Способ дифференциальной диагностики туберкулеза и острой пневмонии Советский патент 1990 года по МПК G01N33/68 

вают, осадок отмьшают 3 раза и оса- i док эритроцитарный мембран матового

Гх , :.

1 цвета используют в опытах.

: Суспензию эритроцитарных мембран инкубируют в стайдартной смеси, состоящей из Oj3 мл 12 X соли Мора, 0,3 мл 2 X пирофосфата и 0,.3 мл 1 Ш НАДФН2. Реакцию запускаю добавлением 0,t мп суспензии мембран

; .эритроцитов. Инкубацию проводят в воI дяной бане при t 37°С s течение

: 20 мин. Реакцию останавливают добав: лением Т мл 30%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Осадок удаляют центри

фугированием в течение 10 мин при 6000 об/мин. Для развития окраски пробирки со смесью надосадочной жидкости и тиобарбитуровой кислоты (ТБК) помещают в водяную баню при t и инкубируют 10 мин, Из: меряют оптическую плотность на спектрофотометре при 535 нм. Скорость перекисного окисления вьфажают в нан молях на 1 мг белка..

Для определения активности супер- оксиддисмутазы (СОД) в эритроцитах из 1 мл гепаринированной венозной крови выделяют эритроциты путем центрифугирования 5 мин при lOOO об/мин

при t , Плазму отбрасывают, эритроциты промьгоают 10 мл холодного физиологического раствора, отделяют повторным центрифугировашем при 3000 об/мин в течение 5 мин. Гемо- Л11;з проводят добавлением 5 мл ди: стиллированной воды с последующим взбалтыванием в течение 5 мин, К су- пернатанту добавляют двухзамещенный фосфат калия, смесь этанол:хлоре- формг вода, интенсивно перемешивают: и оставляют до расслоения на две фазы: верхнюю - водно-спиртовую и нижнюю - хлороформную. Водно-спирто- вьй слой имеет отчетливую желто- зеленую .окраску, обусловленную эрит- рокупреином, проявляющим супероксвд- дисмутазную активность, В полученном препарате опред,еляют ферментативную

; активность по методу, основанному i на измерении степени торможения скорости окрашивания нитротетразолия синего. Реакционная смесь объемом . ,5 мл содержит, мкмоль: пирофосфаткая смесь 16; ЭДТА 7, нитротетраз-рлий синий, 50, феназинметасульфат 4,5, НАДФН 50 и экстракт с исследуемым

. ферментом. За единицу активности СОД принимают количество ферментвд

которое тормозит степень обесцвечивания нитротетразолия синего из 50%. Активность фермента СОД выражают в единицах на 1 мл крови.

Пример 1, Больная А, при поступлении отмечала фебрршитет, неболшую одышку в покое, частые воспалительные заболевания дыхательных путе в прошлом, при физикальном исследовании легких отмечалось притупление перкуторного звука, звучные влажные и сухие хрипы, -Процесс рентгенологичес ки имел верхнедолевое расположение,, структура корня легкого была измене- .на. Проба Манту - 6 мм. Микробактери туребкулеза не были обнаружены. При иммунологическом исследовании; уровень Е-РОК составлял 19,2%, процент бластовпо РБТЛ на фитогемагглютинин 26%, на туберкулин 1,3%. При специальном биохимическом исследовании установлено: уровень ПОЛ равен 7,2 нМ, активность СОД составляет 179,1 ЕД (в пределах нормы). На основании клинико-рентгенологических, биохимических, иммунологических показате- .гтай бьша дршгностирована острая пневмония. Через 20 дней после пробной антибактериальной терапии препаратами широкого спектра действия наблюдалось полное рассасывание инфильтра тивных изменений,

П р и м е р 2, Вольная Т, при поступлении отмечался субфебрилитет, кашель, слабость. При физикальном исследовании - притупление перкуторного звука, единичные влажные хрипы, Процесс имел верхнедолевое расположение в S, S. Реакция Манту г- 10 1У1М. При иммунологическом исследовании: уровень Е-РОК 33%, процент бластов по РБТЛ на фитогемагглютинин 35%, на туберкулин 1j7%. Уровень ПОЛ составлял 9,1 нМ, активность СОД 172,5 ЕД (ниже нормы). На основании клинико-рентгенологических и лабораторных; данных был диагностирован инфильтративный туберкулез легких. Назначена противотуберкулезная терапия, на фоне которой наступило улучшение, уменьшились явления -интоксика- и;ии. Рост мккробактерий тубсфкулеза через 2 мае выявил положительные результаты.

Прим е р 3, Больной Д., 28 лет Состояние больного при поступлении в клинику среднетяжелое. Жалобы на .кашель с небольшим-количеством мо1

кроты, слабость, потливость, повышение температуры до STjS C. При физи- кальном исследовании легких отмечалось некоторое ослабление дыхания, единичные влажные хрипы Реакция на пробу Манту с 2 ТЕ - папула 6 мм. В мокроте методом посева микробактерии не обнаружены. Рентгенологически; полиморфные спивающиеся тени в области верхней доли правого легкого. Для проведения дифференциальной диагност ки проводились дополнительные биохимические исследования: уровень ПОЛ 8,9 нМ, активность СОД 172,0 ЕД. На основании клинико-рентгенологических исследований, а также данных специального биохимического исследования на 5-й день поступления бып поставле диагноз инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого. Проведено противотуберкулезное лечение.

П р и м е р 4. Больной Г., 46 лет .Состояние больного при поступлении в клинику было удовлетворительным, температура в пределах нормы. Жалобы на сухой кашель. При физикальном исследовании легких на фоне ослабления дькания выслушивались единичные влажные хрипы. Реакция на пробу Манту с 2 ТЕ 10 мм. В мокроте методом посева микробактерии туберкулеза не обнаружены. Рентгенологически: неоднородное затемнение верхней доли правого легкого,

Спе1щальное биохимическое исследование выявило повышение активности ПОЛ до 9,5. Hl-1 и снижение активности СОД до 173,0 ЕД.

На: основании клинико-рентгенологи- ческого исследования, а также дополнительных биохимических исследований на 3-й день был поставлен диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого.

П р и м е р 5, Больной А., 3 лет. Состояние среднетяжелое. Жajioбы на кашель с мокротой, одьшку в покое, повышение температуры до 38,. При физикальном исследовании легких отмечалось притупление перкуторного звука сухие влажные хрипы. Реакщя на пробу Манту с 2 ТЕ - nanyns В мм. Рентгенологически: гомогенное затемнение верхней доли правого легкого, изменение структуры корня легкого. При ,специальном биохимическом исследова- НИИ установлено: уровень ПОЛ равен 7,2 Hl-1, что значительно ниже значе7382- 6

ния, полученного у больного туберку- лезом, активность составляет 179,1 ЕД (в пределах нормы).

Диагноз; острая пневмония (крупозная) .

Пример 6. Больная Г., 45 лет. Состояние больной среднетяжелое.- Жалобы на кашель с мокротой, одьшку. 10 При фнзикальном исследовании отмечается гфитутшение перкуторного звука, влажные хрипы. Реакция на пробу Манту отрицательная.

Рентгенологически: гомогенное за- jt темнение Sj правого легкого. При

специальном биохимическом исследовании наблюдалось повышение уровня ПОЛ до 7,2 нМ, активность СОД равна 179,0 ЕД, Диагноз: острая пневмо- 0 ния,

Материал подвергали статистической обработке методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента. На основе статистической 5 обработки выбрали границы значений уровня ПОЛ и активности СОД. При пневмонии уровень ПОЛ 7,3 ± 0,14, , 00.1, активность СОД .179,5 ± ±0,1, Р 0,05, Пр1г туберкулезе 0 ПОЛ 9,2 + 0,16, ..001,,СОД 172,5 ± О ,3, Р с 0,05. Контрольные величины (доноры) ПОЛ 4,3 ± 0,18, СОД 130,0 t 0,59, где Р - достоверность по сравнению с контролем.

Анализировали значения указанных показателей,у 79 больных туберкулезом и у 67 больных острой пневмонией. По этим данным частота положительнык случаев, т.е. совпадение диагноза, Q поставленного по предложенному способу, с окончательным диагнозом состав- лтет 92 + З;, частота отрицательных случаев составляет 5+2%, процент ложноположительных - 3 + 2%. Точность 5 прототипа составляет 63,5%.

Использование предложенного способа позволяет на .ранней стадии с большой точностью установить диагноз заболевания и тем самым начать свое- Q временное адекватное лечение. Способ прост в исполнении.

5

Формула изобретения

сеСпособ дифферекцмальной диагнос ики туберкулеза и острой пневмонии путем биохимического исследования крови больного, отличающий- с я тем, что, с целью повышения точ716173828

иосгтй способа и его ускорения, в мемб-и активности супероксиддисмутазы

ранах эритроцитов определяют содёр-171,0-174,0 ЕД диагностируют туберкужание ТБК-активных продуктов пере--лез, а при значениях продуктов перекисного окисления липвдов и активностькислого окисления липидов 7,0-7,5 нМ

супероксиддисмутазы и при значенияхи супероксиддисмутазы 119,0-180,0 ЕД.

ТБК-активных продуктов 8,9-9,5 нМострую цневмонию.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при дифференциальной диагностике туберкулеза и острой пневмонии. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. Для этого из 2 мл венозной крови выделяют эритроциты, получают тени эритроцитов путем их гемолиза с последующим отмыванием мембран от гемоглобина и определяют содержание ТБК-активных продуктов в мембранах эритроцитов. В другой порции теней эритроцитов определяют активность супероксиддисмутазы (СОД). Для этого к теням добавляют смесь этанол-хлороформ-вода, встряхивают и отстаивают до разделения фаз. Затем в водно-спиртовой фазе определяют супероксиддисмутазную активность по торможению восстановления НСТ. При значениях ТБК-активных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) 8,9-9,5 нМ на 1 мг белка и активности СОД 171-174 ЕД диагностируют туберкулез, а при значениях продуктов ПОЛ 7,0-7,5 нМ и активности СОД 179-180 ЕД - острую пневмонию. Использование изобретения позволяет установить диагноз в более ранние сроки и повысить точность дифференциальной диагностики до 92%.