Способ выращивания картофеля Советский патент 1990 года по МПК C12N5/00 

качестве стимулятора роста добавляг( ют в среду бактериа шную эндонуклеазу в концентрациях 60 - 90 мкг/мл.

Модифицированная среда Мурасиге- Скуга имеет следующий состав (в расчете на 1 л) сахароза 20 г; 1,65 г; KNOs 1,9 rj CaClf аНдО 0,А4 г; ,0 г; КН2Р04 0,17 г; Ма,ЭДТА 0,37 г FeS04 7Н20 0,028 г; MnS04-4HjO 0,022 г; 6,2 г; ZnS04-4H20 8,6 г; KI 0,75 г| CuS04-5H,jO 0,025 г; Na Mo04-2HiO 0,025 г; CoClj-ZH O 0,025 г; пири- доксин 1,0 иг; тиамин 0,2 мг; аскорбиновая кислота 0,2 мг; гидролизах казеина 40 мг; кинетин 0,04 мг; Л-индолилуксусная кислота 1,0 мг, феруловая кислота 0,02 мг,агар-7 г. Результаты стимулирунпдего действия учитьюают по количеству прижившихся, меристем, длине ростков и количеству .листьев на них по сравнению с контролем, выращенным на немодифицированной среде.

Полученные данные представлены в табл. 1 и 2..

Предлагаемый способ обеспечин ает .повьппение числа , прижившихся мери- ,стём в 2 - 2., 5 фаза и ускорение рос- .та в 2 - 3 раза и морфогенеза прижившихся меристем в 1,5-2 раза.

Как видно из данных табл. 1 и 2, оптимальной концентрацией в случае использования зндонуклеаз ы Serratia marcescens является концентрация в интервале 60 - 90 мкг/мл (800 - 1200 ед.акт,/мл). При данной концентрации в результате стимуляции морфогенеза происходит увеличение пр г1ЕЖи- ваемости меристем в 2 - 2,5 раза.

Использование более высоких и более низких концентраций не оказывает аналогичного действия.

Пример 1, В приготовленную среду Мурасиге-Скуга добавл:шот нуклеазу Ser. marcescens ВК1ТМБ-2379 до конечной концентрации 100 мкг/мл. Вычлененные меристемы из почек ростков картофеля сорта Лорх пересаживают на питательную среду в пробирки. Контролем служили меристемы, высаженные на среду без добавления ну леазы. Проводили наблюдение за ростом прижившихся меристем через 4ч, 10, 14 недель выращивания.

Пример 2. Приготовление контрольной и используемой в опыте питательных сред проводят аналогич

0

5

0

5

0

45

50

55

но примеру I. Конечная концентрация нуклеазы в питательной среде 10мкг/мл.

Пример 3. Приготовление контрольной и используемой в опыте питательных сред проводят аналогично примеру 1, Конечная концентрация нук- леазЫ в среде 1 мкг/мл,

П р и м е р : 4, Приготовление контрольной и используемой в опыте питательных сред проводят аналогично примеру 1, Конечная концентрация нуклеазы в питательной среде 0,1 мкг/мл.

Полученные данные по примерам 1 - 4 представлены в табл. 3,

Пример5.В приготовленную среду Мурасиге-Скуга добавляют нуклеазу Ser .marcescens ВИ-211-АТСС- -9986 до конечной концентрации 100 мкг/мл. Вычлененные меристемы из почек ростков картофеля сорта Лорх пересаживают на питательную среду в пробирки. Контролем служили меристемы, высаженные на среду без добавления нуклеазы. Проводили наблюдение за ростом прижившихся меристем через 4, 10, 14 недель выращивания,

П р и м е р 6. Приготовление контрольной, и используемой, в опыте питательных сред проводят аналогично примеру 5. Конечная концентрация нуклеазы в питательной среде 10 мкг/мл.

Пример 7. Приготовление контрольной и используемой в опыте питательных сред проводят аналогично примеру 5. Конечная концентрация нуклеазы в питательной среде 1 мкг/мл.

Пример 8. Приготовление контрольной и используемой в опыте питательных сред проводят аналогично примеру 5. Конечная концентрация нуклеазы в среде 0,1 мкг/мл.

Полученные данные по примерам 5-8 представлены в табл. 4,

Предлагаемый способ выращивания картофеля методом апикальной меристемы с использованием низких концентраций ( бак термальной, эндонуклеазы в качестве стимулятора роста и морфогенеза имеет следующие преимущества перед известными: предлагаемъй способ выращивания способствует увеличению числа прижившихся меристем в 2-2,5 раза, увеличению длины ростков картофеля в 2-3 раза и ускорению морфогенеза в i,5-2 раза у прижившихся меристем; эндонуклеаза Serratia marcescens, используемая в

качестве рострегуляторной добавки к питательной среде, является дешевым и доступным отечественным препаратом, производство которого освоено промьшшенностью; спосо.б прост, не требует специальной подготовки и может быть рекомендован по первичному секеноводству и специализированным хозяйствам по выращиванию

элитных сортов картофеля; в употребляемых концентрациях бактериальная эндонуклеаза не оказьюает мутагенI ного действия, являясь веществом белковой природы, впоследствии она

будет метабилизироваться растениями.

5853286

Формула изобретения

Способ выращивания картофеля, 5 включающий вычленение меристем и выращивание их на среде Мурасиге- Скуга с добавлением в нее стимулятора роста, отличающийся тем, что, с целью повышения приживае- 1Q мости меристем и оздоровления растений, в качестве стимулятора исполь- зуют бактериальную эндонуклеазу Serratia marcescens, которую вносят в

среду в количестве 60-90 мкг/л. 15

Изобретение относится к биотехнологии и касается выращивания меристем картофеля IN VITRO. Целью изобретения является повышение приживаемости меристем и оздоровление растений. В питательную среду, на которой выращивают меристемы, в качестве стимулятора роста и морфогенеза вносят бактериальную эндонуклеазу SERRATIA MARCESCENS. 4 табл.

Влияние эндонуклеазы S. marcescens ВИ-211-АТСС-9986 на приживаемость меристем

олет

емеовскийанний

Контроль

Эндонуклеаза

1 О мкг/мл

(300 ед.акт./мл)

Эндонуклеаза 20 мкг/мл (600 ад.акт„/мл)

Эндонуклеаза 35 мкг/мл (1050 ед.акт./мл)

Эндонуклеаза 50 мкг/мл (1500 ед.акт./мл)

Эндонуклеаза J 00 мкг/мл (3000 ед.акт./мл)

Контроль

Эндонуклеаза 10 мкг/мл (300 ед.акт./мл)

Эндонуклеаза 20 мкг/мл (600 ед.акт./мл)

Эндонуклеаза 35 мкг/мл (1050 ед.акт./мл)

Эндонуклеаза 50 мкг/мл (1500 ед.акт./мл)

Эндонуклеаза 100 мкг/мл (3000 ед.акт./мл)

Таблица 1

35

14,3

Та6лица2 Влияние эндонуклеазы S. marcescens 24 на приживаемость

Эндонуклеаза

7,5 мкг/мл (100 ед.акт„/мл)

Эндонуклеаэа (800 ед,акт./мл)

Эндонуклеаза

75 мкг/мл (1000 ед.акт./мл)

Эндонукл(газа 90 мкг/мл (1200 ед.акт./мл)

Эндонуклеаза

750 мкг/мл (10000 eд.aкт./Mo)

Кемеров- Контроль с кий

Эндонуклеаза

раншш 7,5 мкг/мл (100 ед.акт./мл)

Эндонуклеаэа

60 мкг/мл (800 ед.акт./мл)

Эндонуклеаэа

75 мкг/мл (1000 ед.акт./мл)

Эндонуклеаза

90 мкг/мл (1200-ед.акт./мл)

Эндонуклеаза

750 мкг/мл (10000 ед.акт,/мл)

Влияние нуклеазы Serratia marcesceus Б--2379 на рост прижившихся. меристем картофеля сорта Лорх

Контрольная

Эндонуклеаза

100 мкг/мл-500 ед,

ак т,

Эндонуклеаза 10 мкг/мл-500 ед.акт.

0,8010,09 100 2;8tO,35 100 4,2±0,41 100

0,9510,09 П9 3,8tO,33 135 5,tO,44 121 l,06±0,n 132 4,ltO,44 43 5,6tO,47 133

.Т«г-5о ед.ак.. ,.32tO,,2 i60 .,6tO,39 ,64 6,910,53 ,64

оТГг;:л-5 ед.ак., , . I 2tO,01, UO 4,2tO,,3,.48 UO

ТаблицаЗ

Влияние нуклеазы Serratia marcescens ВИ-2П-АТСС-9986 на рост прижившихся меристем картофеля сорта Лорх

Контрольная

Эндонуклеаэа 100 мкг/мл-3000 ед.акт.

Эндонуклеаза ,10 мкг/мл-300 ед.акт.

Эндонуклеаза J мкг/мл - 30 ед.акт.

Эндонуклеаза О,1 мкг/мл - 3 ед.акт.

0,80+0,09 100 2,8tO,35 100 4,2+0,41 100

0,9010,08 1.12 3,410,33 121 5,2+0,39 125

I,00t0,10 125 3,8tO,42 138 5,6±0,44 133

I,12t0,n 140 4,1±0,35 143 5,9±0,38 140

0,95±0,09 119 3,5±0,37 125 5,110,38 121

1585328

10 Таблица 4