Способ выделения гликозаминогликанов из мочи Советский патент 1990 года по МПК A61K31/716 G01N33/50 

Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для косвенной оценки степени тяжести тканевых повреждений при различных заболеваниях путем количественного определения выделенных и очищенных гликозаминогликанов (ГАГ) мочи.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта за счет более полного осаждения ГАГ.

Способ осуществляют следующим образом.

Кислотно-щелочное состояние мочи кор- регируют, доводя до значения рН 6,0-6,5, при котором происходит максимальное осаждение ГАГ.

1 объем мочи смешивают с 1,6 объемами 96° этанола и оставляют при температуре +4°С на срок не менее 6 ч для образования осадка. Сформировавшийся хлопьевидный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. Осадок растворяют в 1-3 М водном растворе хлористого натрия, ГАГ переходят в раствор,

нерастворившиеся частицы удаляют с помощью центрифугирования или фильтрования через среднепористый фильтр

Для вторичного осаждения ГАГ к 1 объему центрифугата или фильтрата, содержащего ГАГ, прибавляют 1,6 объема 96° этанола, смешивают и оставляют не менее чем на 6 ч при температуре +4°С для формирования осадка Осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. Определяют в осадке ТАГ по концентрации входящих в их состав углеводов или изучают их качественный состав.

Пример 1 При исследовании суточной мочи здорового человека из 1050 мл отобрали 20 мл, измерили рН, составивший 6,0 5 мл мочи смешали с 8 мл 96° этанола, оставили при +4°С На 6 ч Осадок отделили центрифугированием при 3000 об/мин на обычной лабораторной центрифуге в течение 30 мин. Осадок растворили в 4 мл 3 М водного раствора хлорида натрия Нерастворенные частицы удалили с поСПСД

О5 С&

ч

00

мощью фильтрования через среднепористый фильтр. К 2 мл фильтрата добавили 3,2 мл 96° этанола, смешали и оставили при +4°С на 18 ч. Образовавшийся осадок отделили центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. В осадке определили содержание входящих в состав ГАГ уроновых кислот карбазоловым способом. Пересчитали содержание уроновых кислот в ГАГ на всю суточную мочу, которое составило 2,2 мг. (При определении содержания ГАГ в моче известным способом оказалось 2,0 мг, т. е. выход по предлагаемому способу выше на 10%).

Пример 2. Больному с .переломом левой голени проведено исследование мочи предлагаемым способом. Из 1400 мл суточной мочи отобрали 20 мл, измерили рН, составивший 5, 7, добавлением 1 н раствора едкого натра и 1 н раствором соляной кислоты довели рН мочи до 6,2. Вся дальнейшая процедура выделения ГАГ проводилась по примеру 1, за исключением того, что осадок ГАГ растворяли в 4 мл 1 М водного раствора хлорида натрия и нерастворимые частицы удаляли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин. За сутки выделено больным 4,3 мг. (При определении содержания ГАГ в моче известным способом оказалось 3,7 мг, выход по сравнению с прототипом выше на 16%).

Пример 3. При исследовании суточной мочи больного с переломом бедра из 1000 мл мочи отобрали 20 мл, измерили рН, который составил 6,5. Вся дальнейшая процедура выделения ГАГ проводилась по примеру 1. Осадок ГАГ растворяли в 4 мл 2 М водного раствора хлорида натрия. За сутки выделено больным 5,4 мг. (При определении содержания ГАГ в моче известным способом оказалось 4,9 мг, т. е. выход повышен на 10%).

Предлагаемый способ выделения ГАГ из мочи позволяет более полно получить целевой продукт (выход ГАГ повышается на 10-15%), ускорить и упростить процедуру

выделения ГАГ. Кроме того, в предлагаемом способе не используются дефицитные реактивы, в частности цетил пиридин и йхлорид и цетилтриметиламмонийбромид.

Разработанный способ выделения ГАГ

из мочи позволяет проводить исследования количественного содержания ГАГ, их состава в моче человека и животных.

Формула изобретения

Способ выделения гликозаминогликанов из мочи путем коррекции рН образца осаждения гликозаминогликанов органическим соединением, выдерживания на холоде, отделения осадка, растворения осадка в водном

растворе соли, повторного осаждения этанолом, выдерживания на холоде и отделения целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого npot дукта, рН в образце мочи устанавливают 6,0-6,5, первое осаждение проводят добавлением этанола в конечной концентрации 60%, выдерживают смесь не менее 6 ч, а растворение осадка осуществляют в 1-3 М водном растворе хлорида натрия.

Изобретение относится к клинической биохимии и может быть использовано для косвенной оценки степени тяжести тканевых повреждений путем количественного определения очищенных гликозаминогликанов, выделенных из мочи. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта за счет более полного осаждения гликозаминогликанов. Образец мочи доводят до PH 6,0-6,5, обрабатывают этанолом в конечной концентрации 60%, выдерживают не менее 6 ч, определяют осадок, растворяют в 1-3 М водном растворе хлорида натрия и повторно обрабатывают этанолом. Способ позволяет повысить на 10-15% выход гликозаминогликанов и обеспечивает упрощение и ускорение выделения гликозаминогликанов. Способ можно использовать как диагностический тест для косвенной оценки степени тяжести повреждения соединительной ткани при различных заболеваниях.