Способ определения стероидов в насекомых Советский патент 1990 года по МПК A01K67/00 

рнгй затем добавляют к фазе П(&сле этого нижнюю фазу 2 раза обрабатывают водой (пс 4 мл), присоединяя водный раствор к верхней фазе с, После второй обработки водой нижнюю фильтруют через бумажный фильтр с безводным сульфатом«натрияо

: Из верхней фазы, содержащей экди- с- ероиды, упаривают метанол на ротор HJDM испарителе при 40-45 С, из вод- н|эго остатка производят выделение стероидов путем твердофазной экстрак Дпя этого .водный раствор пропус к$.ют через 0,5 г силикагеля с хими- привитыми октадеципсилановыми группамиS затем твердый экстрагент оорабатьюают водой (5 мл) 25- и 50%-ными растворами метанола в воде (о 5 мл), собирая последнюю фракцию дря аналитических определений о

Из нижней фазы производят выде- лЁние стеринов и их эфиров путем тве дрфазной э.кстрак1щи на силикагелбо этого на первом этапе нижнюю фаз пропускают через твердый экстрагент (pj5 г), при этом на нем остаются полярные липидыо Полученньй раствор нейтральных липидов упаривают на роторном испарителе при 25--28 С, оста- Ток растворяют в 4-5 мл гексана и П;ропускают через новую порцию экстралента (Os,5 г) о Далее последователь- KJO обрабатывают экстрагект 2 .мл гексана, 5 мл 1%-ного раствора эфира в гексане (фракция эфиров стеринсв), 10 мл 8%-ного раствора эфира в гексй не (фракция триглип.еридов и свободных кислот отбрасывается),, 10 1ш 15j%--Horo раствора эфира Е гексане

|фра. .свобод 1ых стеркнов); Выде- 4енные фракц:ии используют pji проведения ангшитических оаределекий

П р и м е р 2о 2 г бабочек зерно-itofi моли оОрабатьшамт 20 мл, смеси

зслороформ -- метанол (2;1) и далее выполняют ;аоследователь: -:ост:ь опера1,;ий как в примере о

Результаты определанкй по прИ1-,.:е- зам и 2 представлены в табл 1,

Примерз (оценка правильност ,лредоагаемого способа)о Дпя оценки Правильности способа подготовки пробы используют модельную смесь в котор то входят представите- .пи классов экдистерондов 5 эфи- ров стеринов 7-1 свободных стериновJ а также мешающие определению вещества (углеводороды,, триглиг ериды., сво

с о

,

Q

5

жирные кис.-1оты, фосфолипиды) „ Смесь наносят на субстрат из насекомых, из которых уд;шены липиды, в том числе и стероиды (субстрат - яйца зерновой моли, обработанные избытком (двалды) смеси хлороформ-метанол)о

На 2 г субстрата наносят,мкг: хо- лестерилбензоат (эфир стерина) 05, эргостерин (свободный стерин) 180, экдистерон (экдистероид) 40j 8-доде- цен (углеводород) 2000, оливковое масло - 80% триолеина (три лицери- ды) 28000J олеиновая кислота (жирная , кислота) 280005 лецитин (фосфолипид в 2 мл хлористого метилена, 5000„ Через 1 ч производят экстракцию и выделение целевых -фракций„ Конечное определение стероидов производят спектрофотометрическим методом -при указанных значениях длин волн на основе построения калибровочного графика,, Максимум поглощения для холе- стерилбензоата составляет 228 нм, зргостерина 282 HMj экдистерона 242 нм. Количество мешающих веществ более, чем в 150 раз превьаиает количество определяемых стероидов, причем мешающие вещества сами обладают значительным поглощением в указанных областях УФ-спектра Результаты подготовки проб я анализа представлены в табЛо2 (число погэторностей )

IIpeдлaгae lЫй способ позволяет одновременно в одной пробе определять три класса стероидов: экдистероиды, стеринь ; у сложные зфиры, при этом обеспечивается не менее, чем 80%-ное Еыделение стероидов

Ф о р м j л а ИГ: о б р е т е н и я

Способ определения стероидов в насекомых, включающий экстракцию сте- poi-щсв сМес,ью растворителей; последующее выделение целевых. о ракций и ,1-иф,икаци о стероир.ов с помощью спехтрофсггоматра, отличающий- с я тем, что. с повышения эффективности за счет ускорения процесса., экстракцию cTe.poi-щов прояодят смесьго х..пороформ - метапол i-ши хлористый метилен - метанол при соотношении компонентов 2;1з вЫде.ление целевых фракций проводят после обработки экстракта водой и расслоеш- я фаз методом твердофазной экстракции, гричем выделение экдистероидов из верхней фазы проводят путем твер51

дофазной экстракции на силикагеле с химически;привитыми октадедилсила- новыми группами последовательной про мывкой -твердого экстрах ента водой, 25- и 50%-ным раствором метанола в воде, а выделение сложных эфиров стеринов и свободных стеринов проводят путем последовательной твердофазной экстракции на силикагеле, при147746

чем первоначально через твердый экст- рагент пропускают нижнюю фазу, растворитель упаривают и остаток растворяют в гексане, а затем новую порцию зкстрагента последовательно обрабатывают ге.ксановым экстрактом и смесью эфира с гексаном с увеличивающимся содержанием эфира от 1 до 15%

10 гек ганео

т а л ш ц I I

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к методам разработки питательных сред для массового разведения насекомых, используемых для биометода. Цель - повышение эффективности за счет ускорения процесса. Новый способ включает экстракцию пробы насекомого смесью растворителей: флороформ - метанол или хлористый метилен-метанол (2:1), обработку экстракта водой, а после расслоения фаз выделение целевых фракций методом твердофазной экстракции. Выделение экдистероидов из верхней фазы производят путем твердофазной экстракции на силикагеле с химически привитыми октадецилсилановыми группами последовательной обработкой экстрагента водой, 25 и 50%-ным раствором метанола в воде. Выделение эфиров стеринов и свободных стеринов путем твердофазной экстракции на силикагеле проводят в 2 этапа. На первом через твердый экстрагент пропускают нижнюю фазу, растворитель упаривают, пробу растворяют в гексане. На втором твердый экстрагент последовательно обрабатывают раствором гексана, 1%, 8% и 15%-ным раствором эфира в гексане. Изобретение позволяет одновременно в одной пробе определять 3 класса стероидов : экдистероиды, стерины и их сложные эфиры, одновременно обеспечивается не менее 80%-ное выделение стероидов. 2 табл.

1059489,5 11,2 180

1059287,6 10,7 180

Тлвлкц 2