Способ клонального микроразмножения полыни лимонной Советский патент 1992 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам клонального микроразмножения растений, и может быть использовано для ускоренного получения генетически однородного посадочного материала полыни лимонной.

Известен способ размножения полыни лимонной обычным черенкованием растения и дальнейшего укоренения черенков.

Однако этот способ не обеспечивает достаточного количества здорового посадочного материала.

Известен также способ клонального микрочеренкования полыни зонтичной. Этот способ заключается в вычленении почечной меристемы, высаживании ее на агаризованную питательную среду Мурасиге- Скуга, культивировании до получения побегов, перенос их на свежую среду Мурасиге-Скуга и культивировании до получения растений-регенерантов, микрочеренковании и пересадке черенков на питательную среду для получения пазушных побегов, которые затем черенкуют и культивируют на питательной среде без стимуляторов для укоренения.

Недостатком этого способа является невысокий выход посадочного материала.

Цель изобретения - увеличение выхода посадочного материала.

XJ СО

ел

Поставленная цель достигается путем клональногр микроразмножения полыни лимонной, включающем вычленение почечной меристемы, высаживание ее на ага- ризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, культивирование до получения побегов, перенос их на свежую среду Мурасиге-Скуга и культивирование до получения растений-регенерантов, микрочеренкование и пересадку черенков на питательную среду для получения пазушных побегов, которые затем черенкуют и культивируют на питательной среде без стимуляторов для укоренения, причем высаживание почечной меристемы осуществляют на агаризованную среду Мурасиге-Скуга, содержащую, мг/л: кинетин 0,4 - 0,6; гибберелловая кислота 1,9 - 2,1; аде- нин 40 - 42; активированный уголь 5000 - 10000. Полученные побеги переносят на свежую среду Мурасиге-Скуга, содержащую дополнительно, мг/л: кинетин 0,03 - 0,05; ферруловая кислота 0,01 -0,3; индо- лилуксусная кислота 0,9 -1,1; активированный уголь 5000 - 10000, а после микрочеренкования черенки пересаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую, мг/л; кинетин 0,04 - 0,06; индо- лилуксусная кислота 0,9 - 1,1.

Прим ер 1 (по прототипу). Из стерилизованного побега полыни лимонной высотой 8-iO см вычленяют почечные меристемы, состоящие из конуса нарастания и двух .листовых примордиев, которые высаживают на агаризованную среду, состоящую, мг/л: МЩМОз 1650; КМОз 1900; CaC 2-2H20140;MgS04-7H20370;KH2P04 170; НзВОз 6,2; MnSOr 4H20 22,3; CoCI- 6H2.0 0,025; CuSCk 5Н20 0,025; ZnS04 5Й20 0,01; Na2Mo04 -2H20 0,25; KJ 0,83; FeSCM 7H20 27,8; Ма2ЭДТА- 2Н20 37,3; сахароза 20000. Меристемы культивируют при 25°С, относительной влажности воздуха 70%, освещенности 5000 лк, на фотопериоде в течение 16 ч до развития побегов высотой 0,5 - 0,8 см, которые переносят на свежую среду приведенного состава. Побеги культивируют в тех же условиях до получения растений-регенерантов высотой 10-12 см, которые микрочеренкуют и пересаживают на такую же свежую питательную среду. После образования пазушных побегов их культивируют на такой же свежей питательной среде без стимуляторов и укореняют,

Результаты представлены в таблице.

П р и м е р 2. Из стерилизованного побега полыни лимонной высотой 8 - 10 см вычленяют апикальные и пазушные почечные меристемы/состоящие из конуса нарастания и двух листовых примордиев, Затем их высаживают на агаризованную питательную среду, содержащую мг/л: 1650;

КМОз 1900; -2Н20140; MgSC-4 -7Н20 370; КН2Р04 170- НзВОз 6,2; MnS04 4H20 22,3; CaCI2- 6H20 0,025; CuSCV 5Н20 0,025; ZnS04 5Н.20 0,01; Na2Mo04 2H20 0,25; KJ 0,83; FeS04 -7H2027,8; Na2 -7ДТА 2Н2037,3; фо0 лиевая кислота 0,5; рибофлавин 0,2; биотин 1,0; пантотенат кальция 1,0; пиридоксин 1,0; тиамин 1,0; никотиновая кислота 2,0; циан- кобаламин 0,0015; холинхлорид 1,0; кинетин 0,4; гибберелловая кислота 1,9; аденин

5 40; сахароза 9000; активированный древесный уголь 5000; агар-агар 7000. Меристемы культивируют при 25°С, относительной влажности воздуха 70%, освещенности 5000 лк, на фотопериоде 16 ч до развития побегов

0 высотой 0,5-0,8 см, которые микрочеренкуют, переносят питательную среду следующего состава, мг/л: МЩМОз 1650; КМОз 1900; СаС12 2Н20 140; МдЗСм -7Н20 370; КН2РСм 170; НзВОз- 6,2; MnS04 4H20 22,3; CoCI25 6Н20 0,025; CuS04 5Н20 0.025; ZnS04 5Н20 0,01; Na2MoQ4- 2H20 0,25; KJ 0,83; FeS04 7Н20 27,8; Na2 ЭДТА -2H20 37,3; тиамин-НС 0,1, пиридоксин-НСО,5; никотиновая кислота 0,5; глицин 2,0; кинетин 0,03; ферруловая

0 кислота 0,01; индолилуксусная кислота 0,9; активированный уголь 5000; сахароза 10000; агар-агар 6000. Побеги культивируют до получения растений-регенерантов высотой 10-12 см, которые микрочеренкуют и

5 высаживают в среду следующего состава, мг/л: NH4N03 1650; КМОз 1900; CaCl2- 2H20 140; MgS04- 7H20 370; КН2Р04 170; НзВОз 6,2; MnSU4 -4H20 22,3; CoCI2- 6Н20 0,025; CuS04 5H20 0,025; ZnS04 5H20 0,01;

0 Na2Mo04 -2Н20 0,25; KJ 0,83; FeS04 -7H20 27,8; Na2 ЭДТА -2Н20 37,3; тиамин-НС 0,1; пиридоксин-НС 0,5; никотиновая кислота 0,5; глицин 2,0; кинетин 0,04; индолилуксусная кислота 0,9; сахароза 10000; агар-агар 6000. После образования пазушных побегов их культивируют на питательной среде Мурасиге-Скуга без стимуляторов и укореняют, Результаты представлены в таблице. ПримерЗ. Вычленение и высаживание

0 почечной меристемы проводят аналогично примеру 2. Однако питательная среда для культивирования побегов содержит мг/л: кинетин 0,6; гибберелловая кислота 2,1; аденин 42; активированный уголь 10000.

Полученные побеги переносят на свежую среду, которая отличается от аналогичной среды примера 2 содержанием, мг/л: кинетин 0,05; ферруловая кислота 0,03; индолилуксусная кислота 1,1; активированный

5

уголь 100000. Побеги культивируют до получения растений-регенерантов, которые микрочеренкуют и высаживают в среду, аналогичную примеру 2, но содержащую кинетин 0,06 мг/л и индолилуксусную кислоту 1,1 мг/л.

Культивирование пазушных побегов, их укоренение проводят аналогично примеру 2.

П р и м е р 4. Вычленение и высаживание почечных меристем фроводят как в примере 2. Однако питательная среда для культивирования меристем содержит, мг/л: кинетин 0,5; гибберреловая кислота 2,0; аденин 41; активированный уголь 7000.

Полученные побеги переносят на свежую среду, которая отличается от аналогичную среды по примеру 2 содержанием, мг/л: кинетин 0,04; ферруловая кислота 0,02; индолилуксусная кислота 1,0; активированный уголь 8000.

Побеги культивируют до получения растений-регенерантов, которые микрочеренкуют и высаживают в среду, аналогично примеру 2, но содержащую кинетин 0,05 и индолилуксусную кислоту 1,0 мг/л, Культивирование пазушных побегов и их укоренение проводят аналогично примеру 2,

Сравнение количества посадочного материала, полученного по способу клональ- ного микроразмножения с использованием питательных сред Мурасиге-Скуга с гормональными добавками и без них,

Результаты, приведенные в таблице, показывают, что по сравнению со способом-прототипом предлагаемый способ обеспечивает прирост посадочного материала в 7-8 раз больше.

Преимуществом предлагаемого способа является также ft то, что им можно получать растения круглый год независимо от времени года, занимая при этом небольшие площади,

Предлагаемым способом получают здоровый, генетически однородный посадочный материал.

Формула изобретения

Способ клонального микроразмножения полыни лимонной, включающий вычленение почечной меристемы, высаживание ее на агаризованную питательную среду Му- расиге - Скуга, культивирование до получения побегов, перенос их на свежую среду Мурасиге-Скуга и культивирование до получения растений-регенерантов, микрочеренкование и пересадку черенков на питательную среду для получения пазушных побегов, которые затем черенкуют и культивируют на питательной среде без стимуляторов для укоренения, отличающий- с я тем, что, с целью увеличения выхода посадочного материала, высаживание почечной меристемы осуществляют на агаризованную среду Мурасиге-Скуга, содержащую дополнительно, мг/л: кинетин - 0,4 - 0,6; гибберелловая кислота - 1,9-2,1; аденин 40 - 42; активированный уголь 5000

10000, полученные побеги переносят на свежую среду Мурасиге-Скуга, содержащую дополнительно, мг/л: кинетин 0,03 - 0,05; ферруловая кислота 0,01 - 0,03; индолилуксусная кислота 0,9 - 1,1 и активированный

уголь 5000 - 10000, а после микрочеренкования черенки пересаживают на питатель- ную среду Мурасиге-Скуга, содержащую дополнительно кинетин 0,04 - 0,06 мг/л и индолилуксусную кислоту 0,9 - 1,1 мг/л,

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам клонального микроразмножения растений, и может быть использовано для ускоренного получения генетически однородного посадочного материала полыни лимонной. Цель изобретения - увеличение выхода посадочного материала. Для этого микроразмножение полыни лимонной осуществляют путем вычленения почечной меристемы-, высадки ее на агаризованную среду Мурасиге-Скуга, содержащую дополнительно, мг/л: кинетин 0,4 - 0,6; гибберелловая кислота 1,9 - 2,1; аденин 40 - 42; активированный уголь 5000 - tOOOO. Полученные побеги переносят на свежую среду Мурасиге-Скуга, содержащую, мг/л: кинетин 0,03 - 0,05; ферруловая. кислота 0,01 - 0,03; индолилуксусная кислота 0,9 - 1,1; активированный уголь 5000 - 10000. После микрочеренкования черенки пересаживают на среду, содержащую 0,04 - 0,06 мг/л кинетина и 0,9 - 1,1 мг/л индоли- луксусной кислоты. Способ позволяет увеличить выход посадочного материала полыни в 10 раз и повысить приживаемость до 89-90%. 1 табл. fe