Способ получения средства, обладающего стресспротективной и антиоксидантной активностью Российский патент 2017 года по МПК A61K36/28 B01D11/02 A61P39/06 

Изобретение относится к области фармации, и касается способа получения средства, обладающего антиоксидантной и стресспротективной активностью, на основе травы серпухи васильковой в виде экстракта сухого.

Одним из перспективным растительным источником адаптогенных средств является серпуха васильковая (Serratula centauroides L.) сем. Астровые (Asteraceae) [1, 2]. Известно, что серпуха васильковая содержит комплекс биологически активных веществ, среди которых выделяют экдистероиды [3, 4]. Экдистероиды - вещества, способные стимулировать синтез белка. В практической медицине средства, содержащие экдистероиды, применяют с целью повышения резистентности организма к действию агрессивных факторов, используются они для поддержания иммунного статуса человека, а также при трансплантации органов и тканей [1, 5]. Наличие экдистероидов характерно для папоротников, грибов, мхов, водорослей, голосеменных растений и насекомых. Из официнальных средств экдистероиды содержатся в препаратах левзеи сафлоровидной (Rhaponticum carthamoides (Wild) Iljin) семейства Астровые (Asteraceae), к ним относятся левзеи жидкий экстракт и препарат «Экдистен» [6]. Экстракт левзеи сафлоровидной жидкий обладает тонизирующим, актопротекторным, адаптогенным действиями, способствует усилению биосинтеза белка в организме, существенным недостатком которого является низкое содержание 20-гидроксиэкдистерона (массовая доля в среднем составляет 0,1%), что обусловливает менее выраженные антиоксидантное и стресспротективное действие по сравнению с заявленным средством [7].

Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств растительного происхождения, обладающих стресспротективной и антиоксидантной активностью, за счет использования широко распространенного растительного сырья травы серпухи васильковой (Serratula centauroides L.), имеющей надежную и обеспеченную сырьевую базу, а также повышение стресспротективной и антиоксидантной активности за счет увеличения выхода биологически активных веществ (экдистероидов) в заявленном средстве.

В качестве прототипа данного изобретения принят - экстракт левзеи сафлоровидной жидкий, который изготовлен из корневищ с корнями левзеи сафлоровидной в соотношении сырье и экстрагент 1:1 на 70% этаноле [6].

Недостатками указанного средства являются слабо выраженные стресспротективная и антиоксидантная активности по сравнению со средством, полученным по предлагаемому способу, а также низкое содержание экдистерона в экстракте жидком.

Для получения экстракта сухого растительный материал, состоящий из измельченной травы серпухи васильковой, экстрагируют трехкратно при соотношении сырья в мас.ч. и экстрагента в об.ч. 1:12. При первом контакте фаз используется экстрагент 70% спирт этиловый, экстракцию выполняют в течение 90 минут, при втором - 40% этиловый спирт в течение 60 минут и при третьем контакте фаз - 20% спирт этиловый в течение 60 минут. Экстракцию выполняют при температуре 60°C при всех контактах фаз. Спиртовое извлечение после экстракций упаривают до 1/3 от первоначального объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений сепарируют. Полученный продукт доупаривают до 1/5 и высушивают в вакуум-сушильном шкафу. Выход готового продукта составляет 37,28% от массы растительного материала. Экстракт сухой, представляет собой аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%. Гигроскопичен. Данный способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки, позволяет получить продукт постоянного состава. Технология может быть внедрена на предприятиях по выпуску лекарственных препаратов.

В обеспечении антиоксидантного эффекта полученного средства важное значение придается флавоноидам, одним из ключевых свойств которых является их антиоксидантная активность. Флавоноиды способствуют подавлению процессов свободнорадикального окисления липидов, белков, нуклеиновых кислот и других соединений, а также торможению пероксидации [8, 9, 10].

Изучены факторы, которые оказывают влияние на процесс экстрагирования растительного материала - природа экстрагента, степень измельчения, соотношение сырье:экстрагент, температурный режим и продолжительность экстракции.

Количественная оценка велась по выходу экстрактивных веществ [11], экдистерона и суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Количественное содержание экдистерона проводили хроматоспектрофотометрическим методом. Для этого аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл 70% спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут. Извлечение охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный складчатый фильтр «красная лента», отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).

1 мл раствора A помещают в стеклянную колонку высотой 250 мм и диаметром 20 мм с 12 г алюминия оксида для хроматографии II степени активности (по Брокману) и элюируют 95% спиртом в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 95% спиртом до метки и перемешивают (раствор Б).

Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 242±2 нм с толщиной слоя кюветы 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 95% спирт. Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца (СО) экдистерона (раствор В).

Содержание экдистерона на абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность СО экдистерона;

m - масса сырья, г;

m₀ - масса СО экдистерона, г;

W - влажность сырья, %.

Приготовление СО экдистерона:

Около 0,01 г (точная навеска) СО экдистерона растворяют в небольшом количестве 95% спирта в мерной колбе вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 95% спиртом.

1 мл раствора СО экдистерона помещают в стеклянную колонку высотой 250 мм и диаметром 20 мм с 12 г алюминия оксида для хроматографии II степени активности (по Брокману) и элюируют 95% спиртом в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 95% спиртом до метки и перемешивают (раствор В).

Количественное содержание флавоноидов проводили спектрофотометрическим методом с добавлением комплексообразующего реактива - 3% спиртового раствора алюминия хлорида.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл 40% спирта этилового. Колбу взвешивают с погрешностью ±0,01 г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут. После охлаждения до комнатной температуры, колбу вновь взвешивают и доводят объем до первоначальной массы 40% спиртом. Извлечение фильтруют через бумажный складчатый фильтр «красная лента», отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).

1 мл раствора A помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртовой раствор алюминия хлорида и доводят объем раствора 40% спиртом до метки и перемешивают (раствор Б). В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора A, доведенного 40% спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Через 45 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 400±5 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора СО лютеолин-7-гликозид.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность СО лютеолин-7-гликозида;

m - масса сырья, г;

m₀ - масса СО лютеолин-7-гликозида, г;

W - влажность сырья, %.

Приготовление СО лютеолин-7-гликозида:

Около 0,05 г (точная навеска) СО лютеолин-7-гликозида, предварительно высушенного при температуре 100-105°C в течение 2 часов, растворяют в небольшом количестве 70% спирта в мерной колбе на 25 мл и доводят объем раствора до метки 70% спиртом (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, приливают 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки 70% спиртом (раствор Б).

Результаты проведенных исследований представлены в таблицах 1-5. Из данных таблицы 1 следует, что 70% этанол обеспечивает максимальный выход экдистерона, 40% этанол - флавоноидов, а 20% этанол и горячая вода - сумму экстрактивных веществ.

Нами предлагается использовать три экстрагента для полного истощения сырья - 70% этанол в первой экстракции, 40% этанол - во второй и 20% этанол - в третьей экстракции, которые позволят увеличить выход биологически активных веществ из сырья.

На процесс экстракции, качество вытяжки и полноту выхода биологически активных веществ большое влияние оказывает характер измельчения растительного сырья. Сырье подвергалось измельчению до размера частиц 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 и 5,0 мм. Данные анализа представлены в таблице 2.

Наиболее оптимальным измельчением растительного сырья является степень измельчения 1,0-2,0 мм. Дальнейшее измельчение растительного материала нецелесообразно из-за затруднения экстрагирования (очень мелкий порошок образует с растворителем тестообразную массу, что затрудняет процесс фильтрации), а более крупное измельчение не рационально, так как в сырье замедляется процесс экстракции биологически активных веществ.

Изучена зависимость выхода суммы экстрагируемых веществ в различных соотношениях к количеству сырья. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что оптимальным соотношением сырья и экстрагента является 1:12 для однократного залива сырья. Дальнейшее увеличение соотношения нецелесообразно ввиду незначительного повышения выхода действующих веществ, а также в связи с увеличением расхода экстрагента (таблица 3).

Изучено влияние температурного режима на выход экстрактивных и биологически активных веществ. Из данных таблицы 4 видно, что повышение температуры увеличивает выход веществ. Для получения экстракта сухого выбрана температура 60°C, которая обеспечивает оптимальное извлечение биологически активных веществ. Большее повышение температуры с одной стороны может привести к разрушению термолабильных веществ, ухудшению растворения или испарению некоторых веществ (например, эфирных масел), переходу в извлечение большого количества балластных веществ, с другой стороны - увеличивает энергозатратность производства готового продукта (таблица 4).

Для определения продолжительности экстракции изучено время наступления равновесной концентрации в системе сырье-экстрагент при трехкратной экстракции разными типами экстрагента. Для этого массу навески сырья экстрагировали последовательно спиртом 70%, 40% и 20% в соотношении 1:12 на водяной бане при температуре 60°C при постоянном перемешивании с обратным холодильником. После первого контакта фаз 70%-ым этанолом через заданные промежутки времени (15, 30, 45, 60, 75, 90 мин.) извлечения фильтровали, определяли содержание суммы экстрактивных веществ, экдистерона и флавоноидов. Затем проводили две последующие экстракции отжатого сырья при тех же промежутках времени, заливая во 2-ом контакте фаз - 40% спирт, а в 3-ем контакте - 20% спирт в количестве, равном объему предыдущих слитых извлечений. Извлечения также анализировали на содержание суммы экстрактивных веществ, экдистерона и флавоноидов (таблица 5).

По результатам данных таблицы 5 видно, что равновесное состояние наступает при 1-ом контакте фаз через 90 мин, при 2-ом и 3-ем контакте фаз через 60 мин.

Пример способа получения экстракта сухого: 1 кг травы серпухи васильковой измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1,0-2,0 мм. Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 12 л 70%-ным спиртом этиловым в соотношении сырье:экстрагент 1:12. Первую экстракцию выполняют при температуре 60°C в течение 90 мин при постоянном перемешивании. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Вторую экстракцию выполняют в течение 60 мин при температуре 60°C, подавая в экстрактор 10 л 40%-ного спирта этилового. Третью экстракцию выполняют 20%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин при той же температуре, объем экстрагента 10,1 л. В результате экстракции получаем извлечения в количестве 10,0 л (1-ый слив); 10,1 л (2-ой слив); 10,1 л (3-ий слив). Водно-спиртовое извлечение после первого контакта фаз последовательно порциями упаривают примерно до 1/3 первоначального объема. Извлечения после второго и третьего контакта фаз также упаривают до 1/3 объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений подвергают очистке сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема и сушат на нержавеющих противнях в вакуумной сушилке при 65-70°C 8 ч. Получают 372,8 г экстракта сухого.

Экстракт сухой, представляет собой аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%. Гигроскопичен.

Качественно экдистероиды обнаруживали в водно-спиртовом растворе экстракта методом восходящей тонкослойной хроматографией в сравнении с достоверным образцом экдистерона в системе растворителей хлороформ - 95% спирт этиловый (4:1). Хроматограммы высушивали на воздухе, обрабатывали ванилин-серным реактивом и нагревали в сушильном шкафу при температуре 100-105°C в течение 10 минут и наблюдали пятно желто-зеленого цвета на белом фоне пластинки на уровне пятна СО экдистерона (Rf≈0.39).

Проведен сравнительный анализ количественного содержания экдистерона в экстракте жидком левзеи сафлоровидной [6] и в экстракте сухом из травы серпухи васильковой.

Методика.

Около 0,3 г (точная навеска) экстракта сухого растворяют в мерной колбе вместимостью 50 мл в небольшом количестве 70% спирта при нагревании, после растворения охлаждают и доводят объем колбы до метки и тщательно перемешивают. Извлечение фильтруют через бумажный складчатый фильтр «красная лента», отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).

1 мл раствора А (или 1 мл экстракта жидкого) помещают в стеклянную колонку высотой 250 мм и диаметром 20 мм с 12 г алюминия оксида для хроматографии II степени активности (по Брокману) и элюируют 95% спиртом в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 95% спиртом до метки и перемешивают (раствор Б).

Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 242±2 нм с толщиной слоя кюветы 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 95% спирт. Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора СО экдистерона (раствор В) (см. выше).

Содержание экдистерона в экстракте сухом в процентах (X) вычисляют по формуле:

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

D₀ - оптическая плотность РСО экдистерона;

m - масса экстракта сухого или 1 мл экстракта жидкого, г;

m₀ - масса PCO экдистерона, г;

W - влажность сырья, %.

Приготовление РСО экдистерона и измерение его оптической плотности см. выше. Содержание экдистерона в экстракте жидком в процентах (X) вычисляют по формуле:

Влияние экстракта сухого серпухи васильковой на устойчивость к психоэмоциональному стрессу

Эксперименты проведены на крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Модель стресса воспроизводили в бассейне путем погружения животных в воду (25 С) по мечевидный отросток на 4 часа [12]. Крысы были свободно заключены в пластиковые пеналы (длина - 16,5 см, внутренний диаметр - 5,5 см), где животные могли изменять положение тела. Животным опытной группы 1 внутрижелудочно вводили водный раствор экстракта сухого серпухи васильковой (СЭСВ) в дозе 100 мг/кг в течение 7 дней до стрессорного воздействия (1 раз в день за 30 минут до кормления). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный экстракт жидкий левзеи сафлоровидной в дозе 5 мл/кг. На 7 сутки эксперимента животных опытных групп и контроля подвергали психо-эмоциональному стрессу. После эксперимента животных декапитировали под легким эфирным наркозом.

Интенсивность процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул определяли по содержанию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови [13]. О состоянии антиоксидантной системы судили по активности каталазы в сыворотке крови [14] и содержанию восстановленного глутатиона (ВГ) в цельной крови [15]. Содержание адренокортикотропного гормона (АКТГ) в плазме крови, альдостерона и кортизола в сыворотке крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа на анализаторе "DSX" (США) с применением наборов: «Стероид ИФА-кортизол-01», «Aldosterone ELISA», «DRG АСТН ELISA». Полученные данные представлены в таблицах 7-8.

Установлено, что курсовое введение животным СЭСВ в дозе 100,0 мг/кг оказывало выраженное антистрессорное действие на фоне 4-часового эмоционального стресса, о чем свидетельствует достоверное уменьшение выраженности признаков «триады Селье» (табл. 7-8). У животных, получавших испытуемый экстракт, наблюдалось уменьшение выраженности признаков «триады Селье»: масса надпочечников у крыс этой группы была на 37% меньше, чем в контроле, а масса тимуса и селезенки была соответственно на 37 и 27% больше аналогичных показателей у крыс контрольной группы и практически оставалась на уровне физиологической нормы. Эффективность испытуемого экстракта по показателям инволюции иммунокомпетентных органов была выше, чем у препарата сравнения; а по показателю влияния на массу надпочечников эффективность экстракта левзеи одноцветковой была аналогичной таковой у препарата сравнения.

Наряду с этим, превентивное введение экстракта серпухи васильковой оказывало выраженное гастропротективное действие, задерживая развитие глубоких деструкций слизистой оболочки желудка белых крыс (табл. 8).

Вместе с тем, курсовое введение испытуемого средства сопровождается снижением активности гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы (табл. 9), о чем свидетельствует уменьшение концентрации АКТГ и кортизола в среднем на 34% по сравнению с данными животных контрольной группы. Кроме того, в крови животных опытной группы отмечается снижение уровня альдостерона на 36% по сравнению с контролем, что указывает на ограничение активности ренин-ангиотензин-альдостероновой системы под влиянием испытуемого средства. Активность испытуемого средства сопоставима с таковой у препарата сравнения - экстракта жидкого левзеи сафлоровидной.

В предупреждении и коррекции стрессорных повреждений важную роль играет антиоксидантная стресс-лимитирующая система организма белых крыс. При исследовании влияния СЭСВ на интенсивность процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул при эмоциональном стрессе установлено, что под его влиянием концентрация МДА снижается в 1,5 раза, а содержание восстановленного глутатиона повышается в 2,2 раза; активность каталазы увеличивается на 34% по сравнению с аналогичными показателями крыс контрольной группы. При этом стресс-протективная и антиоксидантная активность испытуемого средства была сопоставима с таковой у препарата сравнения - экстракта жидкого левзеи сафлоровидной (табл.10).

Таким образом, СЭСВ в дозе 100 мг/кг обладает выраженным стресс-протективным действием, в значительной степени ограничивая активацию центральных стресс-реализующих систем: симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизарно-адреналовой, а также повышает активность эндогенной антиоксидантной системы.

Антиоксидантная активность экстракта сухого серпухи васильковой в условиях in vitro

Антиоксидантную активность в модельных системах in vitro оценивали по способности СЭСВ связывать свободные радикалы: супероксидный анион-радикал (), радикал оксида азота (NO), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (2,2-дифенил-1-пикрилгидразил) - радикал (DPPH) и ингибировать Fe²⁺ - индуцированный процесс перекисного окисления липидов.

Связывание - анион-радикала определяли по методу A.-S. Chen и соавт. [16], в неэнзиматической системе феназин метосульфат - НАДФ с последующей спектрофотометрической регистрацией количества окисленного тетразолия нитросинего. Антирадикальное действие по отношению к NO определяли по методу R. Govindarajan и соавт. [17], заключающегося в связывании веществом (препаратом) NO нитропруссида натрия с последующей спектрофотометрической регистрацией остаточного содержания NO реактивом Грисса. Связывание DPPH-радикала проводили спектрофотометрическим методом по методу A. Seyoum и соавт. [18] со спиртовым раствором радикала DPPH при длине волны 520 нм. В присутствии донора водорода 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил восстанавливается с утратой специфической окраски. Антиокислительную активность в условиях in vitro оценивали по ингибированию Fe²⁺-индуцированного процесса перекисного окисления липидов в суспензии желточных липопротеидов [19].

В качестве препарата сравнения был взят деалкоголизированный экстракт жидкий левзеи сафлоровидной (ООО НПП Камелия, Россия). Результаты экспериментов подвергали логарифмированию по концентрационной шкале с последующим регрессионным анализом и определением величины 50% связывания радикала (IC₅₀).

Полученные данные приведены в таблицах 11-14.

Как следует из таблицы 11, концентрация 50% ингибирования супероксидного анион-радикала для сухого экстракта серпухи васильковой составляет 77,3 мкг/мл (IC₅₀=77,3 мкг/мл). Таким образом, СЭСВ проявляет более выраженную активность в отношении связывания супероксидного анион-радикала в условиях in vitro, превосходящую таковую препарата сравнения - жидкого экстракта левзеи сафлоровидной (IC₅₀=150,3 мкг/мл).

Из таблицы 12 видно, что испытуемое фитосредство обладает NO-связывающей активностью, превосходящей таковую препарата сравнения. Так, концентрация 50% связывания молекул NO для сухого экстракта серпухи васильковой составила 557,8 мкг/мл (IC₅₀=557,8 мкг/мл), а для препарата сравнения - жидкого экстракта левзеи сафлоровидной 610,5 мкг/мл (IC₅₀=610,5 мкг/мл).

Установлено, что СЭСВ проявляет выраженную антирадикальную активность в отношении связывания DPPH-радикала (IC₅₀=51,9 мкг/мл). При этом антирадикальная активность исследуемого сухого экстракта превосходит таковую активность препарата сравнения (IC₅₀=60,2 мкг/мл).

Как следует из данных, приведенных в таблице 14, внесение СЭСВ в инкубационную среду способствует снижению интенсивности Fe²⁺-индуцированного процесса перекисного окисления липидов. При этом антиокислительная активность испытуемого фитосредства (IC₅₀=166,7 мкг/мл) значительно превосходит таковую активность препарата сравнения - жидкого экстракта левзеи сафлоровидной (IC₅₀=258,5 мкг/мл).

Исследуемый сухой экстракт серпухи васильковой в условиях in vitro обладает умеренно-выраженной антиокислительной активностью.

Таким образом, сухой экстракт серпухи васильковой в дозе 100 мг/кг обладает выраженным стресс-протективным действием, в значительной степени ограничивая активацию центральных стресс-реализующих систем: симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизарно-адреналовой, а также повышает активность эндогенной антиоксидантной системы. В условиях in vitro испытуемое фитосредство проявляет антиоксидантную активность, инактивируя свободные радикалы (, NO, DPPH-радикал), а также ингибируя Fe²⁺-индуцированный процесс перекисного окисления липидов.

Литература

1. Николаева Г.Г., Шантанова Л.Н., Николаева И.Г., Раднаева Л.Д., Гармаева Л.Л., Цыбиктарова Л.П. Левзея одноцветковая и серпуха васильковая перспективные экдистероидсодержащие растения // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2014. - №3 (97). - С. 91-96.

2. Фитоэкдистероиды / под ред. В.В. Володина. - Санкт-Петербург: Наука, 2003. - С. 293.

3. Буданцев, А.Л. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность: Том 5. Семейство Asteraceae / А.Л. Буданцев - СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2013. - 312 с.

4. A.N. Vorob'eva, V.G. Rybin, E.V. Zarembo, and E.V. Boltenkov, Chem. of Natur. Comp., No. 1, 105 (2005).

5. Пунегова Н.В. Фармакологические свойства препарата экдистероидов серпухи венценосной / Н.В. Пунегова // Сборник научных работ студентов и молодых ученых ЯГМА. - Ярославль, 2004. - С. 78.

6. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - 1216 с.

7. Патент РФ №2321420 от 20.07.2006

8. Корулькин Д.Ю., Абилов Ж.А., Музычкина Р.А., Толстиков Г.А. Природные флавоноиды. - Новосибирск: Академическое издательство «Гео», 2007. - 232 с.;

9. Макарова М.Н., Макаров В.Г. Молекулярная биология флавоноидов (химия, биохимия, фармакология): руководство для врачей. - СПб., 2010. - 428 с.;

10. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: учебник. - М.: Медицина, 2002. - 656 с.

11. Государственная фармакопея СССР XI издание. Т. 1.- Москва, 1987. - С. 295 - 13 изд

12. Overmier, J. The ulcerogenic effect of a rest period after exposure to water-restraint stress / J. Overmier, R. Murison, H. Ursin // Behav. Neural. Biol. - 1986. - Vol. 46. - P. 372-386

13. Темирбулатов P.А. Метод определения интенсивности свободнорадикального окисления липид-содержащих компонентов крови и его диагностическое значение / Р.А. Темирбулатов, Е.И. Селезнев // Лабор. дело. - 1981. - №4. - С. 209-211

14. Королюк М.А. Методы определения активности каталазы / М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова и др. // Лабор. дело. - 1988. - №1. - С. 16-19

15. Anderson R.L. Nonoleguric acute renal failure / R.L. Anderson, S.L. Linas, A.S. Berns et al. // N. Engl. J. Med. - 1977. - Vol. 236. - P. 1134

16. Chen A.-S. Antioxidant activities of chitibiose and chititriose / A.-S. Chen, T. Taguchi, K. Sakai, K. Kikuchi, M.-W. Wang, I. Miwa // Biological & Pharmaceutical Bulletin. - 2003. - V. 26. - P. 1326-1330

17. Govindarajan R. Studies on the antioxidant activities of Desmodium gagenticum / R. Govindarajan, S. Rastogi, M. Vijayakumar // Biological & Pharmaceutical Bulletin. - 2003. - V. 26. - P. 1424-1427

18. Seyoum A. Structure-radical scavenging relationships of flavonoids / A. Seyoum, K. Asres, F.K. El-Fiky // Phytochemistry. - 2006. - Vol. 67. - N 18. - P. 2058-2070

19. Lee Sang-Myung, Na Min-Kyun, An Ren-Bo, Min Byung-Sun, Lee Hyeong-Kyu Antioxidant Activity of Two Phloroglucinol Derivatives from Dryopteris crassirhizoma // Biol. Pharm. Bull. - 2003. - Vol. 26, N 9. - P. 1354-1356

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа получения средства, обладающего стресспротективной и антиоксидантной активностью. Способ заключается в том, что траву серпухи васильковой, измельченную до размера 1,0-2,0 мм, экстрагируют трехкратно при температуре 60°C при соотношении сырья в мас.ч. и экстрагента в об.ч. 1:12. Первый контакт фаз - 70%-ным спиртом этиловым в течение 90 мин, второй контакт фаз - 40%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин и третий контакт фаз - 20%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин. Объединенные водно-спиртовые извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате. Вышеописанный способ позволяет расширить ассортимент лекарственных средств растительного происхождения со стресспротективной и антиоксидантной активностью. 15 табл., 1 пр.

Способ получения средства, обладающего стресспротективной и антиоксидантной активностью, в котором растительный материал травы серпухи васильковой, измельченный до размеров 1,0-2,0 мм, экстрагируют трехкратно при температуре 60°C при соотношении сырья в мас.ч. и экстрагента в об.ч. 1:12, при этом первый контакт фаз - 70%-ным спиртом этиловым в течение 90 мин, второй контакт фаз - 40%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин и третий контакт фаз - 20%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин, далее объединенные водно-спиртовые извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате.