Способ иммунодиагностики посттравматического увеита Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано при лечении воспалительных осложнений травм глаза.

Целью изобретения является ранняя диагностика посттравматического увеи- та путем его доклинического выявления на 2 - 6-й день после травмы.

Способ осуществляется следующим образом.

Из вены в асептических условиях берут 5-6 мл крови в пробирку, добавляют 1,5 мл антикоагулянта и 0,6- 0$7 мл желатины. Помещают в термостат при 37 С на 2 ч. Надосадочную жидкость, содержащую лейкоциты, центрифугируют в течение 10 мин при 200g., затем центрифугируют трижды по 5 мин с раствором Хенкса также при 200g. Клетки лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева, концентрация доводится средой 199 до 2«10 /мл, ресуспендируют в 0,1 мл 0,2%-ного раствора агарозы. Микрошприцом смесь раскапывают по 0,002 мл в лунки планшеты. После затвердевания капель в течение 3-5 мин при комнатной Температуре добавляют по 0,1 мл среды 199, содержащей 10% сыворотки группы АВ (IV) и по 100 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина, и добавпяют 0,01 мл антигена, приготовленного из сосудистой оболочки. В контрольную лунку вносится среда без антигена. Планшет помещают в термостат при 37°С на 18-20 ч. Площадь миграции регистрируют з проекдаонном аппарате. Измеряют диаметры зон и результаты считывают по формуле (индекс ингибиции миграции):

СП

3

00

&

Средняя площадь миграции с антигеном 1ПП

Ш1- 1UU

Средняя площадь миграции без антигена

Способ относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использован при лечении воспалительных осложнений травм глаза. Цель способа - ранняя доклиническая диагностика посттравматического увеита. Для этого проводят реакцию ингибиции миграции лейкоцитов с кровью больного в среде 0,2%-ной агарозы, а в качестве антигена используют очищенный белок сосудистой оболочки глаза. При соотношении 4^.10⁵ лейкоцитов на 10 мкг белка антигена и индексе миграции лейкоцитов 48-86% диагносцируют посттравматический увеит.

1 } d2 шп

nT X

где П, D.J, . - соответствующие

диаметры наружных эллипсов;

Ц, dq, гЦ, сЦ - соответствующие диаметры внутренних эллипсов. Для проведения исследований антиг гн сосудистой оболочки, используемый в реакции ингибиции миграции лейко- (PHF-ffl), готовят следующим обра- зЬм: сосудистую оболочку выделяют из глаз погибших недоношенных детей. Производят дезинтеграцию с кремниевым песком (в присутствии трис-НС1-буфе- ра РН-7,2) в фарфоровой ступке в течение 1-2 мин. Затем гомогенат под- |вергают ультразвуковой обработке при 40-60 Вт в течение 30-40 мин и центрифугируют в течение 20 мин при 15- 20 тыс. g. Проводят осаждение белков 3 надосадочной жидкости с помощью раствора сульфата аммония (конечная Концентрация 50%) при 4°С, центрифу- г|ируют в течение 30-40 мин при 15- 2JO тыс. g, осадок разводят в растворе трис-НС1-буфера РН-7,2 до концентрации 0,5-0,7 мг/мл белка. Проводят

15

20

25

30

35

товке антигена гомогенизация со сте рильным песком осуществлялась в сту ке в течение 1 мин, а ультразвукова обработка при 60 Вт в течение 30 ми Индекс миграции 78,2%. Поставлен ди ноз доклинической стадии ПУ и начат противовоспалительная терапия. Несмотря на лечение через неделю при повторном определении РИИЛ выявлены еще более низкие данные индекса миг рации - 72,6%, а через неделю -70,1 Выписан на 32-й день с остротой зре ния правого глаза 0,005 эксцентричн

Пример 2. Больной О., 30 лет, поступил в глазное отделение с проникающим роговично-склеральным ранением правого глаза и выпадением радужки. Острота зрения справа 0,1 коррекции нет, слева - 1,0. ВГД спр ва Т, . В тот же день сделана микро хирургическая обработка раны с впра лением радужки. На второй день сделано определение РШ1Л, результат - отрицательный. На 5-й день иммуноло гическое исследование повторено, от мечено торможение реакции лейкоцито до 82,3%, на 7-й день - до 72%. При подготовке антигена в данном случае гомогенизация со стерильным песком осуществлялась в ступке в течение

40

45

;роматографию методом гельфильтрации. 2 мин, ультразвуковая обработка при обирают фракции, контролируя в них Содержание белка с помощью спектрофотометра при максимуме поглощения оп- уической плотности - 280. Содержимое фракций I пика при ОП-280 составляет Полученный антиген сосудистой оболочки глаза.

При выявлении индекса ингибиции миграции лейкоцита в пределах 45-86% Ставят диагноз посттравматического увеита.

Пример 1. Больной Л., 27 лет, поступил в глазное отделение С проникающим ранением роговицы, внутриглазным инородным телом, травматической катарактой. Острота зрения справа 0,05 коррекции нет, слева - 1,0. ВГД справа - Т . В тот йсе день сделана микрохирургическая обработка раны роговицы с наложением Ивов. Внутриглазное инородное тело удалено диасклерально магнитом. На второй день сделана РИМЛ. При подго50

55

40 Вт в течение 40 мин. Поставлен диагноз доклинической стадии ПУ. Начато активное противовоспалительное лечение. Выписан на 20-й день с остротой зрения в правом глазу 0,6-0,7 ВГД - 22 мм рт.ст.

При иммунологическом обследовании 104 больных с проникающими ранениями глаз у 15 из них было выявлено сниже ние индекса РИМЛ. Своевременно проведенное противовоспалительное лечение посттравматического увеита в доклинической стадии позволило предупредить развитие его, а также тяжелы осложнений и сократить достаточно высокую остроту зрения: у 7 больных из 15 острота зрения равнялась 0,4- 1,0, у 4 больных - от 0,1 до 0,3. И только у 4 больных с посттравматическим гемофтальмом (2 чел.) и тра матической катарактой (2 чел.) зрение было снижено от 0,005 до 0,03.

0

5

0

5

0

5

товке антигена гомогенизация со стерильным песком осуществлялась в ступке в течение 1 мин, а ультразвуковая обработка при 60 Вт в течение 30 мин. Индекс миграции 78,2%. Поставлен диагноз доклинической стадии ПУ и начата противовоспалительная терапия. Несмотря на лечение через неделю при повторном определении РИИЛ выявлены еще более низкие данные индекса миграции - 72,6%, а через неделю -70,1%. Выписан на 32-й день с остротой зрения правого глаза 0,005 эксцентрично.

Пример 2. Больной О., 30 лет, поступил в глазное отделение с проникающим роговично-склеральным ранением правого глаза и выпадением радужки. Острота зрения справа 0,1 коррекции нет, слева - 1,0. ВГД справа Т, . В тот же день сделана микрохирургическая обработка раны с вправлением радужки. На второй день сделано определение РШ1Л, результат - отрицательный. На 5-й день иммунологическое исследование повторено, отмечено торможение реакции лейкоцитов до 82,3%, на 7-й день - до 72%. При подготовке антигена в данном случае гомогенизация со стерильным песком осуществлялась в ступке в течение

2 мин, ультразвуковая обработка при

0

5

2 мин, ультразвуковая обработка при

0

5

40 Вт в течение 40 мин. Поставлен диагноз доклинической стадии ПУ. Начато активное противовоспалительное лечение. Выписан на 20-й день с остротой зрения в правом глазу 0,6-0,7, ВГД - 22 мм рт.ст.

При иммунологическом обследовании 104 больных с проникающими ранениями глаз у 15 из них было выявлено снижение индекса РИМЛ. Своевременно проведенное противовоспалительное лечение посттравматического увеита в доклинической стадии позволило предупредить развитие его, а также тяжелых осложнений и сократить достаточно высокую остроту зрения: у 7 больных из 15 острота зрения равнялась 0,4- 1,0, у 4 больных - от 0,1 до 0,3. И только у 4 больных с посттравматическим гемофтальмом (2 чел.) и травматической катарактой (2 чел.) зрение было снижено от 0,005 до 0,03.

515610J96

Но ни в одном глазу не развился пост-миграции лейкоцитов, отличзю- травматический увеит.щ и и с я тем, что, с целью ранней Способ позволяет диагностироватьдоклинической диагностики, в качест- посттравматический увеит в доклини-,. ве антигена используют очищенный бе- ческой стадии на 2 - 6-н день послелок сосудистой оболочки глаза, реак- травмы.цию ингибигцш миграции лейкоцитов

проводят на второй - шестой день

Формула изобретенияпосле травмы глаза в среде 0,2%-ной

JQ агарозы, причем реакцию ведут при

.Способ иммунодиагностики посттрав-соотношении 4-Ю5 лейкоцитов на

матического увеита путем добавления 10 мкг белка антигена и при индексе

к лейкоцитам больного антигенов тканимиграции в пределах 48-86% диагносглаза и последующей оценки индексатируют посттравматический увеит.