Способ определения обострения хронического панкреатита Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургической гастро- энтерологии и касается вопросов раннего определения обострения хронического панкреатита.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляется, следующим образом.

У больного с подозрением на обострение хронического воспалительного процесса в поджелудочной железе берут кровь из лок-тевой вены (5-6 мл) в пробирку с несколькими каплями гепарина для предупреждения свертывания и перемешивают стеклянной палочкой при комнатной температуре Глутатионпероксидазу и редуцированный глутатион определяют одновременно

Определение глутатионпероксидазы.

В две пробирки набирают одинако- вое количество состава: 1,3 кп О,} М раствора трис-буфера (рН 7,3), который содержит 5 мМ азида натрия (NaN,) и 2 мМ раствора ЭДТА. К буферному раствору добавляют 0,5 мл 2,5 мМ свежеприготовленного раствора.редуцированного глутати она (РГ) и 0,2 мп крови. В одну из пробирок (А) добавляют 0,5 мл тридестиллированной во- ды, в другую пробирку (Б) добавляют 0,5 мл 1,8 мМ раствора гидроперекиси водорода (Н,,0г). Реакция длится 1 мин. Прекращают реакцию добавлением осаждающего раствора по 3 мл в каждую пробирку. Осаждающий раствор состоит из 1,67 г ледяной метафосфорной кислоты, 0,2 г ЭДТА, 30,0 г натрия хлористого (NaCl) на 100 мл дистиллированной воды. Через 5 мин содержимое пробирок фильтруют. К 8 мл 0,3 мМ

(Л

с

ел

;О СО sj

со

4tl КОНГр Г

раствора двузамещенного фосфата натрия в дистиллированной воде добав- 1яют 2 МП фильтрата и 1 мл реагента Эллмана (40,0 мг ДТНБ, растворенной в 100 МП 1%-ного раствора цитрата натрия). Окрашенную смесь анализируют спектрофотометрически при дпине волны 412 им. Активность глутатионпе- роксидазы (ГП) определяют по разни- це экстинкций окраски при 412 нм Иежду контрольной пробиркой и про- |3иркой с индуцированной реакцией Ьерекисного окисления в течение 1 мин при комнатной температуре в 1 мп крови и выражают в милимолях редуцированного глутатиона (использованного в данной реакции в течение 1 мин в 1 мл крови), ,

Расчет производят по формуле

проб . окздд экстракция при длине волны

412 нм;

экстракция в контрольной пробирке;

экстинкция в пробирке с индуцированной реакцией) экстинкция при неферментативной оксидации, величина константная и составляет 0,03 ед,

Пересчет на милимоль редуцированного глутатиона на I мп крови производят по следующей формуле:

Акт ГП Е ,j К ммоль редуциророванного глутатиона, использованного за 1 мин реакции в 1 мп крови.

Поправочный коэффициент 2A24xig j lx2 j 75 5 33

где Е

4П

Е

конгр

проб

. окси

К

п.

мкг сульфгидр. групп соответствует показанию О,1 45 на шкале спектрофотометра; разбавление при окрашивании;переход на все количество

в пробирке;50

переход на 1 мл крови; мол о масса сульфгидр,

группы.

ение редуцированного глута

55

К 1,8 мл дистиллированной воды добавляют 0,2 мл цельной крови, к полученному гемолизату добавляют 3 мл:

осаждающего раствора (аналогичный раствор используется при определении ГП) и через 5 мин фильтруют. Окрашивают аналогично. Контроль ведут как анализ, только вместо крови берут дистиллированную воду. Результат анализируют на спектрофотометре при длине волны 412 нм и выражают в ммоль/мп крови. Расчет производят по формуле

Конц. РГ 4,2 К,

Поправочный коэффициент Oj 24j 10 c2i5 5

33 К

0

3

0

5

0

5

0

5

Формула та же, что при определении активности ГП только вместо 2,75 - переход на все количество в пробирке, в этой формуле 2,5с

После определения фермента глута- тионпероксидазы (ГП) и редуцированного глутатиона (РГ) вычисляют индекс соотношения ГП/РГ и при индексе соотношения П1/РГ от 1,86 до 4,0 диагностируют обострение хронического воспалительного процесса в поджелудочной железе.

Пример , Больная А,, 68 лет, поступила в клинику с жалобами на боль в спине и поясничной области, В анамнезе приступы боли в верхней половине живота после приема жирной

ПИ1ДИ,

I ,

Объективно: все клинические анализы в пределах нормы, кроме незначительной протеинурии (0,01%), При пальпации - живот мягкий, болезненность в эпигастральной области, в правом подреберье и правой латеральной области, Индекс соотношения ГП/РГ при поступлении 4,0, Больная получила консервативную терапию в течение 7 дней. Рентгенологически выявлена желчнокаменная болезнь. Произведена холецистэктомия и внутри- операционная холангиография. Во время операции обнаружено уплотнение поджелудочной железы в области головки. Взята биопсия поджелудочной железы„ Морфологический анализ биоп- тата выявил сужение концевых железистых отделов из-за набухания клеток, базальное .расположение ядер и резкую вакуолизацию с накоплением липидов, В очагах резкого просветления апикальной части клеток отсутствие гранул зимргена, зимоген выявлен в просветах ацинусов. Расширены

вставные внутридольковые и меяодоль- ковые протоки. В непосредственной близости участков нарушения микро- циркуляции наблюдались мелкие очаговые некрозы клеток экзо кринной част поджелодочной железы. Послеоперационное течение осложнилось болевым синдромом, рвотами, вздутием живота Через 1-6 сут после операции индекс соотношения ГП/РГ был 3,4, а через 7-13 сут после операции не снижался и составил 3,55, что свидетельствовало об обострении хронического сопутствующего панкреатита, который четко выявило морфологическое обследование биоптата ПЖ и который не бь установлен до операций клинически,/ хотя индекс ГП/РГ указывал уа обострение хронического воспаления поджелудочной железы.

Индекс соотношения ГП/РГ составил 4,0, что Свидетельствовало о наличии обострения хронического панкреатита и о том, что не рекомендуется проводить операцию. Однако больная была прооперирована, что привело в послеоперационном Периоде к тяжелым осложнениям,

И р и м е р 2. Больная Г., 68 лет поступила в клинику на плановую операцию по поводу аденомы Фатерова. соска, доказанной эндоскопически и морфологически. В анамнезе у больной хронический панкреатит. Произведена панкреатодуоденальная резекция. Во время операции обнаружен хронический индуративный панкреатит, подтвержден морфологическим анализом операционного препарата. Новый способ до операции выявил индекс ГП/РГ 2,3, что указывало на обострение хронического панкреатита. Другие клинические признаки обострения панкреатита на выявлены. Однако больной произвели операциюс Послеоперационный период осложнился выраженным болевым синдромом и кишечной атонией, заживление вторичным натяжением. Через 1-6 сут после операции индекс ГП/РГ был 3,13, а через 7-13 суток после операции индекс ГП/РГ был 2,11, что свидетельствовало о послеоперационном панкреатите.

П р и м е р 3. Больная В., 49 лет, поступила в клинику с жалобами на боль в правом подреберье, подложечной области, тошноту, рвоту,.

1599773

20

Объективно: клинические анализы в пределах нормы, пальпаторно болезненность в правой подреберной области и эпигастральной области. Индекс ГП/РГ 1,86. Установлено обострение хронического холецистопанкреатита, начата консервативная терапия в течение 15 дней. Начальные симптомы 10 регрессировали. Индекс ГП/РГ снизился до 1,79. Ввиду положительной динамики после консервативной тера- ПИИ больной произведена операция хо- лецистэктомия в плановом порядке. J5 Морфологический анализ пункционного биоптата выявил, что просветы концевых железистых отделов (ацинусов) сужены из-за набухания клеток, как панкреатоцитов, так и центроациноз- ных клеток о Контуры клеток нечеткие, ядра расположены базально. Цитоплазма клеток резко вакуолизирована, определялись большие вакуоли до 1/3 площади клеток, где выявлены капли 25 Липидов. Данные морфологического

анализа биоптат подтвердили правильность дооперационного диагноза и выбранной тактики подготовительной консервативной терапии до снижения 30 величины индекса ГП/РГ ниже 1,86, что указывает на затихание обострения хронического панкреатита и благоприятного- момента для плановой санации желчных путей. У данной боль- ной послеоперационный период протекал без осложнений . Выписка на 9-е сутки после операции.

Приведенный пример показывает высокую эффективность использования 0 индекса ГП/РГ в качестве показателя клинического течения обострения хронического панкреатита, обеспечивающего возможность выбора правильной лечебной тактики.

5 Применение способа в медицинской практике позволяет повысить точность определения обострения хронического панкреатита до 95% на 6-10 дней раньше, чем при использовании известного способа.

0

Ф

и я

ормула изобретен Способ определения обострения хронического панкреатита путем иссле-. 5 дования ферментативной активности крови, отличающий с я тем, что, с целью повышения точности способа,определяют активность глу- татионпероксидазы и редуцированный

15997738

глутатион, рассчитывают соотношениеего значении 1,86 - 4,00 определяют

первого показателя ко второму и приобострение хронического панкреатита.

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургической гастроэнтерологии, и касается вопросов определения обострения хронического панкреатита. С целью повышения точности способа в крови больного определяют активность глутатионпероксидазы и редуцированный глутатион, рассчитывают их соотношение и при его значении 1,86-4,00 определяют обострение хронического панкреатита. Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет в медицинской практике на 6-10 дней раньше определить с точностью до 95% обострение хронического панкреатита.