, наливая по стенке цилиндра, второй слой 10 мл 16,5 см или примерная длина пути ли- чинки из спинно-мозгового канала до мышц, питательной среды с температурой 30°С и рН 7,2, состоящий из следующих компонентов, мас.%: агар 1,05, среда 199-85,45; инактивировэнная сыворотка крови крупного рогатого скота 13,5. Цилиндр с личинками и питательной средой оставляют при комнатной температуре на 2 ч. После того, как питательная среда затвердеет, осторожно наслаивают на второй слой, напивая по стенке цилиндра третий слой 10 мл или 1,2 см примерная длина пути личинки от мышц до поверхности |Кожи, питательной среды с температурой 30°С и рН 7,2, состоящей из следующих компонентов, мас.%: агар 1,65{ среда 199-81,85, инактивирован- ная сыворотка крови крупного рогатого скота 16,5. Цилиндр с личинками и питательной средой оставляют при комнатной температуре на 2 ч. После затвердевания питательной среды на третий слой наслаивают 2 мл вазелинового масла для предупреждения проникновения микрофлоры и высыхания среды и помещают в термостат при 38,5°С. Ежедневно визуально просматривают личинок, находящихся в цилиндре, и на 38 день обнаруживают, что

часть личинок почти подошли к поверх ности питательной среды. Вазелиновое масло осторожно отсасывают пипеткой, поверхность питательной среды высуши5

«л

п 25 ,0 ., 50

55

104

вают фильтровальной бумагой и увлажняют раствором стрептомицина. Еще через два дня на поверхности питательной среды выходят 5 личинок, спустя 10 дней - еще 4 личинки. Еще через 10 дней вышедшие 9 личинок переходят во II возраст. Выплод их составляет 90%.

Пример2. 10 зрелых личинок I возраста H.bovis извлекают из спиннотмозговых каналов у крупного рогатого скота после убоя, обмывают раствором стрептомицина с температурой 30 С и рН 7,2 и помещают на дно цилиндра, высота которого 24 см, диаметр 25 мм. Затем наливают 20 мл питательной среды (первый слой) с температурой 30°С и рН 7,2, состоящий из следующих компонентов, мас.%: агар 0,5; среда 199-87,5} инактивн- рованная сыворотка крови крупного рогатого скота 12. Цилиндр с личинками и питательной средой оставляют при комнатной температуре на 2 ч.После того, как питательная среда затвердеет, осторожно наслаивают на ее первый слой,наливая по стенке цилиндра второй слой (100 мл) питательной ере- . ды с температурой 30°С и рН 7,2, состоящий из следующих компонентов мас.%: агар 0,9; среда 199-87,1; ин- активированная сыворотка крови крупного рогатого скота 12. Цилиндр с личинками и питательной средой оставляют при комнатной температуре на 2ч. После того, как питательная среда затвердеет, осторожно наслаивают на второй слой, наливая по стенке цилиндра третий слой (10 мл) питательной среды с температурой 30 С и рН 7,2, состоящий из следующих компонентов, мас.%: агар - 1,5; среда 199- 83,5j инактивированная сыворотка крови крупного рогатого скота 15. Ци- линдр с личинками и питательной средой оставляют при комнтаной температуре на 2 ч. После затвердевания питательной среды на третий слой наливают 2 мл вазелинового масла и помещают в термостат при 37,5°С. Ежедневно визуально просматривают личинок, находящихся в центре, и на 38-й день обнаруживают, что часть личинок почти подошли к поверхности питательной среды. Вазелиновое масло осторожно отсасывают пипеткой, поверхность питательной среды высушивают фильтровальной бумагой и увлажняют раство51556610

ром стрептомицина. Еще через два дня ния выхода личинок,

сосуда, последовател живают до затвердени ды следующего состав Агар

на поверхность питательной среды выходит 3 личинки, спустя 10 дней - еще 6 личинок. Еще через 10 дней из вышедших 9 личинок 7 переходят во II возраст. Выплод их составляет 70%.

Применение предлагаемого метода позволяет выращивать личинок в условиях, приближенных к организму животного, в плотной.питательной среде, увеличить выплод личинок II возраста с единичных до 90%.

Формула изобретения

Способ получения личинок II возраста Hypoderma bovis de Сбег, включающий приготовление жидкой питательной среды, внесение ее в сосуд для культивирования с последующим помещением в него личинок I возраста и инкубированием в термостате, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода личинок,

5

помещают на лно сосуда, последовательно вносят и выдерживают до затвердения питательные среды следующего состава, мас.%: Агар0,5-0,8

Среда 199 84,2-87,5 Инактивированная сыворотка крови крупного рогатого скота12-15

Агар0,9-1,2

Среда 199 83,8-87,1 Инактивированная сыворотка крови крупного рогатого скота

Агар

Среда 199 Инактивированная сыворотка крови крупного рогатого скота

12-15

1,5-1,8

80,2-83,5

15-18

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к ветеринарной паразитологии. Целью изобретения является повышение выхода личинок (Л). При культивировании Л им создают условия, приближенные к организму крупного рогатого скота. Л помещают в трехслойную плотную питательную среду и содержат в термостате при 37,5-39,5°С. Это позволяет увеличить выплод личинок до 70-90%.