Скрининг системных препаратов против фитонематод Советский патент 1991 года по МПК A01N63/00 G01N33/48 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к защите растений от вредителей и болезней, и может быть использовано при отборе активнодействующих соединений системных нематицидов для борьбы с гельминтами растений.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения системных препаратов, сокращение сроков поиска и снижение трудоемкости исследования.

Способ заключается в следующем.

Испытуемый препарат в 0,1-1%-ной концентрации вводят в питательную среду, затем высевают гриб Alternarla tenuls или Fitsarium oxysporum на 4-й день вносят 100 половозрелых нематод, действие препарата определяют визуально по окраске гриба и путем подсчета нематод в течение 6 дней.

Выбор срока внесения нематод (4-й день) обоснован тем. что этот срок является оптимальным для роста гриба Alternaria tenuis и для проведения оценки действия испытуемых препаратов. Более ранний срок (т.е. до 4-го дня) нежелателен, так как мицелий гриба еще недостаточно развит, а в более поздние сроки происходит старение гриба, что приводит к изменению его окраски.

Пример1.В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат карбофуран л 0,1%-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternarla tenuls. предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят по 100 немаО

ю о о

VJ

N3

тод в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 2. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат карбофуран в 0,5%-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternaria tenuls, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

ПримерЗ. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат карбофурана в 1%-ной концентрации по 0,3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternaria tenufs, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба в f мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.

П р и м е р 4. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат в 0,1%-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternaria tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 5. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат видат в 0,5%-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternaria tenuls, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 6. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат видат в 1%-ной концентрации по 0,3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба Alternaria tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют ви0 зуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.

В табл. 1 представлены сравнительные данные по испытанию препаратов в концентрации 0,1-1%.

5 - Пример. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в 0,1%-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки

0 проводят посев гриба A. tenuls, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод в каждую пробирку и выдерживают при

5 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод {в процентах) в течение 6 сут.

Примерб. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вно0 сят испытуемый препарат тиабендазол в 0,5%-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба A. tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000

5 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через

0 каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 9. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в

5 1%-ной концентрации по 0,3 мя в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба A. tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной

0 воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах)

5 в течение 6 сут.

ПримерЮ. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 0,1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба A, tenuls,

предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey, в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность 5 препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 11. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вно- 10 сят испытуемый препарат ДДВФ по 0,5 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба A. tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистилли- 15 рованной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процен- 20 тах) в течение 6 сут,

Пример12. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти 25 пробирки проводят посев гриба A. tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку и 30 выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

П р и м е р 13. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл про- 35 водят посев гриба A. tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку, затем вносят 40 испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по 0,1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.45

П р и м е р 14. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба A. tenuis, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. 50 Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по 0,5 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов опре- 55 деля ют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

П р и м е р 15. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба A. tenuis, предварительно

получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по 1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.

Пример 16. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в 0,1 %-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку. через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum,предварительно получив споры из расчета 2000- 3000 тыс. счор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.

Пример 7. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабендазол в 0,5%-ной концентрации по 0,4 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000- 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример18. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат тиабенд зол в 1 %-ной концентрации по 0.3 мл в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000- 3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды, Через четыре дня вносят по 100 нематод A. bess.ey в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.

Пример 9. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 0,1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через А дня вносят no tOO нематод A. bessey в каждую

пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение б сут.

Пример 20. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 0,5 мгв каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят по 100 нематод А. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример21.В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл вносят испытуемый препарат ДДВФ по 1 мг в каждую пробирку, затем через 2 ч в эти пробирки проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды, Через 4 дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют визуально и через каждые 24 ч по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

П р и м е р 22. В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба F, oxysporum, предварительно получив спори из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной воды.Через 4 дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по 0,1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 23.В пробирки со средой картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба- F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба Е 1 мл дистиллированной воды. Через 4 дня вносят по 100 нематод A. bessey в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по

0,5 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25°С. Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут.

Пример 24. В пробирки со средой

картофельного агара в количестве 8 мл проводят посев гриба F. oxysporum, предварительно получив споры из расчета 2000-3000 тыс. спор гриба в 1 мл дистиллированной

воды. Через четыре дня вносят по 100 нематод А. bessey в каждую пробирку, затем вносят испытуемый препарат ДДВФ (прототип) по 1 мг в каждую пробирку и выдерживают при 25°С.

В табл. 2 приведены результаты сравнительных исследований известного и предлагаемого способов отбора нематицидов.

Эффективность препаратов определяют по гибели нематод (в процентах) в течение 6 сут. Во всех примерах контролем служила питательная среда для культивирования гриба без внесения в нее каких-либо химических веществ.

Таким образом, предлагаемый способ

позволяет быстро и эффективно производить отбор нематицидных препаратов системного действия.

Анализируя данные табл. 2, можно также сделать вывод, что/ вид гриба (A. tenuls

или F. okysporum) не влияет на достижение поставленной цели, так как оба вида гриба являются хорошим субстратом для жизнедеятельности рисовой листовой нематоды A, bessey.

Формула изобретения

Скрининг системных препаратов против фитонематод, включающий посев фитопатогенного микроскопического гриба на твердую питательную среду, культивирование гриба до образования мицелия, внесение патогенных фитонематод и исследуемого нематицида, инкубирование с

последующей оценкой результатов по гибели фитонематод, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, сокращения срока и снижения трудоемкости, исследуемый нематицид вводят

непосредственно в среду перед посевом микроскопического гриба.

Таблица 1

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно защите растений от вредителей и болезней, и может быть испол -зо- вано при отборе активнодействующих соединений системных немотицидов для борьбы с гельминтами растений. Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения системных препаратов, сокращение сроков поиска и снижение трудоемкости исследования. Испытуемый препарат вводят непосредственно в питательную среду, затем засевают гриб или Alternarla tenuls или. Fusarium oxysporum и на 4тй день вносят 100 поло-, возрелых нематод.Количесгво погибших не- матод подсчитывают в течение 6 дней.На примере препарата ДДВФ показано, что по предлагаемому методу оценки от 1 мг препарата из 100 испытуемых нематод гибнет на сутки 100% от 0,5 мг 99% и от 0,1 мг 91 %, а по известному методу оценки - от 1; 0,5 и 0,1 мг препарата 25, 14 и 10% соответственно. 2 табл.

Таблица 2

Продолжение табл.2