Способ проведения иммуноанализа Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к иммуноана- лизу, В частности к способам проведения диссоционно-усиленного лантанид- ного флуоресцентного иммуноанализа, и может быть испопьзовано в медицине, биологии,сельском хозяйстве.

Целью изобретения является повышение чувствительности диссоционно- усиленного лантанидного флуоресцентного иммуноанализа.

Пример 1. Определение моно- клональных антиинсулиновых антител.

На полистироловые планшеты адсорбируют инсулин (10 мкг/мл) из 0,1 М карбонатного буфера, рН 9,2 в течение ночи при комнатной температуре. Трижды отмьшают раствором (9 г/л NaCl и 0,5 г/л NaNO). Насьщают поверхность планшеты бычьим сывороточным альбумином (5 г/л) из 0,1 М карбонатного буфера, рН 9,2 - 2 ч при 37 С. После 3-кратного отмывания

(Л

наносят моноклональные антиинсули- новые антитола Е,о(2,5 мкг/мл) в буфере - 30 М/л трис-НС1 (рН 7,7 при 25°С), 9 г/л NaCl, 100 мкл/л Твина-20, М/л хлорида кальция и этилендиаминтетрауксусной кислоты, инкубируют 30 мин при . Лунки трижды промывают и вносят ме. ченные хелатом европия кроличьи антитела против глобулинов мыши (RAM - Ей), инкубируют 1 ч при . , После 3-кратной отмывки в лунки добавляется усиливающий раствор (й- дикетон), перемешивают на шенкере в течение 10 мин, затем измеряют флуо-.ресценцию европия на Arcus 1230 флуорометре (LKB).

В табл. 1 представлены данные RAM-EU по отношению сигнал опыта/ сигнал контроля при использовании

.различных концентраций поликарбоновых

и хлорида кальция.

05

со сх

3 16173814

П Р и м е р 2. Способ осуществляютФормула изобретения согласно примеру 1, но в качестве

соли кальция используют Ю М нитра-Способ проведения иммуноанализа,

та кальция, а в качестве поликарбоно-и включающий приготовление иммуносор- вой кислоты - циклогенсандиамин- бента, инкубацию иммуносорбента с

тетрауксусную кислоту.анализируемыми пробами, внесение

Данные йо осуществлению примера 2специфического конъюгата, антигена

|представлены в табл. 2. .или антитела, меченного хелатом

Таким образом, предварительнаяю лантанидз, добавление усиливающего

обработка твердой фазы поликарбоно-раствора, считьшание результатов,

вой кислотой и солью кальция передо тлича щийся тем, что,

: .«анесением специфического коньюгатас целью повышения чувствительности,

,позволяе-т увеличить соотношениеинкубацию проводят в буферном растI15 воре, содержащем ионы кальция и

- . ,ГГУ.-Г м Г

довательно, повысить чувствительность ции 10-г - 10 М/л и 10 lO Л,и- определения при проведении иммуноана- саответственно.

лиза.

20

Таблица 1

„сигнал опыта.„ „

КонцентрацияОтношениепри ELAM-Eu,

,сигнал контроля

поликарбоновых

мкг на лунку кислот и хлрри-

да калыщя, М/л | -|--- о бб о 2Г о 07з 0 02Г

10- 5ЭДТА16,381„3 G5,8 82,6 77,9 25.,7

ld-sCadi

10 ДТРА17,6 65,6 75,3 70,5 47 16,3

10-3caCli

10 эЭДТА16,7 62,2. 74,1 66,8 55,2 20,4

10-2саС1г

10- ЭДТА1.8,1 52,4 64,3 48,8 29,8 14,7

10 зCaCl2

Т а б л и ц а 2

RAM-EU, мкг62 I 0,66 0,22 0,073 0,024

на лунку

Сигнал опыта ,-п о-7 -ILL / -на 101 4(1/

, 68,7 7Ь,4 71,5 48,4 16,4

Сигнал контроля

Составитель А. Горбатов

Редактор М. Циткина - Текред Л.Сердюкова Корректор М. Пожо

Заказ 4117Тираж 511Подписное

ВНШШИ государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР. 113035, Москва, Ж-ЗЗ. Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород ул. Гагарина Ю

Изобретение относится к иммунологическому анализу и может быть использовано в биологии, медицине и сельском хозяйстве для определения биологически активных веществ. Целью изобретения является повышение чувствительности диссоционно-усиленного лантанидного флуоресцентного иммуноанализа. Для этого твердая фаза предварительно обрабатывается перед внесением специфического конъюгата антитела или антигена, меченного хелатом лантанида, буферным раствором, содержащим поликарбоновую кислоту (10^-3 - 10^-5 М/л) и ионы кальция (10^-2 - 10^-4 М/л). 2 табл.